超高效液相串联质谱法同时测定二陈汤中麻黄碱和甘草酸的含量

孔 玮

（镇江市第一人民医院西药库 江苏 镇江 212000）

二陈汤由半夏、茯苓、橘红与甘草等组成，其为中医治痰通剂，既可祛已生之痰，亦可杜生痰之源，全方可共奏理气和中与燥湿化痰之功[1]。高效液相测定成分含量低等中药质量标志物难度较高，具有样品处理复杂、精度不足与分析时间过长等缺点，超高效液相串联质谱法（UPLC-MS/MS）前处理相对简单，可兼具分离、定量定性分析，适用于中药成分定量、确证分析，具有选择性佳、灵敏度高与分析时间短等优势[2-3]。鉴此，本研究探讨超高效液相串联质谱法同时测定二陈汤中麻黄碱、甘草酸的含量。

1.仪器与材料

1.1 试验仪器

Quattra Premier 质谱仪（色谱工作站：Masslynx 4.0）；MixOne 涡旋仪；SQP 电子天平；MICRO-17R 冷冻离心机；UPH-Ⅲ型优普超纯水机。

1.2 药品与试剂

二陈汤处方药材均购于济南市建联大药房，药材质量均符合2015 年版《中华人民共和国药典》规定，实验样品均为自制，含3 批（200307，200313，200318）；盐酸麻黄碱对照品，甘草酸对照品；水为超纯水，乙腈、甲醇铵与甲酸为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2.方法与结果

2.1 色谱与质谱条件

色谱与质谱条件，见表1、2。麻黄碱、甘草酸质谱，见表3。

表1 色谱条件

表2 质谱条件

表3 麻黄碱、甘草酸质谱参数

2.2 对照品溶液制备

精密称量适量麻黄碱、甘草酸对照品，以50%乙腈水对麻黄碱、甘草酸对照品进行溶解，制备成0.1 μg/mL麻黄碱溶液、0.02 μg/mL 甘草酸溶液，并对麻黄碱、甘草酸对照品溶液依次行倍比稀释，得到含麻黄碱0.100、0.080、0.040、0.020、0.010、0.005 与0.003 μg/mL 浓度的对照品溶液，含甘草酸0.020、0.016、0.008、0.004、0.002、0.001 与0.001 μg/mL 浓度的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

二陈汤组方含法半夏、橘红各15 g、茯苓9 g 与甘草6 g。取一剂二陈汤饮片，加入饮片10 倍量的水，每次煎煮1 h，煎煮3 次后对水煎液进行合并，于2 层纱布将滤液进行浓缩，最后得到300 mL 汤液。精密吸取1 mL 并置于100 mL 量瓶中，应用50%乙腈水溶液对其进行溶解定容，在50 W、40 KHz 超声下处理10 min，在12 000 r/min 离心5 min。取上清液1 mL 置于100 mL 量瓶中，以50%乙腈水稀释即为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

精密吸取5 μL 各浓度含麻黄碱、甘草酸对照品溶液，以上述色谱条件进样测定，以横坐标（X）为浓度、纵坐标（Y）为峰面积对标准曲线进行绘制，见表4。结果表明在相应范围内麻黄碱、甘草酸浓度与峰面积呈良好线性关系。

表4 线性关系考察

2.5 精密度试验

选取0.080、0.020 与0.005 μg/mL 浓度麻黄碱对照品溶液，0.016、0.004 与0.001 μg/mL 浓度甘草酸对照品溶液，以5 μL 进样量分别重复进样5 次，以上述色谱条件进样测定，对峰面积进行记录。试验显示：麻黄碱RSD 分别为1.84%、1.42%、1.53%（n = 5）；甘草酸RSD分别为1.93%、1.65%、2.51%（n = 5）。试验显示仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验

以上述方法将实验样品（200307）制备为供试品溶液，以同样色谱条件进样测定室温进样室放置0、4、8、12与24 h 时的供试品溶液，对峰面积进行记录。试验显示：麻黄碱峰面积RSD 为2.14%（n = 5），甘草酸峰面积RSD为1.98%（n = 5）。试验显示24 h 内室温条件下试品溶液稳定。

2.7 重复性试验

取批号200307 样品，共6 份，以上述方法制备供试品溶液，以同样色谱条件进样测定。试验显示：麻黄碱含量RSD 为2.72%（n = 6），甘草酸峰面积RSD 为3.06%（n = 6）。试验显示本研究方法重复性良好。

2.8 加样回收率试验

精密量取0.05 mL 批号为200307 的已知含量样品，待各适量对照品溶液分别精密加入后，以上述方法进行制备，待测定后计算回收率，见表5。

表5 加样回收率试验结果

2.9 样品含量测定

取 二 陈 汤 实 验 样 品3 批（200307，200313，200318），以上述方法制备供试品溶液，以同样色谱条件进样测定，对3 批二陈汤实验样品中麻黄碱、甘草酸含量进行计算，见表6。

表6 样品含量测定结果（μg/mL）

3.讨论

现代药理学研究发现，二陈汤方中具有橙皮苷、麻黄碱、甘草酸与齐墩果酸等多种有效成分，具有祛痰平喘、镇咳、抗炎、抗菌、调节胃肠功能与止吐等多方面药理作用[4]。麻黄碱具有抗炎、抗病毒、抗菌、镇咳平喘、收缩血管与松弛平滑肌等药理作用，具有良好的平喘功效，当摄入过量时可能导致心动过速、血压升高与平滑肌迟缓等不良反应。甘草酸具有解毒、抗病毒、抗氧化与免疫调节等药理作用，具有保肝、抗癌、增强免疫力等功效[5]。

二陈汤成分较为复杂，各成分相互干扰较严重，甘草酸紫外吸收弱且含量较低，应用HPLC-UV 检测难以定量分析其中活性成分。本研究应用UPLC-MS/MS 同时测定二陈汤中麻黄碱、甘草酸含量，通过多反应离子监测对麻黄碱、甘草酸等成分进行高选择性、灵敏度定量分析，分析速度快。本研究比较不同规格色谱柱，选择ACE Excel 3 C18（2.0 mm×100 mm，3 μm）所得色谱峰峰形较好，试验过程中对比流动相组成比例，依据考察结果，当乙腈-2 mmol/L 甲酸铵水溶液（75 ∶25）时麻黄碱、甘草酸分离良好，具有较好的峰形且出峰时间短。同时分别尝试应用正、负两种离子模式进行检测，发现在负离子模式下甘草酸具有较良好的响应，在正离子模式下麻黄碱具有较良好的响应，故选择正、负离子同时进行检验。

在二陈汤麻黄碱、甘草酸成分含量检测中应用UPLCMS/MS 效果良好，具有灵敏度高、分析时间短与操作较简单等优势，可为二陈汤质量控制提供依据。