HPLC/MS/MS 法检测人全血中的氟胺酮

谢明清 林树海 陈永锋

（东莞市公安司法鉴定中心，广东 东莞523126）

近两年，公安部门在侦办涉毒案件中，屡屡查获一种含有氟胺酮的无色透明晶体，这种晶体外观和冰毒极其相似，肉眼无法区分。国内尚无资料记载氟胺酮对人体是否具有类似氯胺酮一样的危害性，但它的滥用务必引起人们的警惕。氟胺酮目前不属于国家管制药物，这给公安部门办理这类案件带来一定的困难。

氟胺酮（F-Ketamine），化学名称为α-邻氟苯基-2-甲胺基-环己酮，分子结构与氯胺酮高度相似，只是其中的-Cl 基团被-F 所取代。初步药理实验表明氟胺酮具有与氯胺酮类似的麻醉活性，是一种新的麻醉活性物质［1］。氟胺酮的临床医学应用目前国内鲜有记载，对人是否具有毒品的危害性和依赖性还不明确，其药用价值和对人的作用有待进一步研究。

目前，有关氟胺酮的检测方法报道有气质联用法［2］，该方法主要针对体外检材，而生物检材中氟胺酮的检测方法暂时未见报道。因此，建立一种快速、可靠的检测生物体内氟胺酮的方法在司法鉴定实践中具有重要的意义。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

AB SCIEX Exion 液相色谱仪/QTRAP4500质谱仪；Millipore 超纯水仪；涡旋振荡器；高速离心机；氮吹仪；0.22μm微孔滤膜。

甲醇、乙腈均为LC-MS 级；甲酸、醋酸铵均为HPLC；超纯水；氟胺酮标准品（A Chem⁃tek,USA）。

1.2 仪器条件

色谱条件：BEH C18柱 （2.1mm × 50mm，1.7μm）；流速0.4mL/min；进样量2μL；洗脱梯度（见表1）。

表1 洗脱梯度

质谱条件：ESI源；正离子扫描模式；气帘气30psi；碰撞气medium；喷雾电压5500v；温度550℃；喷雾气55psi；辅助加热气55psi；DP/CE电压（见表2）。

表2 DP/CE电压

1.3 样品前处理

取新鲜空白人全血，制成含氟胺酮0.0、0.1、1.0、10.0、100.0、200.0、400.0ng/mL系列浓度的血样，待处理。

取血样0.5mL 于试管中，加1mL 乙腈沉淀蛋白，涡旋振荡5min，超声10min，高速离心取上清液，0.22μm微孔滤膜过滤后进样。

2 结果与讨论

2.1 流动相选择

考察了甲醇、乙腈、纯水、0.1%甲酸水溶液和5mmol/L 醋酸铵水溶液作为流动相对氟胺酮保留时间的影响（见表3）和对峰形（见图1）的影响。

表3 流动相对保留时间的影响

实验结果显示，用纯水作无机相时，氟胺酮的出峰时间相对较长且不稳定。用0.1%甲酸水溶液或5mmol/L 醋酸铵水溶液作无机相、甲醇或乙腈作有机相，出峰时间快且稳定。综合考虑各因素，本实验选择5mmol/L 醋酸铵溶液和乙腈作流动相。

图1 人全血中氟胺酮色谱图（乙腈-5mmol/L醋酸铵水溶液作流动相）

2.2 线性范围和检测限

取0.1～400.0ng/mL 序列浓度的血样，经前处理后，以乙腈-5mmol/L 醋酸铵水溶液作流动相，表1 的梯度洗脱，进样分析。以峰面积对血样中氟胺酮浓度作标准曲线，得出氟胺酮的线性 方 程 为 y=51895.6x+64569.3， r=0.99967，线性范围为0.1～200ng/mL，检出浓度为0.05ng/mL时，S/N＞10时。

2.3 基质效应、回收率和过程效率

按照 Matuszewski 提出的方法［4］，选用 5 个不同来源的空白基质，采用高低2 个浓度点，比较3 个不同Set 条件下的峰面积平均值。其中，Set1 为标准溶液，Set2 为不同来源的基质提取后添加，Set3 为不同来源的基质提取前添加，则基质效应（ME）=Set2/Set1，提取回收率（RE）=Set3/Set2，方法过程效率（PE）=Set3/Set1。结果如表4所示。

表4 基质效应、回收率和过程效率

从实验所选的10.0ng/mL和200.0ng/mL 2个浓度点分析，结果显示方法提取率高，基质效应小，完全适应司法鉴定实践中的工作需求。

2.4 离子对的选择

在所选质谱条件下，检测氟胺酮的离子对有222.2/163.3、222.2/191.3、222.2/204.3、222.2/109.2 可 供 选 择 ， 但 222.2/163.3 基 线 不 平 稳 、222.2/204.3 响应偏低，因此实验选择基线平稳且响应较好的 222.2/109.2 和 222.2/191.3 作为定性、定量离子对。

2.5 专属性试验

取空白人全血，经前处理后进样分析，考察方法专属性。实验表明空白人全血对氟胺酮检测无干扰，基线平稳，空白谱图如图2所示。

图2 空白人全血色谱图

3 结论

采用HPLC/MS/MS 法检测人全血中的氟胺酮，血样经乙腈沉淀蛋白，高速离心后过滤膜，用C18作为分离柱，乙腈-5mmol/L醋酸铵水溶液梯度洗脱，正离子扫描模式进行分析，方法稳定性好，样品的前处理简单，分析快速，提取率高，基质效应小，检测限低，方法专属性强，适用司法鉴定实践中对血液中氟胺酮的定性定量检测。