无锡地区沙门菌抗生素耐药特征研究分析

邹云眉

（无锡市新吴区疾病预防控制中心，江苏 无锡 214100）

0 引言

沙门菌属（Salmonella）是全球健康领域定义城市安全和耐药传播的重要指标菌。抗生素在临床及养殖业的持续广泛滥用，使沙门菌耐药性越来越严重[1]。笔者通过对2017～2018年监测过程中分离出的307株沙门氏菌进行抗生素药敏试验，回顾性了解并分析本地区人群携带与感染优势沙门菌的抗生素属耐药情况。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 菌株来源：本实验所用307株沙门菌分离自2017至2018年本地区人群，其中220株分离自健康食品从业人员，87株分离至食源性感染腹泻患者。所有菌株均已生化鉴定复核确认为沙门菌属。质控菌株大肠埃希氏菌ATCC 25922。

1.1.2 主要仪器与试剂：AIM Vizion全自动药敏试验菌液接种判读仪（Thermo Fisher Scientific公司，美国）；全自动菌液接种仪配套接头及肉汤管（Thermo Fisher Scientific公司，美国）；比浊仪（梅里埃公司，法国）；革兰氏阴性菌药敏板（Thermo Fisher Scientific公司，美国）；血平板（上海科玛嘉公司）；生物安全柜；恒温培养箱。

1.2 方法

标准菌悬液制备：使用一次性无菌接种环，将复核鉴定后保存于40%BHI-甘油冻存管菌株中取出一环划线接种于BHA平板，经37℃24 h培养复苏，得到新鲜的纯菌落，挑取单个菌落再次划线转接BHA平板37℃24 h培养纯化。再次挑取单个纯化菌落至3 mL去离子水，用经过校准的比浊仪调整菌液浊度至0.5麦氏单位浊度。本实验共制备307管菌悬液。

药敏板接种：取菌悬液50 ul加入至11 mLCAMHT稀释肉汤试管中，试管加装移液头，连接全自动药敏试验菌液接种判读仪的无菌加样槽，充分混匀后，自动加样，按照100 ul/孔加至药敏板，置于恒温恒湿培养箱内，37℃培养24 h。本实验共接种307块药敏板。

阴性对照：每块药敏板设一孔阴性对照。自动加样，100ul加至药敏板H12孔（无抗菌素空白孔），作为阴性对照。

结果判读：将药敏板放入AIM Vizion全自动药敏判读试验菌液接种判读仪，使用判读仪连接机算机，运行SWIN3.3系统，对药敏板进行读数与数据自动录入，结果输出。实验者肉眼选定药敏板每行（一种抗菌素）中菌悬液澄清（无细菌繁殖），并且抗菌素浓度为最低的一孔，读取为每种抗菌素的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentration，MIC），选定结果由判读仪自动读入，由SWIN3.3系统根据美国临床和实验室标准化协会（Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI）的标准，结合肠杆菌科耐药判定标准对药敏结果进行判断，结果：敏感（S）、中度敏感（I）、耐药（R）。

以大肠埃希菌（ATCC 25922）菌株为质控菌株，依据美国临床和实验室标准化协会2019年抗生素敏感性测试操作标准质控范围判断药敏板上的抗生素质量。

阴性对照结果判读：药敏板H12孔（无抗菌素空白孔），菌悬液浑浊。

2 结果

2.1 不同源沙门菌耐药特征。健康者携带源与患者源分离到的沙门菌对四环素类、青霉素类、磺胺类、酰胺醇类的耐药率相对较高，对碳青霉素烯类、头孢类（除头孢）、大环内酯类耐药率相对较低。不同源沙门菌耐药特征，见表1。

表1 无锡市不同来源沙门菌对14种抗生素的耐药情况

2.2 沙门菌优势血清型的抗生素耐药特征。307株沙门菌共鉴定出46个血清型，优势血清型分别为鼠伤寒占17.59%，山夫登堡占15.31%，肠炎沙门菌占8.47%，伦敦与阿贡纳占6.19%，余血清型占比均低于5%。5种沙门菌优势血清型的抗生素耐药特征，见表2。

表2 无锡市5种非伤沙门菌优势血清型对14种抗生素的耐药情况

3 讨论

本实验结果显示，无锡地区健康者携带源与患者源沙门菌株对青霉素类、四环素类、磺胺类等多种抗生素耐药率相对较高，同时对3种以上抗生素耐药的率分别为48.18%和65.52%。通过文献检索发现，无锡地区沙门菌抗生素耐药情况与同期国内其他省份监测结果存在差异[2]。青霉素与喹诺酮类抗生素耐药率高于美国[3]，这可能与各个国家与地区的临床用药管理、经济发展水平及卫生条件有关。本实验结果显示，本地区人群携带与感染的沙门菌对碳青霉素烯类、头孢类（除头孢唑啉）、大环内酯类耐药率低，对临床用药有一定参考意义[4-5]。

本实验研究存在一定的局限性，一是仅收集到2017年至2018两年的人群样本，无法分析近年来人群携带或感染沙门菌抗生素耐药性变化趋势；二是未收集到无锡地区食品与环境中沙门菌菌株，无法检测分析人群携带与感染沙门菌抗生素耐药情况与本地区抗生素在动植物养殖中使用与环境污染关系分析。