茵陈-栀子五种配比对绿原酸和栀子苷含量的影响

韩琪琪，胥彤彤，王锐男，李向辉，马 霞，2，刘永录，郭振环，2

(1.河南牧业经济学院 450046；2.河南省康星药业股份有限公司 451464)

茵陈味苦辛，气微寒；归脾、胃、肝、胆经。具有清热、祛湿、退黄疸的功效[1]，临床上常用于黄疸及湿疮的治疗，其主要成分有黄酮类、有机酸类、绿原酸、香豆素等及其代谢产物[2]。栀子气微，味苦性寒；归肝、肺、胃、心、三焦经，具有泻火除烦、清热解毒、祛湿凉血的功效[3]，是临床治疗湿热黄疸及湿热淋证的常用药物。

茵陈与栀子是常用的中药药对，在茵陈蒿汤、茵陈栀子汤、茵陈栀子大枣汤等方剂中均有配伍使用。现代研究茵陈蒿汤较多[4,5]，对茵陈和栀子单味药的研究也不少[6,7]，对于茵陈栀子药对不同配比及不同提取方法对绿原酸及栀子苷成分含量的变化尚未见报道。为研究茵陈与栀子配伍后主要成分的变化以揭示其配伍的药效学物质基础，本试验通过茵陈与栀子不同配伍比例、不同提取方法对绿原酸与栀子苷含量的影响，以筛选出茵陈栀子药对的最佳配伍比例与提取方法。

1 材料与方法

1.1 试验药材与对照品

茵陈、栀子均购自郑州瑞龙制药股份有限公司。经鉴定茵陈为菊科牛至属植物茵陈蒿的干燥地上部分。栀子为茜草科双子叶植物山栀的成熟果实。绿原酸对照品(批号MUST-19106464)、栀子苷对照品(批号MUST-19102310)均购自成都曼思特生物科技有限公司。

1.2 主要仪器与试剂

电子天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司)；超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；高效液相色谱仪(Agilent Technologies)。色谱级甲醇、乙腈均购自天津市四友精细化学品有限公司。

1.3 茵陈与栀子配伍样品的制备

1.3.1 水煎法

分别取茵陈、栀子及不同配比的茵陈-栀子(1∶1，1∶2，2∶1，3∶1，1∶3)放入不锈钢锅中加水浸泡30 min，加热煎煮40 min后过滤，二次煎煮20 min后过滤。分别合并两次煎液，浓缩至每1 ml相当于原药材1 g,4 ℃放置备用。

1.3.2 水煎醇沉法

分别取部分1.3.1制备的单味药及各配伍比例下浓缩液，加入乙醇使乙醇终含量为70%。放置48 h后抽滤，得到沉淀和上清液。将沉淀在60 ℃的温度下干燥备用。上清液回收乙醇至每1 mL相当于原药材1 g备用。

1.4 含量测定

1.4.1 绿原酸的含量测定

1.4.1.1 绿原酸的色谱条件

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶的C18柱；流动相为乙腈20%-0.1%磷酸溶液80%；检测波长为327 nm。

1.4.1.2 绿原酸对照品溶液的制备

精密称取适量的绿原酸对照品，加甲醇配制成每1 mL含绿原酸70μg的对照品溶液备用。

1.4.1.3 供试品溶液的制备

分别取1.3.1制备的各煎液1 ml及1.3.2制备的水煎醇沉上清液1 ml加入5 mL甲醇超声30 min；将1.3.2干燥后的各水煎醇沉沉淀1 g加入5 mL甲醇超声30 min。吸取1 mL的上清液放入5 mL的容量瓶中，再用甲醇定容至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

1.4.2 栀子苷的含量测定

1.4.2.1 栀子苷的色谱条件

色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶的C18柱；流动相为乙腈15%-0.1%磷酸溶液85%；检测波长为238 nm。

1.4.2.2 栀子苷对照品溶液的制备

精密称取适量的栀子苷对照品，加甲醇配制成每1 mL含栀子苷30 μg的对照品溶液备用。

1.4.2.3 供试品溶液的制备

同1.4.1.3。

2 结果

2.1 绿原酸含量测定结果

在水煎提取法的药液中，茵陈-栀子配伍后的水煎液绿原酸含量比茵陈单味药水煎液中的绿原酸折算后的理论含量高。其中，茵陈-栀子2∶1配伍比例下的水煎液绿原酸的含量最高。

在水煎醇沉提取法中，茵陈-栀子配伍后的水煎醇沉沉淀和上清液中绿原酸含量高于茵陈单味药水煎醇沉沉淀与上清液的绿原酸折算后的理论含量。以茵陈-栀子配伍比例为2∶1水煎醇沉沉淀的绿原酸含量最高。茵陈-栀子配伍比例为2∶1时，上清液中绿原酸含量最高。

表1 各样品中绿原酸含量 μg/mL

2.2 栀子苷含量测定结果

在水煎提取法的药液中，茵陈-栀子配伍后的水煎液栀子苷含量比栀子单味药水煎液中的栀子苷折算后的理论含量高。其中，以茵陈-栀子1∶3配伍后的水煎液中的栀子苷含量最高。

在水煎醇沉提取法中，茵陈-栀子配伍后的水煎醇沉沉淀的栀子苷含量全部低于栀子单味药水煎醇沉沉淀的栀子苷折算后的理论含量；上清液中的栀子苷含量全部高于栀子单味药水煎醇沉上清液中的栀子苷折算后的理论含量，以茵陈-栀子1∶3配伍的水煎液中栀子苷含量最高。

表2 各样品中栀子苷含量 μg/mL

3 讨论

茵陈-栀子药对水煎液中的绿原酸含量高于茵陈单味药煎煮所提取的绿原酸折算后的理论含量。水煎醇沉提取法中，沉淀和上清液中的绿原酸含量也高于茵陈单味药所提取的绿原酸折算后的理论含量。韩晋等[8]研究了方药配伍对茵陈蒿汤中绿原酸溶出率的影响，得出全方水煎有利于绿原酸溶出的结论。本试验与该研究结果一致。

本试验结果显示，茵陈-栀子药对水煎液中的栀子苷含量均高于栀子单味药所提取的栀子苷折算后的理论含量。袁海龙等[9]在研究方药配伍对茵陈蒿汤中栀子苷溶出率的影响时发现全方水煎后有利于栀子苷的溶出。此与本试验结果相似。本试验中，茵陈-栀子药对水煎醇沉提取的沉淀中栀子苷含量低于栀子单味药所提取的栀子苷折算后的理论含量，这可能与栀子苷易溶于水相关。

本试验结果显示，在同一比例下，水煎醇沉提取法的上清液中绿原酸和栀子苷含量为最高；其次为水煎法。

茵陈-栀子各配伍比例的绿原酸及栀子苷含量较单味药折算后的理论含量提高。选取的茵陈-栀子五个配伍比例中，水煎液与水煎醇沉沉淀及上清液中均以茵陈-栀子2∶1配伍比例提取的绿原酸含量最高，而以茵陈-栀子1∶3配伍比例提取的栀子苷含量最高。因此临床运用茵陈-栀子药对时，当主要发挥绿原酸的药理作用时，可以选取茵陈-栀子2∶1的配伍比例；主要发挥栀子苷的药理作用时，可以选取茵陈-栀子1∶3的配伍比例。