比色法测定远志成分含量研究*

田 盛，吴雨晴，李佳兴，唐 弘，王海波

（辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连116600）

远志为远志科植物远志（Polygala tenuifolia Willd.）或卵叶远志（P. sibirica L.）的干燥根，性温，味苦、辛，归心、肾、肺经，具有安神益智、交通心肾、祛痰消肿的功效[1]。远志含有皂苷类、多糖、生物碱、酮等多种类型化合物成分，有增强学习记忆、抗痴呆、抗衰老、抗氧化、镇静、抗惊厥、抗抑郁、祛痰镇咳、抑菌抗炎、抗诱变、保护心脑血管等多种药理活性，在治疗阿尔茨海默病、抑郁症等神经系统疾病方面具有显著的开发价值[2-7]。本文采用紫外分光光度法对远志的皂苷、多糖、生物碱及酮类成分含量进行测定[8]，为远志药材质量全面评价提供研究支持，更好地保证远志药材临床效果。

1 实验材料

1.1 仪器

TD2002C 型电子天平（天津天马衡基仪器有限公司）；KQ5200DB 型数控超声波清洗器（江苏省昆山市超声仪器有限公司）；AS3120A 型超声波清洗器（奥特赛恩斯仪器有限公司）；JP-1000B-8 型高速多功能粉碎机（永康市久品工贸有限公司）；RE-52A型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；GZX-9070 MBE 电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅实业有限公司医疗设备厂）；紫外分光光度计（日本日立科技有限公司）；石英比色皿（宜兴市伟鑫仪器有限公司）；移液器（20～200μL，100～1000μL，大龙兴创实验仪器（北京）有限公司）。

1.2 试剂与试药

乙醇（AR 天津富宇试剂厂）；甲醇（AR 天津市进丰化工有限公司）；NaOH（AR 辽宁新兴试剂有限公司）；葡萄糖（批号20161026 天津市大茂化学试剂厂）；Al（NO3）3（AR 北京化工厂）；HClO4（批号20180915 天津政成化学制品有限公司）；HAc（批号20181016 天津市大茂化学试剂厂）；香草醛（批号20181024 国药集团化学试剂有限公司）；苯酚（批号1820089 上海阿拉丁试剂有限公司）；溴麝香草酚蓝（批号20180322 天津市大茂化学试剂厂）；浓H2SO4（批号20180907 天津市大茂化学试剂厂）；纯净水（批号20181206 大连辽东半岛饮品有限公司）；盐酸小檗碱（批号20171122 成都曼思特生物制药有限公司）；远志酮ⅢA 对照品（批号20150605 成都曼思特生物制药有限公司）；远志皂苷元对照品（批号20150122 成都曼思特生物科技有限公司）；远志药材来源见表1，经辽宁中医药大学翟延君教授鉴定，为远志科植物远志P. tenuifolia Willd.的干燥根。

表1 远志药材来源信息表Tab.1 Source information of polygala medicinal materials

2 方法与结果

2.1 总皂苷含量测定

（1）对照品溶液制备 取远志皂苷元对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL 含1mg 的溶液，即得。

（2）供试品溶液制备 将不同批次远志分别粉碎后过40 目筛，取远志粉末1g，加入75%乙醇溶液25mL，超声提取50min，滤过，取续滤液备用。

（3）溶液测定 取对照品溶液或供试品溶液适量，置于具塞磨口试管中，精密加入0.2mL 5%香草醛-HAc（现用现配制）、0.8mL HClO4，震荡摇匀，60℃加热 15min 后，冰水中冷却，加入 5mL HAc，摇匀，静置15min 后，580nm 处测定吸光度。

（4）标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液60、65、70、75、80、85、90μL，按 2.1（3）项下方法分别测定。以远志皂苷元的质量X（μg）为横坐标，以吸光度A 为纵坐标，得出回归方程为y=0.0174x-0.7124，r=0.9990，在60～90μg 范围内于吸光度线性关系良好。

（5）测定结果 将（2）项下供试品溶液按（3）项下方法分别测定吸光度，计算总皂苷含量，结果见表2。

表2 样品中各组分含量表（mg·g-1）Tab.2 Contents of each component in the sample

2.2 总多糖含量测定

（1）对照品溶液制备 精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品,加H2O 溶解成0.25mg·mL-1的对照品溶液备用。

（2）供试品溶液制备 分别取不同批次远志粉末30g 加蒸馏水至500mL。加热回流3h，过滤，溶液定容至250mL，精密吸取1mL，加蒸馏水稀释至25mL，备用。

（3）溶液测定 取对照品溶液或供试品溶液适量，置于具塞磨口试管中，加纯净水稀释至1.0mL，精密加入1mL 5%苯酚试液，迅速加入5mL 浓H2SO4，混匀，静置5min，于40℃水浴上加热15min，取出，室温静置20min，于490nm 处测定吸光度。

（4）标准曲线绘制 精密称取对照品溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL 分别置于 6 支具塞磨口试管中，按照2.2（3）项下方法分别测定吸光度。以多糖的质量X（mg）为横坐标，吸光度A 值为纵坐标，得出回归方程 y=8.969x+0.1462，r=0.9990，在 50～250μg 范围内于吸光度线性关系良好。

（5）测定结果 将（2）项下供试品溶液按（3）项下方法分别测定，通过计算得出远志中多糖含量，其测定结果如表2。

2.3 总生物碱含量测定

（1）对照品溶液制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇配制成每1mL 含0.5mg 的对照品溶液，备用。

（2）供试品溶液制备 分别将不同批次远志药材粉碎，过20 目筛，精密称取10g，加入10% HCl 溶液100mL，加热回流2h，过滤，精密吸取滤液20mL，加碱液调pH 值为12，加入氯仿20mL，萃取3 次，合并氯仿液，回收氯仿，残渣加甲醇溶解，备用。

（3）溶液测定 取对照品溶液或供试品溶液适量，加甲醇稀释至1.0mL。加入溴麝香草酚蓝溶液5mL，加入氯仿10mL，萃取3 次，合并氯仿液，加入0.4g 无水Na2SO4除去水分后，于412nm 处测定吸光度。

（4）标准曲线的绘制 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，在分别加入 0.8、0.6、0.4、0.2、0mL 甲醇至溶液至 1mL 溶液，按照 2.3（3）项下方法测定吸光度。以生物碱的质量X（mg）为横坐标，吸光度A 为纵坐标，得出回归方程，y=0.348x+0.0938，r=0.9992，在 100～400μg 范围内于吸光度线性良好。

（5）测定结果 将（2）项下供试品溶液按（3）项下方法分别测定，计算远志中总生物碱含量，结果见表2。

（2）供试品溶液制备 将不同批次远志药材样品分别经粉碎机粉碎后过20 目筛，得到远志粉末，各取1.00g 置于100mL 具塞锥形瓶中，加入75%甲醇溶液25mL，超声提取50min，滤过，取续滤液备用。

（3）溶液测定 取对照品溶液或者供试品溶液适量，置于5mL 容量瓶中，加入75%甲醇溶液稀释至2.0mL，再加入10% A（lNO3）3溶液0.5mL，混匀后置于40℃恒温水浴锅中显色10min，再加入75%甲醇稀释至刻度线。混匀后，400nm 波长下测定。

（4）标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液0、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6mL，按 2.4（3）项下方法分别测定吸光度。以酮浓度 X（mg·g-1）为横坐标，吸光度 A为纵坐标，得出方程 y=20.331x+0.0183，r=0.9993，在25～400μg 范围内于吸光度线性关系良好。

（5）测定结果 将（2）项下供试品溶液按照（3）项下方法分别测吸光度，计算远志总酮含量，结果见表2。

3 结论

（1）远志总皂苷显色后，随着时间的推移，颜色会有不同程度的变化。稳定性研究发现，0min 时吸光度最大，15min 以后基本稳定，数值波动不大，所以显色后静置15min 后，进行测定。在制备样品时，比较60%和75%甲醇的超声提取效率，75%甲醇提取效率高，确定选用其作为提取溶剂。

（2）目前，关于远志药材多个活性成分含量测定的研究较多，有助于提升对远志药材指标性成分含量控制的质量评价水平[9,10]，本实验对不同产地来源的远志药材多种成分的含量进行测定，有助于评价远志药材中多种组分质量的情况，对产地、生长环境、药材选取部位等可能影响药材质量的因素进行便捷分析。

（3）本实验所测定多种组分含量，为远志的质量评价研究提供了数据参考，利于进一步完善远志质量评价标准。