啮齿类动物及大实验动物骨髓涂片的过程及意义

王晓娜

（沈阳沈化院测试技术有限公司，辽宁沈阳 110000）

1 啮齿类动物骨髓涂片的过程

1.1 骨髓标本的采集

（1）在载玻片上注明动物号，在其一端滴一滴（约50µl）的胎牛血清，用于稀释骨髓。

（2）将试验动物充分放血后，立即剪去其胸骨或者股骨，剃去多余的肌肉并处理好血污。

（3）当取胸骨骨髓时；取第一节或者第二节胸骨，挤出骨髓，点在已经滴了胎牛血清的载玻片上，充分混匀后进行推片。

（4）当取股骨骨髓时：取出股骨内骨髓，点在已经滴了胎牛血清的载玻片上，充分混匀后进行推片。

1.2 制片

常规推片：每次根据实验要求推相应张数，涂片要迅速，以防止其凝固。

1.3 染色

选取一张推片良好的进行染色。将玻片置于染色架上，滴加染液3～5滴（约0.5～1.0ml），使其迅速盖满血膜。约1min后，滴加缓冲液5～10滴（1.0～2.0ml），轻轻摇动玻片或者对准玻片吹气，与染液充分混匀。1h后用水冲去染液，待干。

注意事项：切勿将染液混入水，以免产生沉淀。染色时间视染料浓度、室温及其他一些条件有所增减。染色过浅的时候可复染，染色过深，可用甲醇脱色后进行复染。

1.4 镜检

（1）用低倍显微镜判断骨髓增生深度，估计巨核细胞系统增生情况，观察涂片边缘、尾部、骨髓小粒周围，有无体积较大或者成堆分布的异常细胞。

（2）选择细胞分布均匀、染色良好的片段，在油镜下观察500个细胞，按照细胞种类，发育的阶段分别计数，并计算它们各自的百分率。然后计算出粒红比例（各阶段细胞百分率总和与各阶段有核红细胞百分率总和的比例）。

（3）需要时用骨髓直接作染色体分析，骨髓涂片或血液涂片作组织化学染色检查，协助诊断或排除某些疾病。

2 大实验动物骨髓涂片的过程

2.1 活体骨髓采集法

采集骨髓样本之前，首先要计算好麻醉药的量，以保证动物的麻醉深度；将麻醉后的动物放倒平卧后，在髂骨部位剃毛，充分消毒。操作者以左手拇指和食指将穿刺部位两侧皮肤按紧固定，右手持穿刺针与骨棘面垂直，旋刺入髂后上棘，达骨髓腔时有空松感，深度约为针尖达骨膜后再刺入1cm左右。拔出针芯，接10ml干燥注射器，轻轻负压抽取，抽取骨髓液不超过0.3ml，立即置玻片上，并进行涂片，拔出穿刺针，压迫伤口，敷以消毒纱布。

2.2 解剖时骨髓采集法

将动物充分放血后，立即剪取其胸骨或股骨，剃去多余肌肉并处理好血污，锯开胸骨或股骨，挤出骨髓，点在载玻片一端（必要时用胎牛血清稀释），其余步骤同啮齿类动物操作一致。

3 啮齿类动物及大实验动物骨髓涂片的及意义

通过骨髓涂片可以分析骨髓中的细胞数目及其性质，不仅可得出多种血液病的病变情况，而且能够对血液疾病的性质进行一定的鉴别诊断。骨髓作为动物最重要的造血器官，多种血液病往往将导致血细胞发生数量与质量的变化。血小板是由骨髓中的巨核细胞生成，通过对其各项参数分析也能够间接反映出机体骨髓状态，对血液病的诊断具有一定的指示意义，因此骨髓涂片检查对动物白血病、贫血、多发性骨髓病、原发性血小板减少性紫癜等的诊断及病情观察都有决定性意义。此外，某些长毒试验动物在其骨髓中也可以发现瘤细胞（如肺癌、胃癌、前列腺癌等）；某些寄生虫病（如疟疾、黑热病）可在其骨髓中找到寄生虫，而且将骨髓涂片检查与血常规测试结合，更提高了诊断的准确性，这对于动物试验有十分重要的意义。