FISH和IHC法检测乳腺癌HER2基因一致性及其临床意义

孟亚飞，朱林琳，梁国栋，迟丽丽，高紫薇，王杨杨，高莉丽，包海龙

（内蒙古呼伦贝尔市人民医院 病理科，内蒙古 呼伦贝尔）

0 引言

HER2（Human Epidermal Growth Factor Receptor 2）又称为c-erbB-2基因，在促癌因素作用下参与正常细胞生长发育，会导致其突变、扩增形成恶性肿瘤[1]。HER2基因是乳腺癌患者进行靶向治疗的重要靶点，对HER2基因扩增进行研究能够指导乳腺癌治疗方案制定和预后评估，能够快速准确选择靶向治疗药物，提高治疗效果[2]。乳腺癌患者HER2基因扩增和蛋白过表达是患者预后较差、生存期较短的重要标记，分别采用IHC（Iimmunohistoclemistry）、FISH（Fluorescence in Situ Hybridization）法对患者HER2进行蛋白表达、基因检测能够为临床诊断、治疗提供准确指导[3]。本文选取2年间收集的50例患者资料，比较两种检测技术的临床应用价值和一致性，具体如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取本院2018年5月至2020年5月，收集的乳腺癌患者组织标本和资料，患者均未行术前新辅助化疗，共50例。患者均为女性，年龄36～75岁，平均（49.63±5.62）岁，中位数51岁。乳腺癌类型：浸润性小叶癌3例，浸润性导管癌42，导管原位癌5例。组织学分级：Ⅰ级6例，Ⅱ级23例，Ⅲ级21例。

1.2 IHC方法

采用IHC检测HER2蛋白表达，使用即用型非生物素免疫组化试剂盒、鼠抗人单克隆抗体，按照使用说明严格操作[4]。将乳腺癌组织蜡块制成4 μm切片，将载玻片经多聚赖氨酸处理，温水裱片，将切片脱蜡，微波抗原修复。采用PBS洗片并置入浓度3%甲醇H2O2中，加入一抗，放置冰箱。PBS充分洗片，将即用型试剂滴加入切片，放置室温孵育20 min，采用DAB显色，在显微镜下观察信号，苏木素复染、封固，PBS作为阴性对照。

1.3 FISH方法

组织经10%福尔马林固定，组织进行4 μm厚度切片处理，切片在室温下脱蜡水化，100℃沸水煮30 min，采用蛋白酶K消化5 min，采用60℃烘烤5 min，将10 μL探针和杂交缓冲液混合并在85℃水浴箱中变性5 min，脱水后加探针混合物于玻片，置于42℃杂交盒中12 h，取出玻片自然干燥，采用DAPI染色，15 min左右后放置荧光显微镜下观察[5]。

1.4 结果判断

1.4.1 IHC结果

根据美国临床肿瘤协会制定的HER2检测评分指南[6]，肿瘤细胞无着色为阴性（0），肿瘤细胞呈弱性并且胞膜着色不完整，或胞膜染色＜10%（1+），肿瘤细胞染色≥10%并且完整，或≤30%呈强性为阳性（2+），肿瘤细胞膜染色＞30%并且完整呈强性为强阳性（3+）。

1.4.2 FISH结果

在100倍物镜下，采用特异滤光片随机计数20个细胞。单个间期细胞核中绿色和红色信号各2个视为正常细胞，红色信号总数/绿色信号总数＜1.8为阴性（无基因扩增），单个间期细胞核中红色信号超过2个视为HER2基因扩增[7]。

1.5 统计学方法

用软件SPSS 22.0进行数据分析，计数资料采用（%）表示，以χ2检验，若P＜0.05存在统计学意义。采用kappa值（k）评价FISH法与IHC法的一致性，若P＜0.05一致性较高。

2 结果

2.1 病理特征与HER2基因扩增的关系

FISH检测基因扩增阳性率为42.00%（21/50），HER2基因扩增与患者组织性分级密切相关，组织学分级越高HER2基因扩增阳性率越高，存在统计学意义（P＜0.05），HER2基因扩增与患者年龄、肿瘤大小、位置等其他病理特征无关，见表1。

表1 病理特征与HER2基因扩增的关系[n(%)]

2.2 IHC法与FISH法检测一致性对比

采用IHC检测HER2蛋白表达，阳性例数24（48.00%），阳性例数中2+患者14例，其中基因扩增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因扩增9例，符合率90.00%。两种检测方式结果具有较高的一致性，见表2。

表2 IHC法与FISH法检测一致性对比[n(%)]

3 讨论

HER2基因表达在多种类型癌症中出现，例如胃癌、子宫癌、前列腺癌等，其中以乳腺癌为最典型[8]。对乳腺癌患者的HER2基因表达进行研究，可以对患者肿瘤恶性程度、靶向治疗、淋巴转移以及预后起到积极作用，直接影响着患者的诊疗效果和生存期[9]。有国外研究显示，在采用曲妥珠单抗治疗乳腺癌患者时，HER2低表达患者的疗效不确切，而疗效与表达水平呈正比，HER2表达越高疗效越佳。目前根据美国国立综合癌症指南标准，IHC是乳腺癌HER2表达的首选检测方式，而FISH法检查过程人为干扰因素较少，客观标准率较高，则作为HER2检测金标准，大多学者认为应该在IHC法检测基础上进行FISH复查[10]。IHC检测HER2蛋白表达呈2+、3+的样本，可能会出现基因扩增阴性，研究认为这与17号染色体多倍体相关，出现假阳性。基于此，本研究选取50例乳腺癌患者分别进行IHC法和FISH法检测，对比其一致性。

研究显示，FISH检测HER2基因扩增例数21例，占比42.00%，HER2基因扩增阳性与患者组织性分级相关，组织学分级越高HER2基因扩增阳性率越高，P＜0.05；HER2基因扩增与患者年龄、肿瘤大小、位置等因素无关。采用IHC检测HER2蛋白表达，阳性（2+、3+）例数24例，2+患者14例，基因扩增10例，符合率71.43%；3+患者10例，其中基因扩增9例，符合率90.00%，一致性较高。综上，采用IHC和FISH均能够作为乳腺癌的诊断检测手段，具有较高的临床价值，并且两种方式各具特点一致性高。在对IHC表达为1+或2+样本进行诊断时，可采取FISH法复查，提高判断的准确性。