用高效液相色谱法测定多索茶碱注射液中有关物质及含量的效果分析

李新军，王晓光，董宏伟

（福安药业集团烟台只楚药业有限公司，山东 烟台 264002）

多索茶碱注射液是一种支气管扩张剂，多用于治疗由支气管炎、支气管哮喘等疾病引发的呼吸困难[1-2]。此药是茶碱、氨茶碱的替代品。对多索茶碱注射液进行质量控制及含量测定具有重要的临床意义。本次研究主要是探讨用高效液相色谱（HPLC）法测定多索茶碱注射液中有关物质及含量的效果。

1 仪器与试剂

1.1 试验仪器

本次试验使用的仪器是LC-10Avp 型高效液相色谱仪、AB135-S 型电子天平、超声仪、抽滤装置、PH-25 型酸度计、中性硼硅玻璃管、量瓶。

1.2 试验试剂

本次试验使用的试剂是乙腈、磷酸盐缓冲液、多索茶碱注射液、纯净水、多索茶碱对照品、对照品为色谱纯。

2 试验方法及结果

2.1 测定多索茶碱注射液中有关物质的方法及结果

2.1.1 色谱条件 本次试验使用的色谱柱为C18色谱柱（150×4.6 mm，5 μm）， 填 料 为ODS 填 料， 流 动 相 为18:82 的乙腈- 磷酸盐缓冲液（称取0.87 g 的磷酸氢二钾和8.34 g 的磷酸二氢钾，将其溶解并调整pH 为5.8，稀释至1000 ml）。流动相的流速为1.0 ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，进样量为20 μl，检测波长为273 nm。

2.1.2 制备供试品溶液的方法 精密量取10 ml 的供试品，将其置于容量为100 ml 的量瓶中，加入流动相，将供试品稀释到指定刻度，摇匀以备用。

2.1.3 制备对照品溶液的方法 精密量取10 ml 的供试品溶液，将其置于容量为100 ml 的量瓶中，加入流动相，将供试品稀释到指定刻度，摇匀以备用。

2.1.4 进行专属性试验的方法及结果 精密量取2 μg 的对照品溶液，将其置于高效液相色谱仪中，调节好检测仪器的灵敏度，将主成分色谱峰的峰高设置为满量程的15% ～25%。分别精密量取20 μl 的对照品溶液和供试品溶液，将这两种溶液分别注入到高效液相色谱仪中，记录色谱图。精密量取1 ml 的供试品及阴性对照品，将其注入试管中，进行强碱、强酸、湿热、金属离子、氧化等破坏性试验。通过流动相分别将其移至容量为10 ml 的量瓶中，稀释到指定刻度后摇匀，对此溶液进行专属性试验。结果显示，在不同的条件下，经不同的方法进行处理后，多索茶碱注射液中的有关物质及多索茶碱的含量均达到基线分离标准。详见表1。

表1 进行专属性试验的方法及结果

2.1.5 进行检测限试验的方法及结果 精密量取一定量的对照品溶液，逐级将其稀释并注样，分析最大噪音峰面积（N）及信号峰面积（S）。当S/N 值约为3 时，信号峰对应的注样量即检测限。当对照品溶液的浓度为0.1 μg/ml 时，S=7501.132，N=2605.614，S/N=2.9（约 为3）。这 说 明，本法的检测限为2.0 ng。

2.2 测定多索茶碱含量的方法及结果

2.2.1 色谱条件 本次试验使用的色谱柱为C18色谱柱（150×4.6 mm，5 μm）， 填 料 为ODS 填 料， 流 动 相 为18:82 的乙腈-磷酸盐缓冲液（在0.87g 的磷酸氢二钾和8.34g的磷酸二氢钾中加水，将其溶解为1000 ml 的溶液，并将其pH 调节为5.8）。流动相的流速为1.0 ml/min，运行时间为三倍主峰保留时间，进样量为20 μl，检测波长为273 nm。2.2.2 制备供试品溶液的方法 精密量取10 ml 的供试品，将其置于容量为100 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度。精密量取5 ml 的供试品溶液，将其置于容量为50 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度，摇匀以备用。

2.2.3 制备对照品溶液的方法 精密称取25 mg 的多索茶碱对照品，将其置于容量为50 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度后摇匀。精密量取5 ml 的多索茶碱对照品溶液，将其置于容量为50 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度后摇匀，以备用。

2.2.4 进行线性关系试验的方法及结果 精密称取10.04 mg的多索茶碱对照品，将其置于容量为100 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度后摇匀。分别精密量取8 ml、7 ml、6 ml、5 ml、4 ml、3 ml、2 ml 的多索茶碱对照品溶液，将这些溶液分别置于容量为10 ml 的量瓶中，加水稀释到指定刻度后摇匀。按照浓度由低至高的顺序依次注样进行线性回归分析，将平均峰面积作为纵坐标，将注样浓度作为横坐标。结果显示，当多索茶碱的含量在20.31 ～81.58 mg/L 区间时，呈现出良好的线性关系，其回归方程为A=41817.592C+17698.754，相关r值=0.99993。

2.2.5 进行加样回收率试验的方法及结果 精密量取6 份多索茶碱阴性样品（5 ml/ 份），将这些样品分别置于容量为100 ml 的量瓶中。分别将60 mg、60 mg、50 mg、50 mg、40 mg、40 mg 的多索茶碱对照品加入其中，用水稀释、溶解到指定刻度后摇匀。量取5 ml 的此溶液，将其置于容量为50 ml的量瓶中，加水稀释并摇匀。另取一定量的多索茶碱对照品，用水稀释、溶解为0.05 mg/ml 的多索茶碱对照品溶液，测得回收率的平均值为100.3%，RSD 值为0.56%。详见表2。

表2 进行加样回收率试验的结果

2.2.6 进行样品含量测定试验的方法及结果 精密量取一定量的多索茶碱样品溶液和对照品溶液，将这两种溶液分别置于高效液相色谱仪中，按照本次试验的色谱条件测定多索茶碱的含量，记录主峰的面积，用外标法计算峰面积。结果显示，多索茶碱的含量为99.1% ～100.3%，符合相关规定的要求。详见表3。

表3 进行样品含量测定试验的结果

3 讨论

多索茶碱注射液在生产及储存的过程中极易产生其他物质，因此需要对其质量进行考察。本次研究采用HPLC法测定多索茶碱注射液中的有关物质及含量，使用的试验方法主要包括破坏性试验、回收率试验、线性范围试验。结果证实，用HPLC 法测定多索茶碱注射液有关物质及含量的效果较为理想。