19%啶氧.丙环唑微乳剂分析方法研究

张常庆， 曹俊丽， 陈少雁， 余德勉， 张 钊

(上海悦联生物科技有限公司，上海 201215)

关键字：啶氧菌酯; 丙环唑

啶氧菌酯是含氟类的甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂产品，属于内吸性广谱杀菌剂，具有保护、渗透和内吸作用。其作用机理是药剂进入病菌细胞内后，阻断细胞色素b和细胞色素c1之间的电子传递，从而抑制线粒体的呼吸作用，破坏病菌的能量合成及循环。

丙环唑是一种广谱性的三唑类杀真菌剂，作为一种由保护和治疗作用的内吸性叶面杀菌剂，可被根、茎、叶部吸收，并通过木质部向上传导。丙环唑主要通过干扰真菌细胞膜上类固醇生物合成及抑制麦角甾醇的形成来抑制或干扰菌体附着胞及吸器的发育、孢子形成和破坏菌丝细胞结构，从而降低病原菌的致病力。

将啶氧菌酯和丙环唑2个药剂以适当比例混配使用，具有保护和治疗活性，杀菌谱广、活性高；且具有渗透、内吸和扩散分布能力，在植物中的重新分布能够既保护已有叶片也能保护新生组织；同时还能够促进作物健康，具有提高作物抗逆能力和显著增加作物叶绿素含量等特点。

根据文献报道，丙环唑有气相[1]和液相[2-3]分析方法，啶氧菌酯的液相[4-5]分析方法，丙环唑和啶氧菌酯气相和液相分析的方法都具有较好的准确度和精密度。但丙环唑和啶氧菌酯同时分析的方法还尚未见报道。由于19%啶氧·丙环唑微乳剂(7%+12%)为复配制剂，在实际生产中，如果两个组分单独测定易耗费时间。经过试验，摸索出一个在同一条件同时测定丙环唑和啶氧菌酯的分析方法。经过实验验证，此分析方法具有较好的准确度和精确度。

1 材料仪器

1.1 样品和试剂 乙腈：色谱纯；冰乙酸：分析纯；水：二次重蒸；啶氧菌酯标样：已知啶氧菌酯含量≥98.0%；丙环唑标样：已知丙环唑含量≥98.0%；流动相：乙腈+水=60+40(V/V)冰乙酸调pH=3.0，流动相经0.45um孔径的滤膜，并在超声波浴槽中脱气10min。

1.2 仪器 高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器；色谱数据处理机；色谱柱：Φ4.6mm×150mm不锈钢柱，内装CAPCELL PAK C18/5μm为填充料的不锈钢柱。

1.3 高效液相色谱操作条件 流量：1.0mL/min；柱温：室温(温差变化<2℃)；检测波长：230nm；

进样体积：5μL；保留时间：丙环唑A约7.7min，丙环唑B约7.9min，啶氧菌酯约10.0min。

上述操作参数是典型的，可根据仪器的特点，对给定的操作参数做适当调整，以期获得最佳效果，典型的啶氧菌酯(丙环唑)高效液相色谱图(图1)。

2 实验方法

2.1 标样溶液的配置 称取啶氧菌酯标样0.05g和丙环唑标样0.09g(精确到0.000 2g)，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，超声振荡5min使样品溶解，冷却至室温，摇匀。

2.2 试样溶液的配置 称取含啶氧菌酯0.05g(精确到0.000 2g)样品，置于100mL容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，超声振荡5min使试样溶解，冷却至室温，摇匀，过滤，备用。

2.3 试样的测定 在上述操作条件下，待仪器稳定后，连续注入数针标样溶液，计算各针相对响应值的重复性，待相邻2针的响应值变化<1.0%后，按照标样溶液，试样溶液，试样溶液，标样溶液的顺序进行测定。

2.4 试样中有效含量的计算 将测得的2针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中的峰面积分别进行平均，试样中啶氧菌酯(丙环唑)的质量分数X1(%)按式(1)计算：

(1)

式中：

A1—标样溶液中啶氧菌酯(丙环唑)峰面积的平均值；

A2—试样溶液中啶氧菌酯(丙环唑)峰面积的平均值；

m1—啶氧菌酯(丙环唑)标样的质量，g;

m2—啶氧菌酯(丙环唑)试样的质量，g；

P—啶氧菌酯(丙环唑)标样的质量百分数，%。

3 结果与讨论

3.1 流动相和波长选择 首先对19%啶氧·丙环唑微乳剂中有效成分啶氧菌酯、丙环唑在DAD条件下做紫外吸收扫描(图2～3)，由(图2～3)并结合分析中助剂杂质干扰因素(图4)，选定检测波长为230nm。在乙腈、水中调节比例，将啶氧菌酯和丙环唑进行有效分离，同时避免助剂和杂质干扰，最后确定为乙腈：水=60：40冰乙酸调节ph3.0作为流动相，在此条件下对19%啶氧·丙环唑微乳剂中啶氧菌酯、丙环唑纯度扫描。19%啶氧·丙环唑微乳剂中啶氧菌酯、丙环唑的峰纯度均>99.9%，19%啶氧·丙环唑微乳剂中啶氧菌酯、丙环唑中有效成分出峰位置无明显物质干扰，符合定量分析要求。

图2 19%啶氧.丙环唑微乳剂中啶氧菌酯HPLC-DAD特异性扫描图

图3 19%啶氧.丙环唑微乳剂中丙环唑HPLC-DAD特异性扫描图

图4 19%啶氧.丙环唑微乳剂制剂空白图

3.2 分析方法的线性相关性实验 准确配制一系列不同浓度的啶氧菌酯和丙环唑标样溶液，然后分别按2.3测定步骤进行分析检测，分别以啶氧菌酯和丙环唑的重量为横坐标，啶氧菌酯和丙环唑峰面积为纵坐标，计算一元线性回归方程和作线性相关图。线性相关性测定试验数据(表1)。

啶氧菌酯一元线性回归方程：y=11.736 00x-0.032 42，相关系数：R2=1.000 0。

图5 啶氧菌酯线性关系图

丙环唑一元线性回归方程：y=6.186 32x+0.135 97，相关系数：R2= 0.999 9。

图6 丙环唑线性关系图

3.3 分析方法的精密度实验 任取一批19%啶氧·丙环唑微乳剂，按本标准中2.3测定步骤连续测定啶氧菌酯、丙环唑含量10次，分别计算其标准偏差、变异系数。精密度测定试验数据(表2)。

表2 啶氧菌酯、丙环唑精密度测定试验数据表

从啶氧菌酯、丙环唑精密度测定数据表中可以看出，啶氧菌酯的标准偏差0.028，变异系数为0.40%、丙环唑的标准偏差为0.035，变异系数为0.28%。

3.4 分析方法的准确度实验 选取已知含量的19%啶氧·丙环唑微乳剂样品，准确称取5份，并分别加入定量的啶氧菌酯、丙环唑标样，然后按本标准中2.3测定步骤测定啶氧菌酯、丙环唑标样的加入量，同理论值进行比较，计算回收率。回收率测定试验数据(表3)。

表3 回收率测定试验数据表

按照本标准规定的方法进行检测试验啶氧菌酯、丙环唑的回收率分别为：99.30%～100.99%、98.64%～101.69%之间，啶氧菌酯和丙环唑的平均回收率分别为100.43%和99.79%。

4 结论

结果表明，本文中建立的同柱分析19%啶氧·丙环唑微乳剂中啶氧菌酯和丙环唑的方法在测定该制剂中的啶氧菌酯和丙环唑含量的准确度和精密度较高，线性关系良好。由于一次即可测定啶氧菌酯和丙环唑的含量，使得该方法快速、简便，适合于产品的质量检测和控制。