全自动HE 染色封片质量的影响因素分析

苏哲彬

（中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院 福建 福州 350025）

病理切片指的是应用病理组织学方法将包埋在石蜡块里的病变组织进行染色，然后采用显微镜进一步检查病变并作出病理诊断的过程。全自动HE 染色指的是采用苏木素和伊红对组织细胞进行染色来区分细胞的形态的过程，能实现对细胞水肿、变性、坏死以及炎性细胞浸润等异常病理学改变的鉴定[1]。然而采用HE 染色方法对病理切片进行染色，依然会存在染色质量不佳的情况，而病理切片的质量会直接影响诊断的准确性和及时性。目前临床上关于影响全自动HE 染色封片质量不佳的因素鲜有报道。现以我院病理科制作的并采用全自动HE 染色封片的病理切片作为研究对象，对病理切片的观察指标进行单因素和多因素分析，找出影响全自动染色封片质量的因素。现将研究结果报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选择2018 年1 月—2019 年6 月我院病理科制作的并采用全自动HE 染色封片的病理切片410 片作为研究对象，纳入标准：①病理学确诊为肿瘤或正常组织；②能够获取足够的组织标本；③是经外检诊断之后剩余的组织样本。

1.2 方法

1.2.1 全自动HE 染色

全自动HE 染色封片机对病理切片的染色过程：①采用二甲苯对切片去蜡；②采用酒精对切片脱水清洗；③采用苏木紫液染色；④采用盐酸酸洗；⑤在流水上进行浸润清洗，使得细胞核变成蓝色；⑥采用伊红液色染色，再使用酒精清洗；⑦采用二甲苯展开透明；⑧盖片和封片、贴注标签。

1.2.2 切片质量评估标准

切片质量从切片完整、厚度均匀、裂痕、褶皱、污染物、存在气泡或外溢胶液、透明度、染色清晰、裱贴、编号、标签这十项的评分来评估，每项满分为十分，总分一百分，得分越高切片质量越好。切片的分级标准为：≥90 分评为甲级片；75 ～89 分评为乙级片；60 ～74 分评为丙级片；≤59 分评为丁级片。将368 片甲级片和乙级片纳入对照组，将42 片丙级片和丁级片纳入观察组。

1.3 观察指标

观察两组切片的固定液、染色时间、温度、酒精分色时间、切片残余石蜡、脱水试剂、组织厚度、脱水机处理组织不当等。

1.4 统计学方法

使用SPSS23.0软件进行数据统计，计数资料用[n（%）]表示，采用χ2检验进行比较；采用单因素分析及多因素回归分析找出全自动HE 染色封片质量的影响因素，以P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 全自动HE 染色封片质量的单因素分析

单因素结果表明：两组的固定液、染色时间、温度、酒精分色时间、切片残余石蜡、脱水机处理组织不当相比较，有统计学差异（P＜0.05）,见表1。

表1 单因素分析[n(%)]

2.2 全自动HE 染色封片质量的多因素分析

以单因素分析中具有统计学意义的影响因素（固定液、染色时间、温度、酒精分色时间、切片残余石蜡、脱水机处理组织不当）为自变量，以封片质量为因变量。多因素分析结果显示：全自动HE 染色封片质量不佳的保护因素是固定液为AAF 液，危险因素是温度＜25℃或＞30℃、切片残余石蜡、脱水机处理组织不当（P＜0.05），见表2。

表2 多因素分析

3.讨论

全自动HE 染色具有染色质量好、效率高、操作简单等优势，被广泛应用于病理切片染色。

本研究发现全自动HE 染色封片质量不佳的保护因素是固定液为AAF 液，危险因素是温度＜25℃或＞30℃、切片残余石蜡、脱水机处理组织不当。AAF 液的成分包含甲醛、乙醇、冰醋酸等，冰醋酸能够实现快速固定组织的功能，甲醛能够使得固定均匀，甲醛和乙醇的共同作用能够有效对组织进行脱水，使得切片组织能较好的保持原本的形态，进而使得封片质量较好[2]。而丙醇单独作为固定液时，能实现完全沉淀蛋白质的作用，但对细胞核的固定作用较差，使得染色效果较差；乙醇单独作为固定液时，能较好的固定切片组织和沉淀蛋白质，但沉淀的核蛋白在水中会被溶解，使得切片组织染色质量不好。当温度＜25℃或＞30℃时，会导致染液变性、沉淀、凝固，最后导致封片质量不佳。所以应当将病理切片以及染料放入恒温培养箱内保持在最佳的染色温度。当病理切片上有石蜡残余时，会出现苏木素-伊红染色时不着色、苏木素染色不理想、伊红发生褪色等问题，导致封片质量不佳。所以，应当使用二甲苯对蜡块组织进行多次脱蜡，进行染色前检查病理切片上的石蜡是否已经清除干净[3]。当室内温度较低或试剂更换不及时会导致在酒精脱水环节和二甲苯脱酒精环节出现脱水机处理组织不当的情况，从而引起组织的不完全浸蜡，使得组织脱水后仍然存在甲酸、酒精、水分等杂质，当对切片组织进行烤片时，在细胞表面黏附的石蜡会浸入细胞内并且难以脱出，导致病理切片进行染色时，浸入细胞内的石蜡会阻挡水溶性染色液的浸入，使得病理切片部分区域无法染色，导致封片质量较差[4-5]。

综上所述，全自动HE 染色封片质量不佳的保护因素是固定液为AAF 液，危险因素是温度＜25℃或＞30℃、切片残余石蜡、脱水机处理组织不当，应选择AAF 液作为切片组织的固定液，将病理切片以及染料放入恒温培养箱，进行染色前清除干净病理切片上的石蜡。