DCLK1、Ki67在结直肠癌组织中的表达及临床特征分析

潘燕芳 孙奇 李秋云 姜海雅

结直肠癌的发病初期具有隐秘性，但是随着病情发展会逐渐出现一系列症状。据不完全数据显示，我国结直肠癌占据大肠疾病70%左右，结直肠癌的发病与饮食及外部环境相关，摄入大量高脂肪会加快结直肠癌的发生[1，2]。结直肠癌病变的主要位置在直肠与乙状结肠交汇处，早期无显著临床特征，出现腹痛等症状多为进展性病情，因此，提前预防、及时治疗十分重要。结直肠癌的产生、进展和多种基因密切相关[3，4]。Ki67蛋白是一种增殖细胞相关的核蛋白，可反映细胞的增殖情况，并且是重要肿瘤细胞增殖标记物，参与恶性肿瘤的发生发展。Ki67是国内临床病理检测使用广泛的肿瘤增殖标志物，在细胞核中表达，往往与患者预后相 关[5]。DCLK1对消化系统有一定的影响，有研究发现DCLK1在胃癌组织中较癌旁组织及正常组织中阳性发生率高，表明其与胃癌的预后有直接关系[6]。因此，现对DCLK1、Ki67在结直肠癌组织中的表达及临床特征进行分析。

1 材料与方法

1.1 一般资料随机选取2018年2月～2020年1月我院收治的结直肠癌患者100例，男女各50例，年龄38～71岁，中位年龄（47.35±9.16）岁；高分化18例、中分化51例、低分化31例。纳入标准:①符合结直肠癌的临床诊断；②病理学、分子生物学等资料均完整；③严格遵循本研究要求接受手术、病理学检查，保证本次研究结果高度准确；④入组前未接受任何放疗等治疗方法，其中诊断性手术除外。

排除标准:①非结直肠癌患者且资料收集不完整者；②DCLK1、Ki67检测结果不明确，无法判定结果者；③精神疾病者；④存在严重机体器官功能障碍及对本研究存在禁忌者。

1.2 方法本组手术患者均经病理科明确诊断为结直肠癌，收集结直肠癌组织标本，应用免疫组化技术予以DCLK1、Ki67检验，其检验过程如下:将结肠癌组织切开于中性福尔马林溶液中充分固定，按病理组织取材标准取材，脱水、包埋后，防脱片切片，烤片机烤片，65℃烤2h备用，按照LEICA BOND-MAX规范流程上机染色，一抗孵育20min，封片。DCLK1及Ki67购自福州迈新生物技术开发有限公司。DCLK1染色结果标准：蛋白表达阳性细胞数量<10%为阴性，≥10%为阳性，50%～75%为强阳性，≥75%为极强阳性。Ki67染色结果标准：①按阳性细胞数记分：阳性细胞数≤14%记为0分，15%～25%记为1分，26%～50%记为2分，>50%记为3分；②按染色强度记分：无颜色记为0分，浅黄色记为1分，黄色记为2分，棕黄色记为3分；最终染色结果评判标准为①+②≤1分为阴性，≥2分为阳性。

1.3 统计学方法采用SPSS 23.0软件分析，计数指标用n（%）表示，行χ2检验，P<0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 DCLK1、Ki67阳性表达率DCLK1、Ki67阳性表达率分别为43.0%（43/100），55.0%（55/100）。

2.2 DCLK1、Ki67与结直肠癌患者的病理特征关系肿瘤直径≥5cm，肿瘤肠壁侵袭浆膜外及发生淋巴结转移患者的DCLK1及Ki67阳性表达率较高（P<0.05）。且DCLK1及Ki67与肿瘤直 径、肿瘤肠壁侵袭部位、是否淋巴结转移具有正相关性，其中肿瘤直径由小变大存在DCLK1、Ki67表达升高趋势，Pearson分析（r=0.197、P=0.049，r=0.242、P=0.015），肿瘤肠壁侵袭由黏膜层到黏膜外存在DCLK1、Ki67表达升高趋势，Pearson分析（r=0.260、P=0.009，r=0.257、P=0.014）淋巴结转移由无到有存在DCLK1、Ki67表达升高趋势，Pearson分析（r=0.231、P=0.021，r=0.227、P=0.023）。结直肠癌患者肿瘤不同分化程度、不同TNM分期的DCLK1、Ki67表达率差异有统计学意义（P<0.05），且肿瘤分化程度由高分化向低分化存在DCLK1、Ki67表达升高趋势，Pearson分析（r=0.638、P=0.012，r= 0.522、P=0.019）；TNM分期由Ⅰ期向Ⅳ期DCLK1、Ki67表达呈升高趋势（r=0.418、P=0.026，r=0.402、P=0.028）。见表1。

表1 DCLK1、Ki67与结直肠癌患者的病理特征关系[n（%）]

2.3 DCLK1、Ki67表达对预后的影响DCLK1阳性表达患者1年生存率为76.74%（33/43）低于阴性表达患者的92.98%（53/57），差异有统计学意义（χ2=5.368，P=0.021）；Ki67阳性表达患者1年生存率74.55%（41/55）低于阴性表达患者的91.11%（41/45），差异有统计学意义（χ2=4.602，P=0.032）。

3 讨论

早期直肠癌患者通过手术治疗可以痊愈，但是有些患者有临床症状时为进行病变期，目前术前采用放化疗可减小患者病灶面积，利于手术成功。对直肠癌患者根据病理程度进行TNM分期，有利于患者预后，大量临床资料表明DCLK1、Ki67表达与结肠癌预后有明显的关系[7，8]，并应用于临床指标观察，因此本研究通过对100例结直肠癌患者进行DCLK1、Ki67表达检测，探讨其对病理分期及预后的影响。

DCLK1为肿瘤干细胞标志，有国外研究学者以选择性消除DCLK1阳性细胞的方式进行动物模型实验，发现抑制癌细胞生长的微小RNA-144含量增加，而促使肿瘤发生的肿瘤干细胞基因、上皮间质转化转录因子表达水平均下降，提示DCLK1可经上述因素参与恶性肿瘤的发生和发展[9]。研究证明，通过抑制结肠癌患者癌细胞内DCLK1表达后，患者的成瘤性显著下降，提出DCLK1和结直肠癌发生密切相关[10]。Ki67作为增殖性抗原标志物被首次认知，并在多种恶性肿瘤中发挥重要作用，其生物活性广泛，其抗原属于核酸蛋白，能够调控细胞增殖，在细胞核中增多，是细胞繁殖的基础。有文献表示，Ki67与细胞基因RNA转录相关，其抗原活性降低能够导致RNA合成受限[8]。在结肠癌疾病中，Ki67是评估癌细胞活性应用强度最高的分子指标[7]。Ki67在结肠癌细胞（除G0期）周期中显著表达，在M期表达最高，能够成为诊断结肠癌疾病的早期预测指标之一。早期结肠癌组织中Ki67呈现强阳性表达往往意味着患者淋巴结转移，转移风险更大[11]。研究表明检测结肠癌患者组织标本的Ki67水平，发现其水平与患者肿瘤直接相关，对淋巴结转移具有促进作用[12]。因此结直肠癌早期诊断Ki67阳性表达率对控制病情具有重大意义。本研究发现DCLK1、Ki67阳性表达率分别为43.0%（43/100）、55.0%（55/100），肿瘤直径≥5cm、肿瘤肠壁侵袭浆膜外、淋巴结发生转移、肿瘤分化程度低以及肿瘤分期高的患者DCLK1、Ki67阳性表达率高。且DCLK1、Ki67在结直肠癌患者中的表达与患者肿瘤直径、肠壁侵袭位置、转移情况、肿瘤分化程度和TNM分期呈正相关。表示随着结直肠癌的发展，患者DCLK1及Ki67阳性表达率越高。同时，随着病情进展，DCLK1、Ki67阳性表达率高的患者其肿瘤直径大，发生淋巴结转移率高。DCLK1、Ki67阳性表达患者1年生存率均低于阴性表达患者，进一步提示临床监控DCLK1、Ki67水平对早期识别患者病情，控制预后具有积极作用。这与国内其他研究相似[13，14]。

综上所述，DCLK1、Ki67在结直肠癌疾病检测中阳性表达率较高，与患者临床病理关系密切，可作为结直肠癌患者预后的分子标志物。