紫外-可见分光光度法测定浓维磷糖浆中总磷量

★ 万安凤（广州白云山星群〈药业〉股份有限公司 广州 510288）

浓维磷糖浆收载于《国家食品药品监督管理局国家药品标准》中，适用于植物神经功能紊乱引起的头晕目眩、精神疲倦以及低磷血症。处方中含有甘油磷酸钠，咖啡因，维生素，磷酸，烟酸。其中甘油磷酸钠、磷酸都含有磷酸根离子［1］。以前的标准中，规定本品含磷量按［PO43-］计算，不得少于0.343 %（g/mL）。由于该标准是采用目试比色进行测定，误差较大。本研究建立了紫外-可见分光光度法［2］，对浓维磷糖浆中的总磷量进行含量测定，取得了较满意的结果。具体试验方法及结果说明如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器UV-2401PC型紫外-可见分光光度计（日本岛津）；电炉；TDCC-1/0.5型调压变压器。

1.2 试剂高氯酸（GB623-1992，分析纯），广州化学试剂厂提供；硝酸（GB625-1989，分析纯），广州化学试剂厂提供；钼酸铵（GB657-93 XK 13-201 9043，分析纯），天津市科密欧化学试剂开发中心提供；钒酸铵（HG3-941-76，分析纯），广东西陇化工厂提供。

1.3 标准品磷酸二氢钾（GB1274-77，分析纯，含量不少于99.5%），广州化学试剂厂提供。

1.4 供试品浓维磷糖浆，由本公司提供（批号：BK90023、BK90031、BK90040、DK90010、DK90014、DK90019、DK90025、DK90028、DK90029、DK90031）。

2 方法与结果

2.1 供试品溶液的制备精密量取供试品溶液2 mL，置125 mL凯氏烧瓶中，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火缓缓加热至黄烟逸尽，继续加热至冒白烟（不得蒸干）溶液基本无色［3］，冷却，加水30 mL，加热煮沸，冷却，用水转移至100 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.2 磷标准溶液的制备精密称取在105 ℃干燥至恒重的磷酸二氢钾4.393 9 g，置1 000 mL量瓶中，加硝酸3 mL，用水使溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取10 mL，置500 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀［4］，即得。（每1 mL含磷20 mg）。

2.3 钼酸-钒酸铵试剂的制备取20 g钼酸铵，加入50 ℃的水400 mL使溶解，放冷，备用。另取钒酸铵1 g，加入热水300 mL使溶解，放冷，加入硝酸140 mL，边加边搅拌，放冷。将钼酸铵溶液加入钒酸铵溶液中，加水至1 000 mL。

2.4 阴性对照品溶液的制备按处方及制法，制成缺50 %液状甘油磷酸钠、磷酸的阴性对照样品。取阴性对照样品2 mL，按供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。

2.5 线性范围考察精密量取磷标准溶液2、5、10、15、20、25 mL,分别置50 mL量瓶中，加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在400 nm的波长处测定吸光度，以磷浓度(mg/mL)为横坐标、吸光度A值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，在磷浓度0.8～10.0 mg/mL范围内，与钼酸-钒酸铵试剂显色后的吸光度A值呈良好的线性关系。回归方程为Y=0.086 7X-0.002 7（r=0.999 9）。

2.6 重复性精密量取供试品溶液2 mL，共6份，分别置125 mL凯氏烧瓶中，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火缓缓加热至黄烟逸尽，继续加热至冒白烟（不得蒸干）溶液基本无色，冷却，加水30 mL，加热煮沸，冷却，用水转移至100 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取硝酸30 mL、高氯酸10 mL，同法制得消煮空白溶液。精密量取供试品溶液与消煮空白溶液各10 mL，分别置50 mL量瓶中，分别加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在400 nm的波长处测定吸光度，以供试品溶液吸光度减去消煮空白溶液的吸光度，得磷吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液含磷量，计算，即得。结果表明，本法测定平均总磷量1.206 mg/mL，RSD=0.142 %（n=6），重现性良好。

2.7 精密度精密量取磷标准溶液10 mL，共6份，分别加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在400 nm的波长处测定吸光度。结果表明，平均吸光度A值为0.353，RSD=1.596 %（n=6），精密度良好

2.8 稳定性精密量取同一批供试品溶液（批号：DK90010）2 mL，照前述方法制成供试品溶液，取供试品溶液10 mL，加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在400 nm的波长处测定吸光度，继续放置1、2、3、4、5、6、7、8 h后，再在400 nm的波长处测定吸光度。结果表明，供试品溶液显色在放置0～8 h内，平均吸光度A值为0.452，RSD=0.452 %（n=9），稳定性良好。2.9 加样回收试验 精密量取同一批供试品溶液（批号：DK90010）1 mL，共6份，分别置125 mL凯氏烧瓶中，分别加入磷酸二氢钾溶液（精密称取磷酸二氢钾0.561 9 g，置100 mL量瓶中，加水使溶解并稀释至刻度，摇匀）1 mL，加硝酸30 mL、高氯酸10 mL，用直火缓缓加热至黄烟逸尽，继续加热至冒白烟（不得蒸干）溶液基本无色，冷却，加水30 mL，加热煮沸，冷却，用水转移至100 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。另取硝酸30 mL、高氯酸10 mL，同法制得消煮空白溶液［5］。精密量取供试品溶液与消煮空白溶液各10 mL，分别置50 mL量瓶中，分别加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法，在400 nm的波长处测定吸光度，以供试品溶液吸光度减去消煮空白溶液的吸光度，得磷吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液含磷量，分别计算回收率。结果表明，本法测定总磷量，平均回收率101.90 %，RSD=1.691 %（n=6），回收率良好。

2.10 专属性试验精密量取供试品溶液、磷标准溶液、阴性对照品溶液各10 mL，分别置50 mL量瓶中，加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，以相应的试剂为空白［6］，照紫外-可见分光光度法在360～500 nm波长间扫描，结果，供试品溶液及磷标准溶液在400 nm波长处有吸收，阴性对照品溶液在400 nm波长处未有干扰。

2.11 供试品含量测定结果取十批供试品（批号分 别 为BK90023、BK90031、BK90040、DK90010、DK90014、DK90019、DK90025、DK90028、DK90029、DK90031），分别照前述方法测定总磷量，结果测得10批浓维磷糖浆含总磷量为1.204 mg/mL，RSD=2.56 %（n=10）。结果见下表1。

表1 十批供试品含量测定结果

按处方量计算，浓维磷糖浆含总磷量应为1.204 mg/mL，根据以上十批样品的总磷量测定结果，建议控制浓维磷糖浆含总磷量应为1.08～1.33 mg/mL。

3 讨论

3.1 硝酸及高氯酸用量的选择精密量取同一批供试品溶液2 mL，共三份，分别加不同量的硝酸、高氯酸（15 mL、5 mL；30 mL、10 mL；45 mL、15 mL），照供试品溶液的制备方法操作。结果：取供试品溶液2 mL，加入硝酸15 mL、高氯酸5 mL消煮后，溶液烧干，呈黑色块状物。说明硝酸和高氯酸加入量少，消煮不完全。加入硝酸30 mL、高氯酸10 mL消煮后，呈无色透明状溶液，效果较好。说明硝酸和高氯酸加入量足够使消煮完全。加入硝酸45 mL、高氯酸15 mL消煮后，呈无色透明状溶液，效果较好。说明硝酸和高氯酸加入量足够，消煮完全。以上试验结果表明，取供试品溶液2 mL，加入硝酸30 mL、高氯酸10 mL进行消煮，最合适。

3.2 检测波长的选择取钼酸-钒酸铵试剂10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min。以纯化水为空白，照紫外-可见分光光度法在360～500 nm波长间扫描，结果，在400 nm波长处虽没有吸收峰，但是测得吸光度值为0.002。因此，在供试品测定时，应取钼酸-钒酸铵试剂10 mL，置50 mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min，作为空白。

精密量取供试品溶液及磷标准溶液各10 mL，分别置50 mL量瓶中，加入钼酸-钒酸铵试剂10 mL，加水稀释至刻度，摇匀，放置10 min。以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法在360～500 nm波长间扫描，结果，供试品溶液及磷标准溶液在400 nm波长处有吸收峰，因此选择400 nm为本品的测定波长。