钼对小鼠丙二醛含量的影响

马英英，张 磊

（1.河南省开封市动物疫病预防控制中心，河南 开封 475000；2.河南省开封市畜产品质量监测检验中心，河南 开封 475000）

钼化合物主要通过食物进入动物及人体主，随之进入血液。进入血中的钼，80%同蛋白结合，进而通过血液运送至肝脏及全身。哺乳动物的肠道中不存在限制吸收钼的屏障，其吸收钼的多少直接与饮料中含钼量有关。一般来说水溶性强的钼化物能被迅速吸收，水溶性低的钼化合物如三氧化钼和钼酸钙，大量给予时，也可由肠道吸收。研究表明，钼与铜、锌、锰等元素之间存在拮抗作用，如果铜、锌、锰含量高，则会干扰或抑制动物吸收钼[1-4]。在动物体内，钼可贮存于骨骼、肝、肌肉中，含1～4 mg·kg-1。动物体内的钼多数结合在酶分子中。其中，肝脏含钼量较稳定，血液中钼含量变动很大。乳汁和被毛中钼含量受摄入量的影响较大。钼有两个主要的排泄途径，肾脏是主要的排泄途径，胆汁也是钼排泄的重要途径。

钼是人体必需的微量元素之一，其在人体内的含量不足9 mg，但有非常重要的生理功能。人的肝中钼含量最高，肾次之。钼能通过尿类、毛发排出。摄入120～240 mg·d-1最佳，缺乏会发生克山病，摄入过多则会造成动脉粥样硬化。钼和肿瘤的发病有关，探究微量元素钼与人体健康的关系也是21世纪生命科学的重要内容之一。

1954年，Hallgron 等报道瑞典高钼牧场放牧牛群发生“腹泻病”。1958年，Cunningham 等报道了加拿大泥炭土质的高钼牧场上的牛群普遍发生以腹泻为主症的“泥炭泻”。Thomson 和Thornton 等先后报道并证实在英国有相当可观的土层下面衬有富钼的海洋黑页岩，使土壤和牧草中含钼富集，从而导致牛羊钼中毒的发生。1976年，Doyle 等报道并证实在加拿大曼尼托巴省中西部的广大地区地下蕴藏富钼页岩和基岩，该地区土壤含钼高达20 μg·g-1，因而该地区和邻近地区经常发生“继发性铜缺乏症”[1]。

本试验通过在实验室条件下建立小鼠的钼暴露模型，研究钼长期暴露小鼠血清中丙二醛（MDA）含量的变化及其代谢情况，为以后的研究提供科学的依据。

1 材料与方法

1.1 试验动物的处理

4组小鼠的处理方法见表1。

表1 4组小鼠的处理方法

F0代小鼠的饲养：选取雌性小鼠40 只和雄性小鼠20 只（F0代），5 d 后，随机分成4 组，每组分别含雌性小鼠10 只和雄性小鼠5 只，并将不同性别的小鼠分开饲养，自由采食相同的基础日粮，但是在饮水中对照组加入0 的钼（以Na2MoO4·2H2O形式），低、中和高钼组分别加入100、200 和400 mg·L-1浓度的钼。4 周以后，每组的雌雄合笼养，产仔后，从每组仔鼠中随机选出雌性小白鼠30 只和雄性小白鼠15 只按原分组给予不同剂量的钼，8周后，再从每组中随机选取10只雌性小白鼠和5只雄性小白鼠合笼饲养。待其产仔，直到小鼠繁殖到第四代（F3代）。对第三代（F2代）、第四代（F3代）小鼠进行眼球采血，血清作为实验指标的测定。

1.2 血清的获取

左手拇、食指抓取小鼠双耳及颈后皮肤，小指固定尾部；中指将小鼠左侧前肢轻压在胸骨心脏部位，无名指按在腹部，捻动拇指，轻压取血侧眼部皮肤，使眼球充血突出；用弯头镊夹取眼球；根据需要捻动拇指与食指的方向，使血液从眼眶内以不同速度垂直流入离心管；同时用左手中指轻按小鼠心脏部位，以加快心脏泵血速度；当血液流尽时，用脱臼法处死小鼠。血液以3500 r·min-1离心10 min，取上清于干净的离心管中，-20 ℃保存备用。

1.2.1 MDA指标的测定

试管口用保鲜薄膜扎紧，混匀，用针头刺1小孔，95 ℃水浴（或用锅开盖煮沸）40 min，取出后流水冷却，然后3000～4000 r·min-1，离心10 min，取上清，523 nm 处，1 cm 光经，蒸馏水调零，测各管吸光度值，具体结果见表2。

表2 丙二醇指标测定步骤

计算公式：血清中MDA 含量（nmol·mL-1）=（10 nmol·mL-1）×样本测试前稀释倍数

1.2.2 数据处理

采用SPSS11.5 统计软件，计量资料行单因素方差分析各染毒组与对照组之间差异的显著性。

2 结 果

2.1 钼暴露一般毒性

在饲喂小鼠过程中，饲喂钼的小鼠与对照组的小鼠无差异，钼400组小鼠在F2代后产子数明显减少，繁殖周期延长且所产子成活率较低，并出现腹泻现象。在解剖过程中，只有高剂量组小鼠的肝脾肿大，肝脏颜色变浅，其他组均未出现明显的外观变化。

2.2 钼暴露对小鼠血清中MDA含量的影响

钼对小鼠血清MDA的影响见表3。

表3 钼对小鼠血清MDA的影响（平均值±标准差）

由表3可见，钼暴露F2代与对照组相比有所增加，但差异不显著（P>0.05），MDA 含量在钼暴露组中呈现先增加后降低的趋势，但是Mo-200组第F2代低于对照组；钼暴露F3代呈先增后降趋势，差异不显著（P>0.05），但Mo-200 组第F3代低于对照组；同等钼剂量暴露下，第F3代高于第F2代且差异不显著（P>0.05）。

3 讨 论

钼是动物、植物、微生物及人类必需的微量元素，是黄嘌呤氧化酶，醛氧化酶、亚硫酸氧化酶的组成成分，钼主要是通过影响这些酶的合成和活性来实现其生物学功能，但过量的钼可导致动物中毒。超氧化物歧化酶（SOD）是一类广泛存在于动、植物及微生物中的含金属酶类。在正常生理状态下，体内超氧阴离子的产生与清除是平衡的，当超氧阴离子产生过多时，会对机体产生毒害作用。SOD催化超氧阴离子转化为水和氧气的反应，发生歧化反应，从而清除自由基，在生命体的自我保护系统中起着重要的作用，在免疫系统中也有重要的功能。

MDA 主要是过氧化脂质分解代谢的产物，与机体自由基产生量成正比。而SOD 是氧自由基的强力清除剂，过量的自由基在体内不能被及时清除，即可攻击细胞膜上的不饱和脂肪酸，导致细胞膜脂质过氧化，从而脂质过氧化产物MDA 含量增加，故测定MDA 含量常常可以反映机体细胞受自由基攻击和脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞损伤程度的严重性[3]。本试验结果表明，血清中MDA 含量与对照组相比有所增加。表明血管壁中出现氧化应激反应，过量的自由基和脂质过氧化产物攻击细胞膜，使之发生过氧化损伤，血管壁细胞微绒毛、线粒体和内质网等膜结构的损伤可能是受过氧化物攻击的结果。