WT1基因在成人初诊急性髓系白血病不同预后分层中的表达特点

邵晶璇 谢国然 陈宏

WT1 基因是1990年发现于儿童肾母细胞瘤的相关基因[1]，WT1 基因在大多数白血病中也有表达，其既是抑癌基因，同时又具有类癌基因样活性，是与造血细胞增殖和凋亡相关的基因，在血液系统恶性肿瘤的发生、发展中起重要作用，尤其是在急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia，AML）中被认为是白血病基因。目前AML 已进入分层治疗阶段，根据细胞遗传学及基因突变、融合基因等分子生物学标志，将AML 分为低、中、高危三层，针对不同危险分层精准化治疗是取得AML 治疗效果的关键。目前国内外关于WT1 基因的表达与AML 患者治疗反应的关系仍有争议[2，3]。本研究旨在通过分析WT1 基因表达水平在AML 不同亚型、不同预后分层中的情况，探讨WT1 基因是否可以作为协助判断危险分层的指标之一，及WT1表达水平是否对化疗效果有影响。

1 材料与方法

1.1 临床资料选取2016年2月～2021年4月我院收治的初诊成人AML 患者（除M3 亚型）80 例。入选病例中男44 例，女36 例，中位年龄53 岁。按FAB 分型，其中M1 5 例，M2 30 例，M4 9 例，M5 36例；按NCCN 指南AML 预后危险分层标准，分为低、中、高危三组，其中低危组13 例，中危组40 例，高危组27 例。

1.2 治疗方案初诊诱导缓解化疗方案主要选择DA（柔红霉素、阿糖胞苷）、HA（高三尖杉酯碱、阿糖胞苷）和TA（吡柔比星、阿糖胞苷）其中之一，高龄患者选用CAG（阿糖胞苷、阿柔比星、粒细胞刺激因子）。完全缓解后采用中大剂量阿糖胞苷巩固化疗3 个疗程，中、高危组有移植条件的，行异基因造血干细胞移植。

1.3 观察指标接受1～2 个疗程诱导化疗后开始评估CR 率，AML 患者分型标准、化疗疗效标准的判定参照文献[4]。AML 患者预后分组的标准参考美国 NCCN 指南。

1.4 WT1 检测检测利用Taqman 探针荧光定量PCR 方法检测样本中WT1 基因的表达水平，以ABL1 作为内参，用WT1/ABL1 方法计算相对表达量，WT1 的相对表达水平以百分数来表示，≤50%为低表达；>50%为高表达。

1.5 统计学方法采用 SPSS 26.0 软件进行统计学分析，计量资料两组间比较用t检验，多组间比较用ANOVA 方差分析，计数资料的比较采用χ2检验。P<0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AML 初诊时各亚型间WT1 表达情况AML初诊时各亚型间WT1 表达水平：M1 为0.27±0.06，M2为0.39±0.12，M4为1.00±0.33，M5为0.17±0.05。M4 中WT1 的表达水平最高，M5 中最低，四种亚型间WT1 表达水平比较差异无统计学意义（F=1.237，P=0.096）。

2.2 AML 初诊时不同危险分层间WT1 表达情况低危组WT1 表达水平为0.29±0.07，中危组为0.36±0.13，高危组为0.78±0.25。低危组WT1 表达水平最低，高危组最高。低、中危两组WT1 表达水平比较差异无统计学意义（t=1.848，P=0.070），中、高危两组间比较差异有统计学意义（t=8.303，P=0.000），低、高危两组间比较差异有统计学意义（t=8.995，P=0.000）。

2.3 化疗前WT1 高、低表达对诱导缓解化疗的影响化疗前WT1 低表达15 例，诱导缓解化疗后CR 12例，NR 3 例；高表达65 例，诱导缓解化疗后CR 51例，NR 14 例。两组CR 率比较差异无统计学意义（χ2=0.017，P=0.896）。

3 讨论

WT1 基因在人体造血发育过程中起重要作用，正常人可少量表达WT1 基因，但仅在早期造血祖细胞中表达，成熟细胞中不表达。WT1 基因可以调节造血干细胞的数量、生长分化及生存，是双向转录因子，能抑制幼稚细胞的分化，同时也具有癌基因的特性[5]。目前有研究表明，在恶性造血系统疾病中，WT1 基因均异常高表达，在AML 中表达最明显，相比其他类型恶性血液肿瘤有较重要的临床意义[3]。因此近些年来，国内外对WT1 在AML 中的意义开展大量研究，但结论不尽相同。有学者认为，WT1 基因不能作为AML 特异性分子学标志，但大部分学者认为，WT1 基因可作为AML 治疗反应、临床预后的监测指标，特别是在异基因造血干细胞移植患者中，可作为独立预后不良因素[6～10]。本研究旨在通过观察WT1 基因在AML 患者各亚型及各预后分组中表达是否有差异，进一步明确WT1 基因在AML 中的作用。

本研究结果显示，各亚型间WT1 表达水平差异无统计学意义，说明WT1 表达水平在各亚型中无特异性，与既往研究结果一致[11，12]。但目前也有较多研究认为AML 各亚型间WT1 表达水平有差异[13，14]。研究结果的不一致，考虑可能与样本量不同有关，具体原因还有待进一步深入研究。

随着基因技术的发展，目前证实了很多与AML预后相关的融合基因、突变基因，它们影响着AML的治疗效果及预后，NCCN 指南根据基因等检查结果，将AML 患者在治疗前分为低、中、高危三层，不同预后分层的治疗方案有所不同。本研究通过观察不同预后分层中AML 患者WT1 基因表达水平情况，比较各组间是否有差异，明确WT1 基因是否可以作为协助判断预后分层的指标之一。结果显示低、中危两组WT1 基因表达水平比较差异无统计学意义（P>0.05）,中、高危两组WT1 表达水平比较差异有统计学意义（P<0.05）,低、高危两组WT1表达水平比较差异有统计学意义（P<0.05），这与郑玉婷等[12]研究结果一致。说明WT1 基因有可能成为协助判断AML 患者危险分层的指标之一，WT1基因高表达可能为AML 预后不良的因素。

本研究进一步通过初诊时WT1 基因表达水平的高低将入选AML 患者分为WT1 高表达及低表达组，观察不同表达水平的化疗CR 率情况，旨在观察WT1 的表达水平是否对化疗CR 率有影响。结果显示，WT1 高表达的CR 率与低表达的CR 率比较差异无统计学意义（P>0.05），说明初诊时WT1 表达水平对CR 率无明显影响，不能成为影响CR 的因素，但结合本研究WT1 基因在低危组表达水平偏低，考虑治疗前WT1 基因表达高低可能对CR 率无影响，但有可能对于远期OS、EFS 等有影响，目前国内外关于这一点的研究也是结论不一致[12，15，16]，仍需进一步扩大病例数进行验证。

综上所述，初诊时WT1 表达水平在各亚型间无特异性，WT1 基因有可能成为协助判断AML 患者危险分层的指标之一，WT1 基因高表达可能是AML 预后不良的因素，初诊时WT1 表达水平对CR率无明显影响。由于本研究病例数有限，以上结论仍需进一步扩大病例数，延长观察时间加以证实和完善。