非酒精性脂肪肝转归肝硬化患者血清瘦素及受体基因表达特征研究

马艳芹，谢永鹏，梁旭阳，倪立显，徐 静，左晨艳，吕胜祥

连云港市第一人民医院 消化内科，江苏 连云港 222020

非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)具有可逆性，预后一般良好，但一些慢性脂肪肝(包括NAFLD)患者因脂肪肝引发肝损伤，甚至发展为具有不可逆性的严重疾病，如肝硬化或肝癌[1-2]。人体内，瘦素通过与Ghrelin激素(饥饿荷尔蒙)相互抵抗并作用于下丘脑弓状核中的受体以抑制饥饿，刺激饱腹感，平衡能量[3-4]。另有研究表明，瘦素也在其他生理过程(如免疫和炎症反应)中发挥作用[5-6]。本研究旨在探讨NAFLD转归肝硬化患者瘦素与其受体水平的变化。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取连云港市第一人民医院自2017年4月至2019年3月收治的125例NAFLD患者为研究对象。纳入标准：符合脂肪肝的诊断标准；无饮酒史或每周饮酒量<40 g；血清转氨酶>40 U/L，其中，以丙氨酸氨基转移酶升高为主；影像学和组织学检查符合NAFLD典型表现；可伴有肥胖、血糖和血脂水平异常或高血压等代谢综合征。排除标准：病毒性肝炎、药物性肝病、自身免疫性肝病和各种其他肝病者；免疫功能障碍者；其他脏器严重疾病者。按照患者转归情况将患者分为A组(未转归为肝硬化；n=50)和B组(转归为肝硬化；n=75)。A组中，男性31例，女性19例；平均年龄(53.26±15.72)岁。B组中，男性49例，女性26例；平均年龄(54.18±14.75)岁；肝硬化代偿期46例，失偿期29例。两组患者的性别、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准。所有患者均签署知情同意书。

1.2 研究方法 采集患者清晨空腹外周静脉血5 ml，低温离心后弃沉淀，将上清于-20℃保存待测。血清瘦素采取免疫放射法检测，使用Linco公司相关试剂，并按说明书操作。采取酶联免疫吸附法检测血清可溶性瘦素受体(soluble leptinR，sOb-R)，检测使用R&D Systems试剂盒，操作按说明书进行。血清瘦素受体(Ob gene receptor，Ob-R)基因表达情况以逆转录PCR实验表征。活检时获取患者肝组织样品(1.5 cm×1.5 cm×0.2 cm)，使用RNA抽提试剂盒(PureLink，Thermo Fisher，USA)提取细胞总RNA，以cDNA合成试剂盒合成的第一链作为模板进行逆转录，使用FastQuant RT试剂盒(KR106，TIANGEN，北京)和琼脂糖凝胶电泳检测Ob-R mRNA表达情况。相对表达量检测使用凝胶成像系统(SYSTEM GelDoc XR，Bio-Rad)检测。使用全自动生化分析仪(AU5800，Beckman)检测患者空腹血糖(fasting blood-glucose，FBG)、总胆固醇(total cholesterol，TC)、甘油三酯(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterin，LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol，HDL-C)。根据child-pugh分级将B组患者分为A、B、C 3级，A级预后相对较好，C级预后相对最差[7]。按照肝硬化分期将B组患者分为代偿期与失偿期。

2 结果

2.1 两组患者血清瘦素及sOb-R水平比较 B组患者血清瘦素水平为(11.38±3.47)μg/L，高于A组的(8.55±2.06)μg/L，差异有统计学意义(P<0.05)。B组患者血清sOb-R水平为(16.23±4.11)μg/L，低于A组的(18.52±4.26)μg/L，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 B组不同肝硬化分期患者血清瘦素及sOb-R水平比较 失偿期患者血清瘦素水平为(12.85±3.52)μg/L，高于代偿期的(9.40±2.84)μg/L，差异有统计学意义(P<0.05)。失偿期患者血清sOb-R水平为(16.72±3.97)μg/L，低于代偿期的(19.01±3.05)μg/L，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 B组不同child-pugh分级患者血清瘦素及sOb-R水平比较 child-pugh分级C级患者血清瘦素水平高于A级、B级，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 B组不同child-pugh分级患者血清瘦素及sOb-R水平比较

2.4 两组患者肝组织Ob-R mRNA表达情况比较 A组Ob-R mRNA的相对表达量为(122.75±15.28)，明显高于B组的(107.13±14.32)，差异有统计学意义(P<0.05)。见图1。

图1 两组肝组织Ob-R mRNA表达情况

2.5 两组患者血液学指标比较 B组患者FBG明显高于A组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 两组患者血液学指标比较

3 讨论

本研究结果显示，NAFLD发展为肝硬化患者的血清各指标水平明显异于预后较为良好患者，其中，瘦素水平异常升高，sOb-R水平异常降低。本研究利用逆转录PCR检查了Ob-R mRNA的表达情况，结果显示，发展为肝硬化患者体内Ob-R基因表达明显低于预后较为良好患者，与Long等[8]研究结果一致。有研究表明，在NAFLD疾病进展中，TG早期在肝细胞中积累为微泡，后逐渐增加聚为大泡状，这一过程会对细胞造成物理损伤，并增加由于脂肪过多引起的炎症反应，从而导致肝炎和肝纤维化[9-10]。而肥胖个体通常表现出比正常体质量个体更高的瘦素循环浓度，因此，血清瘦素升高可提示肝受损伤的程度[11]。此外，sOb-R在血清中水平降低可能是对瘦素水平异常升高的负反馈，以减少瘦素与受体的结合，从而维持代谢控制[12]。有研究报道，sOb-R经酶水解在膜外功能区脱落而进入循环，因此，sOb-R可反映Ob-R表达情况[13]，与本研究结果一致，但具体分子机制仍需进下一步的验证。

本研究分析了NAFLD发展为肝硬化的不同临床分期及不同分级标准患者的瘦素、sOb-R水平，随着疾病严重程度增加，患者血清瘦素水平升高，而sOb-R水平降低。这提示，瘦素和sOb-R水平随着NAFLD严重程度(或疾病发展)而变化，血清瘦素及Ob-R表达情况可以作为NAFLD是否发展为肝硬化和表征NAFLD疾病发展的指标。NAFLD与葡萄糖和脂质代谢异常有关，包括胰岛素抵抗内源性葡萄糖产生，葡萄糖处置率和脂肪组织中的抗脂肪分解[14-15]。本研究发现，B组患者FBG明显高于A组，与上述研究结果一致。本研究存在一定的不足：本研究因为时间和病例样本限制(活检肝组织样本体积较小)，未将Ob-R mRNA样本根据临床分期和分级进行细分，因此，未显示不同时期和分期患者mRNA表达情况。下一步将拟纳入大量预后不良且拟行肝移植或部分切除手术的患者，获取大于本研究样本量的肝组织，根据上述分类进行再研究和分析，获取较为可靠的分级结果。

综上所述，NAFLD转归为肝硬化相较于预后良好的患者血清瘦素水平异常增高，sOb-R水平异常降低，同时伴随FBG水平变化。