黑果腺肋花楸中白藜芦醇的提取工艺研究

郭长婕，邢梦思，李雨哲，赛昊男，杨 柳

(长春大学 食品科学与工程学院，吉林 长春 130000)

黑果腺肋花楸，别名野樱莓或不老莓，多年生落叶蔷薇科灌木，原产于美国东北部，目前在我国东北地区大量种植。黑果腺肋花楸果实中富含白藜芦醇、多酚和花色苷等活性物质，其果实虽然能够生食，但是想要最大程度利用其营养价值则需要加工成保健食品、果酱、饮料等产品。

白藜芦醇的化学名为 3，4，5-三羟基二苯乙烯，属于单宁质多酚，在水中的溶解度较低，易溶于有机溶剂。白藜芦醇具有治疗心力衰竭、防癌、调节雌激素和降低心脑血管疾病发病率等功能，在心脑血管疾病和癌症的防治方面具有良好的发展前景。

目前，提取白藜芦醇的方法主要有超声波辅助法、超临界CO2萃取法、酶解法、溶剂提取法、微波辅助萃取法等。采用超声波辅助法提取白藜芦醇，操作简单，提取时间短，得到的样品白藜芦醇含量高。本研究以黑果腺肋花楸为原料，采用超声波辅助法提取白藜芦醇，以期为研究开发相关保健产品提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

黑果腺肋花楸：市售。

白藜芦醇标准品(纯度>98%)，无水乙醇，甲醇。

1.2 仪器与设备

101-3A电热恒温鼓风干燥箱，JA1003分析天平，超声波仪器，TD4C离心机，752紫外可见分光光度计。

1.3 实验方法

1.3.1 白藜芦醇标准曲线的绘制

1.3.1.1 标准曲线样品的制备

准确称取1000 μg白藜芦醇标准品于10 mL容量瓶中，用60%甲醇水溶液定容至刻度，得到浓度为100 μg/mL的白藜芦醇标准品溶液，样品冷藏备用。

1.3.1.2 标准曲线的绘制

准确称取1000 μg白藜芦醇标准品于10 mL容量瓶中定容，得到浓度为100 μg/mL的白藜芦醇储备液。将储备液配制成2、4、6、8、10 μg/mL的标准液系列。在306 nm处测吸光度，绘制标准曲线(见图1)。得到回归方程为y=0.3265x+0.1089(R2=0.9875)，其中，y为吸光度值，x为白藜芦醇标准品的质量浓度。

图1 白藜芦醇标准曲线

1.3.2 单因素实验

1.3.2.1 乙醇浓度对白藜芦醇提取量的影响

准确称取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，进行超声辅助提取，乙醇浓度分别为50%、60%、70%、80%、90%；将提取所得产物离心15 min，取离心后的液体1.2 mL，用70%乙醇定容至10 mL；取2 mL上述溶液，用甲醇定容至25 mL；最后使用紫外可见分光光度计测得吸光度，带入线性回归方程中求出白藜芦醇提取量，确定最佳乙醇浓度。

1.3.2.2 提取时间对白藜芦醇提取量的影响

准确称取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇浓度条件下进行超声辅助提取，分别提取10、30、50、70、90 min。考察提取时间对白藜芦醇提取量的影响，确定最佳提取时间。

1.3.2.3 提取温度对白藜芦醇提取量的影响

准确称取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇浓度和提取时间条件下进行超声辅助提取，提取温度分别为35、40、45、50、55 ℃。考察提取温度对白藜芦醇提取量的影响，确定最佳提取温度。

1.3.2.4 料液比对白藜芦醇提取量的影响

准确称取2.0 g黑果腺肋花楸粉末5份，在最佳乙醇浓度、提取时间和提取温度条件下进行超声辅助提取，料液比分别为1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25。考察料液比对白藜芦醇提取量的影响，确定最佳料液比。

1.3.3 正交试验

在单因素实验的基础上，进行正交试验，对提取工艺进行优化，正交试验因素水平见表1。

表1 正交试验因素水平

2 结果与分析

2.1 单因素实验结果

2.1.1 乙醇浓度对白藜芦醇提取量的影响

从图2可知，当乙醇浓度为70%时，白藜芦醇提取量达到最大值；随着乙醇浓度的继续增加，白藜芦醇提取量逐渐降低。可能浓度过高的乙醇会对白藜芦醇的结构造成破坏，故乙醇浓度应选择70%。

图2 乙醇浓度对白藜芦醇提取量的影响

2.1.2 提取时间对白藜芦醇提取量的影响

从图3可知，当提取时间为30 min时，白藜芦醇提取量达到最大值；随着提取时间的继续延长，白藜芦醇提取量反而减少。可能白藜芦醇已被完全提取，延长时间并不能使提取量增加，故提取时间应选择30 min。

图3 提取时间对白藜芦醇提取量的影响

2.1.3 提取温度对白藜芦醇提取量的影响

从图4可知，当提取温度为 45 ℃时，白藜芦醇提取量达到最大值；随着提取温度的继续升高，白藜芦醇提取量逐渐降低。可能温度过高会造成白藜芦醇的损失，故提取温度应选择45 ℃。

图4 提取温度对白藜芦醇提取量的影响

2.1.4 料液比对白藜芦醇提取量的影响

从图5可知，当料液比为1∶10时，白藜芦醇提取量达到最大值；随着料液比的继续增加，白藜芦醇提取量逐渐降低。因此，料液比应选择1∶10。

图5 料液比对白藜芦醇提取量的影响

2.2 正交试验结果

从表2可知，各因素对白藜芦醇提取量的影响顺序为乙醇浓度>料液比>提取温度>提取时间。白藜芦醇的最佳提取工艺为乙醇浓度70%、料液比1∶15、提取温度45 ℃、提取时间50 min，在此条件下，白藜芦醇提取量为1.702 μg/mL。

3 结论

采用超声波技术对黑果腺肋花楸中白藜芦醇的提取工艺进行研究。通过单因素实验和正交试验获得最佳提取工艺参数：乙醇浓度70%、料液比1∶15、提取温度45 ℃、提取时间50 min，在此条件下，白藜芦醇提取量为1.702 μg/mL。超声波辅助法操作简单，提取时间短，得到的样品白藜芦醇含量高，可为相关产品的开发提供理论依据。

表2 正交试验结果