VEGF与Ki-67在NSCLC中的表达及其临床意义

李健，王超，贾旺，丁家宝，梁华刚，高鲲，贾瑞

(1.秦皇岛市第一医院胸外科；2.秦皇岛市妇幼保健院麻醉科，河北 秦皇岛 066000)

近年来，肺癌的患病率呈升高趋势，其中约80%为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)，一经发现即已进展至中晚期，治疗后5年生存率在恶性肿瘤中最低，3年生存率也处于较低水平，严重威胁患者的生命安全[1-2]。尽早诊断，能为临床治疗提供更好的机遇，延长患者的生存时间。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)为目前特异性最强的促血管生长因子，其阳性表达率水平与患者预后密切相关；核增殖抗原(Ki-67)为一种常见的细胞增殖标记物，在NSCLC肺组织中的表达显著。本研究旨在探讨VEGF、Ki-67在NSCLC中的表达及其临床意义，为临床早期诊断及预后判断提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2016年1月至2019年12月秦皇岛市第一医院就诊的150例NSCLC患者作为研究对象，其中男性95例，女性55例；年龄44～75岁，平均(60.21±6.35)岁；鳞癌64例，腺癌86例。将患者分为死亡组(n=38)和存活组(n=112)，并取每例患者癌组织及癌旁组织各1份。入选标准：(1)均经术后病理学确诊为NSCLC[3]；(2)临床资料完整；(3)术前未接受放疗或化疗治疗；(4)患者或家属对本研究方案知情、同意。排除标准：(1)NSCLC以外的其他类型的肺部恶性肿瘤患者；(2)合并其他种类的癌症者。本研究经院伦理委员会审查批准。

1.2 方法

1.2.1 VEGF及Ki-67水平检测 采用SP法，SP试剂盒、鼠抗人VEGF及Ki-67单克隆抗体均购于上海哈灵生物科技有限公司，操作严格按试剂盒说明书进行。一抗由PBS液替代，作为阴性对照，已知的恶性肿瘤VEGF阳性切片为阳性对照。

1.2.2 结果判定 (1)VEGF表达情况采用半定量计分法判定。阳性着色评分：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色3分；阳性细胞所占比例评分：≤10%为0分，11%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分；阳性着色评分×阳性细胞所占比例≥4分为阳性，<4分为阴性。(2)Ki-67表达情况采用核染色法判定。400×显微镜下，随机抽取5个视野，对Ki-67阳性细胞百分比进行计数，核着色细胞≥10%为阳性，<10%为阴性。见图1和图2。

1.3 观察指标

(1)存活组与死亡组癌组织VEGF与Ki-67阳性表达率；(2)癌组织与癌旁组织VEGF与Ki-67阳性表达率；(3)VEGF和Ki-67的阳性表达与临床病理特征的关系；(4)VEGF与Ki-67阳性表达的相关性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0软件对数据分析分析与处理。计数资料以[n(%)]表示，行χ2检验；相关性分析采用Pearman或Logistic回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 死亡组与存活组患者癌组织VEGF与Ki-67阳性表达率比较

死亡组患者癌组织VEGF与Ki-67阳性表达率高于存活组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 死亡组与存活组患者癌组织VEGF与Ki-67阳性表达率比较[n(%)]

2.2 癌组织与癌旁组织VEGF与Ki-67阳性表达率比较

癌组织VEGF与Ki-67阳性表达率高于癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 肺组织与癌旁组织VEGF与Ki-67阳性表达率比较[n(%)]

2.3 VEGF及Ki-67阳性表达与临床病理特征的关系

Pearman分析显示，VEGF阳性表达与肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移及临床分期相关(P<0.05)；Ki-67阳性表达与淋巴结转移相关(P<0.05)。见表3。

表3 VEGF及Ki-67与NSCLC临床病理特征之间的关系[n(%)]

2.4 癌组织VEGF与Ki-67阳性表达的相关性

VEGF阳性115例，阳性率76.67%(115/150)，Ki-67阳例数89例，阳性率59.33%(89/150)，Logistic回归分析显示，癌组织VEGF与Ki-67阳性表达呈正相关性(r=0.627，P=0.032)。

3 讨论

NSCLC扩散速度较慢，生物学行为(疾病发生、进展与侵袭等方面)与肿瘤细胞异常增殖存关联性[4-5]。随着生物学技术水平不断提升，从分子水平对肿瘤发病机理的认识逐渐深入，肿瘤标志物在肺癌患者肺组织中的变化与临床病理学特征相关性的研究也随之成为重点。

VEGF作为最早于肿瘤细胞分离的多亚型多家族蛋白质，是一种有高度特异性的促血管内皮细胞生长因子。临床研究[6]证实，正常组织中VEGF阳性表达率极低，但在肿瘤，尤其是恶性肿瘤细胞中表达率极高。本研究结果显示，死亡组患者癌组织VEGF阳性表达率高于存活组(P<0.05)，癌组织高于癌旁组织(P<0.05)，且与肿瘤直径、淋巴结转移、远处转移以及临床分期有相关性(P<0.05)，与Zhan等[7]的研究相符。这提示VEGF不仅参与了肿瘤的发生、发展、侵袭转移等过程，其阳性表达水平还与患者的预后密切相关，可作为NSCLC复发及评判预后的预测因子。其可能的机制为：VEGF与VEGF受体相结合后，可刺激血管内皮细胞的增殖及迁移过程，提高微血管通透性，并通过调节细胞外基质(extracellular matrix，ECM)，加快恶性肿瘤新生血管的生成，加速淋巴管内皮细胞增殖分裂速度[8]。

Ki-67为一种细胞核抗原，标记指数与肿瘤增殖及患者预后呈正相关。本研究结果显示，死亡组患者癌组织Ki-67阳性表达率高于存活组(P<0.05)，癌组织高于癌旁组织(P<0.05)，提示Ki-67阳性表达与肿瘤增值及预后有关，癌组织中Ki-67阳性表达可作为肿瘤增值及判断预后的预测因子[9-10]。相关性分析显示，Ki-67阳性表达与淋巴结转移有相关性(P<0.05)，与宋作庆等[11]的研究存在差异，可能与样本量较小有关。

本研究还显示，VEGF阳性表达者，其Ki-67阳性表达水平会升高，提示VEGF能够加快NSCLC新生血管形成与肿瘤细胞增殖速度，与国外相关研究[12]一致。因此，VEGF阳性表达率高的肿瘤，侵袭转移水平更高，预后不佳。此外，回归分析显示，VEGF与Ki-67阳性表达呈正相关，提示两项指标在预测NSCLC的发生、侵袭转移及预后中有较好的协同效果。

综上所述，在NSCLC患者中，癌组织VEGF与Ki-67的表达水平较高，且与患者临床病理学相关特征相关，可作为临床早期诊断及判断预后的重要依据。