高效液相色谱-串联质谱法 测定鸡肉中林可霉素残留

王 祺，马增辉，王莉佳，杨毅青

（山西省食品药品检验所，山西太原 030031）

林可霉素是一种大环内酯类抗生素，价格低廉、抗菌能力强，可抑制细菌细胞的蛋白质合成[1]。饲料中添加林可霉素，可促进畜禽类动物的生长。为了保护消费者的健康，建立食品安全屏障，研究畜禽肉中林可霉素残留检测方法尤为重要。目前检测方法有GC[2]、GC-MS[3]、LC-MS法[4]。GC法与GC-MS法检出限高且需要衍生化反应，过程复杂；LC-MS法灵敏度高，检出限低，但是用内标法定量，成本较高[5]。本研究选取代谢周期较短、林可霉素的残留相对较多的鸡肉为试验材料，采用随行回收试验，参照 GB/T 20792—2006，采用外标法定量建立高效液相色谱-串联质谱法检测林可霉素残留的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

鸡肉（购自某超市）；林可霉素（中国食品药品检定研究院，批号：130432，含量85.5%）；甲醇、乙腈、正己烷均为色谱纯；甲酸铵、磷酸二氢钠、氢氧化钠、氯化钠均为优级纯；实验室一级超纯水。

1.2 仪器与设备

岛津8050液相色谱-质谱串联仪；粉碎机；涡旋混合器；离心机；氮气浓缩仪；固相萃取装置；OHAUS电子天平（精密度0.001 g）；PEP-2固相萃取柱（500 mg/6 mL）。

1.3 实验方法

1.3.1 试样提取方法及净化

将样品充分搅碎混匀，准确称取试样约5 g（精确至 0.01 g），置于50 mL离心管中，加入15.0 mL乙腈，于涡旋混合器上2 000 r/min振荡10 min，以5 000 r/min的转速离心5 min，取上清液于另一个离心管中，加入2.0 g氯化钠和10.0 mL正己烷，2 000 r/min涡旋振荡10 min，以 5 000 r/min的转速离心10 min，吸取全部中间乙腈层于另一个离心管中用氮气浓缩仪于55 ℃水浴中吹至近干。

用7 mL磷酸盐缓冲液（0.1 mol/L；pH=8）分两次溶解残渣，使样液以小于1.0 mL/min的流速通过固相萃取柱，样液全部流出后，用10 mL水和5 mL甲醇＋水溶液（2＋3）洗柱，弃去全部流出液，固相萃取柱用真空泵抽干，再用10 mL甲醇洗脱于15 mL离心管中，55 ℃水浴用氮吹至近干，准确加入1.0 mL甲酸铵溶液（0.1 mmol/L）溶解残渣，过 0.22 μm滤膜，待测定，按上述步骤制备空白样品提取液。

1.3.2 标准溶液及工作曲线配制

（1）标准储备溶液配制。准确称取林可霉素13.90 mg，用甲醇溶解定容至10 mL容量瓶刻度，混匀，得浓度为 1.19 mg/mL标准储备液，4 ℃保存。

（2）基质标准工作系列配制。吸取0.1 mL林可霉素标准储备液置于10 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，混匀，得浓度为11.90 μg/mL标准中间液。吸取0.1 mL林可霉素中间液于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，混匀，得浓度为119 ng/mL的标准工作液。再精密吸取林可霉素标准工作液，样品空白提取液稀释成2.38 ng/mL、5.94 ng/mL、11.88 ng/mL、23.76 ng/mL和59.40 ng/mL浓度系列基质标准工作溶液。

1.3.3 液相色谱-质谱条件

（1）液相条件。色谱柱：YMC（1.9 μm×150 mm×2.1 mm）；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；流动相由乙腈（A）和0.1 mmol/L甲酸铵溶液（B）组成，流速：0.3 mL/min。梯度洗脱程序为：0～3.0 min，5%A＋95%B；3.0～3.1 min，60%A＋40%B；3.1～6.1 min，95%A＋5%B；6.1～9.0 min，5%A＋95%B。

（2）质谱条件。离子源类型：ESI；离子源温度：350 ℃； 雾化器流速：3.0 mL/min；干燥气流速：10 mL/min；扫描方 式：正离子；扫描模式：MRM；质谱参数：Q1（m/z）：407.3；Q3（m/z）：126.2（定量）/359.1；CE（V）：27/17。

2 结果与分析

2.1 线性范围及检出限

以标准工作溶液浓度为横坐标，以林可霉素测得峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得出标准曲线方程为 y=43 770.7x-16 110.8，相关系数R=0.999 7，表明线性关系良好，根据3倍信噪比计算，检出限为1.0 μg/kg，满足国家食品安全监督抽检农产品中林可霉素要求检出限 1.0 μg/kg，图1为林可霉素1.0 μg/kg添加量质谱图。

图1 林可霉素1.0 μg/kg添加量质谱图

2.2 方法回收率与重复性

取阴性样品鸡肉，添加检出限、2倍检出限、10倍检出限3种浓度水平的林可霉素标准溶液进行加标回收试验，其余操作同上述供试品溶液制备，每个浓度平行测定6次，计算加标回收率和重复性RSD，测得结果见表1。

表1 加标回收率及精密度试验结果

2.3 精密度与稳定性试验

选用基质标准工作液5.94 ng/mL连续进样6次记录峰面积，根据峰面积计算精密度，RSD为2.41%。同时24 h内每隔4 h测定一次，并记录峰面积，根据峰面积计算稳定性，RSD为6.63%，表明方法稳定性良好。

3 结论

本研究建立的高效液相色谱-串联质谱法检测鸡肉中林可霉素残留的方法，林可霉素保留时间相对稳定，线性关系、重复性、回收率、精密度及稳定性等考察结果良好，能满足实验室对鸡肉中林可霉素残留检测的需求，为研究畜禽肉中林可霉素残留检测提供依据。