人脑膜瘤组织β-catenin和Gal-3表达水平与术后复发的关系

罗方接 张代龙 邓景阳 陈亚德 曾志明 祝展鹏

脑膜瘤占颅内肿瘤的13%～19%，属于富血管性肿瘤，部分脑膜瘤呈侵袭性生长，术后易复发，预后往往欠佳[1，2]。研究表明，β-连环素（β-catenin）参与细胞间粘附，其表达异常可致细胞间粘附能力下降，并且激活Wnt 通路下游靶基因，促进肿瘤进展[3]；而半乳糖凝集素-3（Galectin-3，Gal-3）具有多种生物功能，例如调节免疫、参与细胞间粘附、参与细胞凋亡等，在脑胶质瘤中异常表达，与肿瘤恶性程度密切相关[4]。本文探讨人脑膜瘤组织β-catenin、Gal-3 的表达水平与术后复发的关系，为临床提供参考。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2017 年12 月至2019 年12 月手术切除的脑膜瘤标本93 例（脑膜瘤组），其中男51例，女42 例；平均年龄（56.43±12.64）岁；癫痫38 例，视力下降26 例，颅内压增高10 例，肢体运动障碍7例；肿瘤直径2～8 cm，平均（4.61±2.14）cm；肿瘤位于大脑凸面52例，矢状窦、大脑镰旁30例，其他部位11例。选取同期颅脑损伤内减压术切除的正常脑组织30 例作为对照组，其中男18 例，女12 例；平均年龄（55.91±15.47）岁。本文研究方案获医院伦理委员会批准。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准①行肿瘤切除术，术后病理检查证实为脑膜瘤；②意识清楚，沟通能力良好；③自愿签署知情同意书。

1.2.2 排除标准 合并他部位原发性肿瘤；肝、肾、心等脏器损害；既往有颅脑手术史；复发性脑膜瘤；既往有精神病史；昏迷状态。

1.3 检测方法 采用免疫组化法检测β-catenin、Gal-3 表达。常规制备组织切片，存放至4 ℃冰箱备用。先进行HE 染色，然后进行免疫组化染色。经脱蜡、水化处理，利用PBS 液冲洗2次，5 min/次；在高压下行抗原修复，取切片置于柠檬盐酸缓冲液内，经高压锅加热10 min，自然冷却，经PBS 进行3 次冲洗，3 min/次；山羊血清室温反应10～15 min后，加入一抗，4 ℃孵育过夜，PBS冲洗3次，3 min/次；加入二抗，室温反应2 h，PBS冲洗；DAB显色，苏木素复染，脱水、透明处理，封片后显微镜下观察。

阳性结果判定[5]：若细胞质、胞膜内呈棕黄色颗粒，则为阳性。随机选择10 个高倍视野（×400），各视野随机选择100个细胞，根据染色强度、阳性细胞占比予以评分。染色强度：无着色为0分，浅黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞占比：≤5%为0 分，6%～25%为1 分，26%～50%为2 分，51%～75%为3 分，＞75%为4 分。两项评分乘积＞4分则判定高表达，否则为低表达。

1.4 随访 脑膜瘤病人术后随访12个月，判断脑膜瘤复发情况。

1.5 统计学方法 采用SPSS 20.0软件分析；计数资料行χ2检验；计量资料以±s 表示，行t 检验；采用多因素logistic 回归分析术后复发的影响因素；P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 脑膜瘤术后复发率93 例脑膜瘤中，术后复发19，复发率为20.43%；74例未复发。

2.2 脑膜瘤β-catenin、Gal-3 表达变化 脑膜瘤组织β-catenin低表达率（66.67%，62/93）明显高于正常脑组织（16.67%，5/30；P＜0.05）。脑膜瘤组织Gal-3 高表达率（64.52%，60/93）明显高于正常脑组织（6.67%，2/30；P＜0.05）。

2.3 脑膜瘤术后复发的影响因素 单因素分析结果显示，肿瘤大小、肿瘤生长方式、肿瘤切除程度、瘤周水肿、病理分级、β-catenin和Gal-3表达水平与脑膜瘤术后复发有关（P＜0.05，表1）。多因素logistic回归分析结果显示，肿瘤侵袭性生长、肿瘤未全切除、肿瘤较大、瘤周水肿严重、病理分级高、β-catenin 低表达、Gal-3高表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素（P＜0.05，表2）。

表1 人脑膜瘤术后复发危险因素的单因素分析

表2 人脑膜瘤术后复发危险因素的多因素logistic回归分析

3 讨论

部分脑膜瘤，彻底切除难度大，术后易复发[6]。脑膜瘤发病机制复杂，具体机制尚不明确，但临床认为可能与免疫紊乱、炎症进展等有关[7]。丁婧和陈晖[8]研究显示，Gal-3在细胞增殖/凋亡、炎症反应、免疫反应中均发挥重要作用。王元[9]指出β-catenin 在软组织肿瘤中异常表达，对肿瘤发生、进展有双重调节作用。本文结果显示，与正常脑组织相比，脑膜瘤组织β-catenin 呈低表达，Gal-3 呈高表达。β-catenin是一种骨架蛋白，主要表达于细胞膜，细胞核以及细胞质内相对较少。一旦β-catenin 表达下降或缺失，则可破坏细胞之间的连接性，损害细胞间粘附力，促进肿瘤进展与恶化[10]。但也有研究显示乳腺癌βcatenin呈高表达[11]。这提示β-catenin在不同类型的肿瘤中表达可能存在差异。Gal-3在哺乳动物、线虫中均表达，在进化过程中具有高度保守性，通常在机体内表达水平较低，但Gal-3 在多种恶性肿瘤中呈高表达，如乳腺癌、甲状腺癌等[12，13]。Gal-3过表达可促进肿瘤细胞增殖，抑制细胞凋亡，促进新生血管形成，诱导肿瘤免疫逃逸，促进肿瘤进展[14]。有学者发现，抑制Gal-3 表达后，可见肿瘤细胞凋亡增加，而增殖能力明显降低[15]。

本文结果还显示，β-catenin 低表达、Gal-3高表达是脑膜瘤术后复发的独立危险因素。β-catenin低表达表，降低细胞间粘附能力，甚至导致该功能丧失，肿瘤细胞生长则难以受控，引起肿瘤侵袭，促进肿瘤细胞增殖，增加复发风险。而Gal-3 高表达可导致细胞运动受异常影响，促使细胞外基质受损，使肿瘤细胞抗凋亡作用增强。

综上所述，脑膜瘤β-catenin 呈低表达，Gal-3呈高表达，二者均与术后复发密切相关。