猪细小病毒疫苗的研究进展

欧阳海平，潘永飞，宋延华

（广东省云浮市温氏食品集团股份有限公司 527400）

猪细小病毒病是由猪细小病毒（Porcine parvovirus， PPV）引起的母猪繁殖障碍病，主要引起初产母猪流产，产死胎、木乃伊胎及断奶仔猪多系统衰弱综合征等。 猪细小病毒为无囊膜单链线状DNA 病毒，病毒粒子平均直径约20nm。 目前，疫苗接种是有效防控PPV 的主要措施。 国内PPV 商品疫苗均为全病毒灭活苗。 由于PPV 对环境抵抗力强，出于疫苗安全性考虑，灭活手段也在不断改进，但是灭活苗始终有灭活失败的风险。 研发安全、高效的疫苗对清除PPV 尤为关键。因此，人们利用生物技术开发新型基因工程疫苗以克服现有疫苗的缺点。 本文仅就国内的猪细小病毒疫苗研究现状作一综述。

1 猪细小病毒病灭活疫苗

猪细小病毒灭活疫苗是将PPV 感染的细胞培养物通过理化方法处理，使其丧失感染性但仍保持良好的免疫原性，然后加入佐剂乳化制备而成。

目前国内共有18 家企业获得PPV 疫苗批准文号 （表1），毒 株 包 括CP-99 株、S-1 株、BJ-2 株，WH-1 株，NJ 株，CG-05株，YBF01 株，L 株。

2 PPV 基因工程苗

2.1 PPV 亚单位疫苗

PPV VP2 蛋白是最主要的结构蛋白，具有血凝活性，在自然条件下能组装成病毒样颗粒， 诱导机体产生很强的免疫应答反应，是制作亚单位疫苗的潜在蛋白。

陈玉梅等[1]通过优化密码子，使用伴侣蛋白质粒共表达策略，使用原核表达系统成功表达出可溶性的VP2 蛋白，并在体外装配成具有血凝活性的VLPs。 小鼠免疫试验表明制备的VLPs疫苗能刺激机体产生特异性HI 抗体和中和抗体。 宋品等[2]将合成的密码子优化的PPV VP2 基因克隆到带有His 标签和小分子泛素相关修饰物（SUMO）标签的pSMK 表达载体中，在大肠杆菌中表达可溶性VP2 蛋白。对表达的重组融合蛋白，用特异性蛋白酶切除其SUMO 标签，在一定的盐离子条件下，VP2 蛋白可自我组装成VLPs。 李茜等[3]使用Bac-to-Bac 昆虫杆状病毒表达系统表达VP2 蛋白，也能组装成VLPs，免疫BALB/c 小鼠后能刺激小鼠产生抗PPV 的特异性抗体。 这些研究为研制猪细小病毒基因工程疫苗提供了科学依据。

2.2 重组PPV 活载体疫苗

采用弱毒或无毒病原微生物作为表达载体， 对其导入外源抗原基因，制成疫苗后接种动物，诱导机体产生特异性免疫应答反应，这类新型疫苗称为活载体疫苗。

谢永兴等[4]使用同源重组技术表达猪圆环病毒2 型Cap 蛋白和猪细小病毒VP2 蛋白的重组伪狂犬病病毒。 重组病毒感染的PK-15 细胞中能检测到VP2 蛋白， 免疫小鼠后可产生低水平VP2 抗体。付朋飞、宋文博等[5，6]成功构建了PPV VP2 外源抗原基因的重组伪狂犬病毒rPRV-VP2 株。

表1 国内批准销售的PPV 商业化疫苗

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3 PPV 联合疫苗

联合免疫具有一针防多病， 省时省力， 减少猪群应激等优势。目前国内暂无猪细小病毒的联苗获批。根据中国知识产权专利局公开资料显示，2016 年至今，已有多家科研机构申请了猪生殖与呼吸道综合征病毒[7]，猪圆环病毒3 型、猪细小病毒和猪流感三联灭活疫苗[8]，猪伪狂犬病/猪细小病毒病二联灭活疫苗[9]，猪丹毒、猪细小病毒二联灭活疫苗[10]，猪丹毒、猪细小病毒、猪流感病毒三联灭活[11]，猪细小病毒、猪流行性腹泻、大肠埃希氏菌三联疫苗[12]，猪细小病毒和猪流行性腹泻二联灭活疫苗[13]，猪圆环病毒2 型与猪细小病毒二联灭活疫苗[14]相关专利。研究结果表明联苗的免疫保护效果不差于PPV 单苗， 也证实了抗原组合物之间无相互干扰，甚至起到了协同作用。

4 结语

猪细小病毒病仍是当今危害养猪业的一大难题。 猪细小病毒病没有特效的治疗措施，只能靠疫苗接种来防控。 随着分子生物学技术和基因工程技术的不断发展，PPV 新型疫苗研制已经取得了很大进展，相信在不久的将来必将研制出安全、高效、廉价的新型基因工程疫苗。