不同浓度康复新液对慢性溃疡创面修复及IL-2表达的影响

熊清华，石卫红，胡云刚，李小林

(江西省人民医院整形颌面外科，江西省颌面整形与再造重点实验室，南昌 330006)

康复新液有效成分为黏糖氨酸，具有抑菌抗炎、去腐生肌、促进肉芽组织生长、改善创面微循环、促进血管新生、加速组织修复再生、消除水肿和增强免疫功能等作用[1-2]。既往有研究[3-5]显示，康复新液能够促进慢性创面的愈合。创面的愈合是一个复杂的过程，许多生长因子参与其中，白细胞介素-2(IL-2)就是其中的一种，它指导T细胞的扩增和表型发育，在伤口愈合过程中起着重要作用[6]。当前临床上对于康复新液修复创面时选取何种浓度尚无统一标准，多凭临床医师的经验选择。鉴于此，本研究通过比较不同浓度康复新液治疗慢性溃疡创面时IL-2表达水平及创面修复效果，找到最适合创面修复的康复新液浓度，从而指导临床医生更合理使用康复新液，报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取江西省人民医院2018年1月至2020年6月收治的慢性皮肤溃疡患者40例，按随机数字表法分为5组：0%组8例，男6例、女2例，年龄25～55岁、平均(40.0±8.7)岁，溃疡部位：头面部2例、四肢3例、臀部1例、躯干部2例，溃疡面积15～75 cm2、平均(35.0±6.4)cm2；25%组8例，男7例、女1例，年龄20～50岁、平均(38.0±7.6)岁，溃疡部位：头面部2例、四肢4例、臀部1例、躯干部1例，溃疡面积12～70 cm2、平均(41.0±7.1)cm2；50%组8例，男6例、女2例，年龄19～62岁、平均(39.0±8.3)岁，溃疡部位：头面部1例、四肢5例、臀部1例、躯干部1例，溃疡面积28～90 cm2、平均(45.0±7.9)cm2；75%组8例，男6例、女2例，年龄25～50岁、平均(39.0±9.1)岁，溃疡部位：头面部2例、四肢3例、臀部1例、躯干部2例，溃疡面积22～75 cm2、平均(45.0±8.3)cm2；100%组8例，男6例、女2例，年龄26～52岁、平均(40.0±7.9)岁，溃疡部位：头面部2例、四肢3例、臀部1例、躯干部2例，溃疡面积28～70、平均(36.0±6.8)cm2。5组患者的性别、年龄等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院医学伦理委员会审批批准。

1.2 入选及排除标准

入选标准：1)符合慢性皮肤溃疡诊断标准[7]；2)创面深度均已至浅筋膜，但未至骨面；3)自愿参与本研究并签署知情同意书。排除标准：1)合并糖尿病或高血压等全身性疾病者；2)不能配合行使一次性密闭负压吸引材料(VSD)治疗的患者3)皮肤创面过深，已至骨面者；4)皮肤创面过浅，未至皮下者。

1.3 治疗方法

所有患者溃疡创面在经清创后用VSD(武汉维斯第公司生产)覆盖，5组分别给予0%[生理盐水(抚州市医宝城医疗器械有限公司)]、25%、50%、75%和100%5种不同浓度的康复新液(四川好医生攀西药业有限责任公司)冲洗创面。

1.4 观察指标及评价标准

观察5组创面肉芽组织HE染色、IL-2表达、新生血管数量及创面面积缩小比例。

1) 创面肉芽组织HE染色。具体方法如下：组织经全自动脱水机[徕卡显微系统(上海)贸易有限公司]处理16 h+30 min；用石蜡包埋机(湖北安立信医疗实业有限公司生产)人工包埋、切片机[徕卡显微系统(上海)贸易有限公司]人工切片，厚度为4 μm，摊片烤片机(湖北安立信医疗实业有限公司生产)上摊片烤片(摊片水温42～47 ℃，烤片温度85 ℃左右，持续30 min)；用全自动染色机[徕卡显微系统(上海)贸易有限公司]进行Harris苏木素及伊红(上海榕柏生物技术有限公司)染色；用全自动封片剂(上海徕卡显微系统贸易有限公司)进行脱水透明封片。最好在显微镜(日本奥林巴斯株式会社)下观察。

2)创面面积缩小比例。所有患者在清创后覆盖VSD前测量创面面积，应用薄膜描记法测量：将创面进行纱布印模，放置测量坐标图测量格数，每格面积1 cm2，完整格子计为1，大于半格计为1，小于半格计为0，计算出创面面积，记为A。在创面冲洗满2周时，再次测量创面面积，记为B,计算(A-B)/A,得出创面的缩小比值。

3)IL-2表达。在创面冲洗一周后更换VSD材料时，取每位患者创面中央0.1 g肉芽组织，加入少量液氮，在研钵中迅速将组织碾碎至粉末状,后转入2 mL微量离心管中，加入1.2 mL磷酸缓冲盐溶液(pH 7.4)(湖北万业医药有限公司生产)，充分振荡混匀，在4 ℃ 2000转速的条件下离心20 min，收集上清液，ELISA法测定IL-2的含量。

4)新生血管数量。取创面中央少量肉芽组织经HE染色后制成切片，每张切片在中央区及周边区随机选取5个高倍视野，血管计数后求其平均数，从而测得其新生毛细血管数量。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 5组创面肉芽组织HE染色毛细血管密度比较

各组创面肉芽组织HE染色显示毛细血管密度各不相同，冲洗液浓度越高组，毛细血管密度越高。见封四图1。

2.2 5组创面IL-2表达、新生血管数量及面积缩小比例

与0%组比较，25%组、50%组创面IL-2表达、新生毛细血管数量及面积缩小比例增加，但差异无统计学意义(P>0.05 )；与0%组比较，75%组、100%组创面IL-2表达、新生毛细血管数量及面积缩小比例显著增加，差异有统计学意义(均P<0.05)，但2组间差异无统计学意义(P>0.05 )。见表1。

表1 5组创面IL-2表达、新生血管数量及面积缩小比例比较

3 讨论

慢性皮肤溃疡在临床上较为常见，溃疡部位多存在于四肢和躯干。该病症的形成原因复杂，临床表现也各不相同，其特点是病程较长、治愈困难[8]。伤口愈合是一个非常复杂的过程，涉及一系列重叠和相互影响的过程，在正常情况下，伤口会愈合。然而，当创面环境缺氧且淋巴引流较差时，坏死组织的存在、促炎细胞因子和蛋白酶升高，使得伤口愈合延迟[9]。药物促进体表创伤(机械创伤、烧伤和内外溃疡等)愈合能力有限，慢性创面(褥疮、糖尿病性溃疡、下肢静脉曲张慢性溃疡)尤其是让临床医生感到棘手的难题，康复新液的应用为解决这些难题提供了契机。

康复新液为我国李树楠教授利用美洲大蠊虫体提取物制成的中药制剂。美洲大蠊广泛分布于世界各地的亚热带和热带地区[10]。现有的生理和药理研究表明，美洲大蠊的虫体成分有良好的组织修复、抗菌[11]、抗肿瘤[12]和增强免疫力[13]等功效。此外，数百年来这种昆虫已被广泛应用于中医，作为一种重要的生物医学成分，用于治疗中医证候，如血瘀、溃疡、烧伤和伤口等[14]。近来有研究[15]发现，它的有效成分是肽类、多元醇类、粘氨酸、粘糖氨酸。粘糖氨酸，具有抑菌抗炎、去腐生肌、促进肉芽组织生长、改善创面微循环、促进血管新生、加速组织修复再生、消除水肿和增强肌体免疫功能等作用。粘氨酸、粘糖氨酸等可增强机体免疫功能，同时还具有抗炎作用。肽类、多元醇类等可迅速修复各种创面、促进组织再生。此外，康复新液刺激性小、渗透力强，能充分发挥药效，其操作方法简单易行，治疗效果令人满意[16]。

创面局部IL-2的产生可改变创面愈合的过程。伤口中IL-2的来源包括巨噬细胞、淋巴细胞和角质形成细胞[17-19]，有研究[20-21]发现，在伤口愈合过程中，这些细胞能够对IL-2做出反应。IL-2影响伤口的机制是通过在伤口部位的t细胞和其他淋巴细胞起作用。通过激活分化簇3(CD3)抗体和成纤维细胞生长因子(FGF)可以促进T细胞IL-2的产生[22]。因为T细胞存在于创伤部位并被激活，而创伤部位包含生长因子FGFs等，所以这种对IL-2和FGF的反应代表了T细胞在创伤中产生IL-2的机制。这种局部产生的IL-2可以通过促进伤口部位的免疫和皮肤细胞增殖和分化来影响愈合的速率和质量。这些发现也可能表明，在创伤中有一种前馈机制，伤口中的FGF通过免疫细胞增加IL-2产生。伤口部位的皮肤细胞也能直接对IL-2做出反应，这可能会改变它们和周围细胞的行为。例如，IL-2信号通路可能直接影响创伤部位成纤维细胞的活性。一些研究[23-24]表明，成纤维细胞表达白细胞介数-2受体(IL-2R)，特别是b和g亚基，它们能够进行信号转导。人类皮肤成纤维细胞在某些情况下也可以产生IL-2，IL-2与IFN-a协同促进局部内皮细胞生长和血管生成，这对于伤口部位的血管重建是必要的[21]。

通过上述的相关研究，笔者发现IL-2作为一种生长因子，在皮肤创面的愈合过程中起着重要作用。本研究中，通过检测溃疡创面中IL-2的含量，得出随着冲洗创面的康复新液浓度的增加，创面中IL-2的表达也逐渐增多，而创面的新生毛细血管数量及创面缩小的比例也在逐步增加，创面的消灭是皮肤溃疡治疗的主要评判依据，根据各组的对比结果，得出当冲洗浓度大于75%时，创面缩小的比例较生理盐水组有明显差异，而75%组与100%组之间无明显差异。鉴于此，结合经济因素考虑，笔者认为，75%的康复新液浓度是溃疡创面冲洗治疗的最佳浓度。