Lp-PLA2 基因多态性与心肌梗死的相关性分析

马莎 杨建

摘  要：目的  探究汉族人群脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）基因A379V位点多态性与心肌梗死的相关性。方法  研究时间为2019年1月～2020年12月，以期间济宁市兖州区人民医院收治的200例心肌梗死患者和200名健康体检者为对象开展研究。心肌梗死患者设为观察组，健康体检者设为对照组，采集两组受试者的血液标本，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术进行Lp-PLA2基因A379V位点上的单核苷酸多态性检测，并采用logistics回归模型分析Lp-PLA2基因突变与心肌梗死的相关性。结果  观察组的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、Lp-PLA2水平与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）;A379V位点上检测到CC、CT、TT三种基因型，观察组A379V位点上的TT、CT基因分布频率明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）;logistics回归分析结果显示，Lp-PLA2基因A379V位点的基因多态性与急性心肌梗死的发生密切相关（P<0.05）。结论  Lp-PLA2基因多态性与心肌梗死的发生密切相关，Lp-PLA2基因A379V位点突变可能是导致心肌梗死发生的重要原因。

关键词：心肌梗死;脂蛋白相关磷脂酶A2;基因多态性;基因突变

中图分类号：R542.2+2    文献标识码：A    文章编号：1009-8011（2021）-16-0158-02

心肌梗死（MI）是冠心病分型中致死率最高的一种，也是目前威胁群众生命安全的主要疾病。MI的发生与多种因素有关，如环境因素、饮食因素、心理因素、遗传因素等，临床目前认为，动脉粥样硬化是导致MI的主要病理基础，但MI的遗传因素影响一直是临床研究的重点课题[1]。发现MI的遗传特点，能够帮助临床快速完成高危人群的筛查和预防，减少MI的发生。相关研究证明[2]，单核苷酸多态性（SNPs）可能是导致机体易感性差异的主要原因，同时也可能影响机体动脉粥样硬化进程和炎症反应等，这都是导致MI发生的重要因素。脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-PLA2）属于磷脂酶超家族，与血小板的激发和活性密切相关，目前已有研究证实Lp-PLA2主要受基因因素调控，部分基因位点的突变会影响Lp-PLA2活性，从而影响MI的发生率[3]。但Lp-PLA2的基因多态性受到地域、种族等因素的影响，因此在Lp-PLA2多态性与MI的相关性上仍存有争议。本文就汉族人群Lp-PLA2基因多态性与MI的相关性进行了研究分析，现报道如下。

1  资料与方法

1.1  一般资料

研究时间为2019年1月～2020年12月，以济宁市兖州区人民医院收治的200例心肌梗死患者和200例健康体检者为对象开展研究，心肌梗死患者设为观察组，健康体检者设为对照组。观察组包括男性112例，女性88例;年龄45～81岁，平均年龄（62.40±9.70）岁。对照组包括男性109例，女性91例;年龄38～82岁，平均年龄（61.80±10.40）岁。两组基本资料对比，差异无统计学意义（P>0.05）。本次研究已通过医院医学伦理委员会审批。

1.2  纳入与排除标准

纳入标准：①经冠脉造影确诊为MI;②符合中华医学会心血管病学分会提出的MI诊断标准[4-5];③汉族;④本地居住时间超过20年。

排除标准：①合并主动脉夹层、扩张型心肌病等心脏疾病者;②合并严重脏器功能不全、恶性肿瘤、自身免疫疾病或严重感染者;③与同组间其他受检者有血缘关系;④合并精神疾病者。

1.3  方法

1.3.1  血清采集

观察组在入院后24 h内采集血液样本，对照组则在预约体检当天采集样本，均取空腹静脉血7 mL，其中5 mL分离血清，保存于-80 ℃下备用，做总胆固醇（TC）、甘油三酯胆固醇（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）及Lp-PLA2检测，其余2 mL样本进行DNA提取。

1.3.2  DNA提取

取0.3 mL血液样本置于1.5 mL EP管，加0.7 mL的TBP缓冲液，混匀后在3000 rpm条件下离心5 min，弃上清，加入0.5 mL的TBP缓冲液及10 μL蛋白酶K，55℃下孵育1 h，振荡混匀后离心，取上清，与0.3 mL无水乙醇混匀，将混合液置入收集管，离心后弃液体，取DNSC柱加入0.5 mL的AW1缓冲液，离心后弃液体并重复以上步骤1次，取DNSC柱并加入0.2 mL的AE缓冲液，离心后弃液体并重复以上步骤1次，提取获得的DNA做凝胶电泳，进行浓度测定。

1.3.3  PCR-RFLP

查找NCBI中關于Lp-PLA2的Primer 5.0设计引物信息，A379V目的基因片段的PCR引物序列为：上游5-CAGACCAACAAGACCAGTACCTT-3，下游5-GACAGCTTTGTCCTGAGATTCAT-3，扩增长度300 bp。

1.4  观察指标

对比两组TC、TG、HDL-C、LDL-C及Lp-PLA2指标，对比两组Lp-PLA2在A379V位点上的T基因分布频率差异性。

1.5  统计学分析

数据采用SPSS 22.0软件做统计学处理，组间计量资料以（x±s）表示，对比用t检验，计数资料以[n（%）]表示，对比用χ2检验，以MI为因变量进行多因素logistics回归分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2  结果

2.1  血脂及Lp-PLA2水平对比

观察组的TC、TG、LDL-C、HDL-C、Lp-PLA2水平与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2  基因型和等位基因频率分布

A379V位点上检测到CC、CT、TT三种基因型，观察组A379V位点上的TT、CT基因分布频率明显高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表2。

2.3  logistics回归分析

结果显示，Lp-PLA2基因A379V位点的基因多态性（TT、CT）与急性心肌梗死的发生密切相关，差异有统计学意义（P<0.05）。见表3。

3  讨论

心血管疾病（CVD）是全球范围内的主要死亡原因之一，在CVD中，冠心病占所有心血管疾病死亡的一半，是发达国家最常见的死亡原因[6]。

目前临床认为，动脉粥样硬化是导致MI的主要病理基础，但遗传因素也在MI的发生发展中起到了重要的作用。Lp-PLA2属于磷脂酶超家族成员，通过与脂蛋白结合形成非酯化脂肪酸，能够诱发慢性炎症，而炎症反应也是导致MI发生的主要原因之一。Lp-PLA2对内皮功能、炎症、氧化应激、纤溶和斑块稳定性都有不利影响，导致血栓形成和CVD发生。Lp-PLA2基因遗传变异可增加脂蛋白水平，同时也会增加冠心病发病的风险。A379V是Lp-PLA2上的一个重要基因位点，相关研究认为该位点突变能够影响Lp-PLA2的活性，但由于地域、民族等因素的影响，Lp-PLA2与汉族人群MI的发生率是否相关尚未有定论。从本次研究数据来看，观察组患者Lp-PLA2的A379V位点的CC型基因频率降低，而CT、TT型基因频率增加，与对照组的等位基因也有明显差异（P<0.05），而且两组受检者的血脂水平、Lp-PLA2水平也有显著差异（P<0.05），这说明Lp-PLA2的A379V位点基因突变可能会影响机体的血脂水平，该部分基因分型具有作为高脂血症人群MI发生的预测指标。从多因素logistics回归分析结果来看，机体的Lp-PLA2水平和基因型是导致MI发生的独立危险因素，进一步提示Lp-PLA2的A379V位点的基因突变与MI密切相关。

综上所述，Lp-PLA2基因多态性与心肌梗死的发生密切相关，Lp-PLA2基因A379V位点突变可能是导致心肌梗死发生的重要原因。目前蛋白调控参与心血管疾病发展，同时基因调控蛋白发生，我们以期希望从基因水平上，研究蛋白表达，来进一步研究心血管疾病的发病机制，为心血管疾病的诊治提供策略参考。

参考文献

[1]马贺，张家禧，高雯.心肌桥近段冠状动脉粥样硬化性狭窄临床特点及危险因素研究[J].中国循证心血管医学，2017，9（6）：748-750.

[2]Masatoshi F，Tatsuya Y，Fazlul KM，etal.SIRT7 has a critical role in bone formation by regulating lysine acylation of SP7/Osterix[J].Nat Commun，2018，9（1）：2833.

[3]Vazquez BN，Blengini CS，Hernandez Y，etal.SIRT7 promotes chromosome synapsis during prophase I of female meiosis[J].Chromosoma，2019，128（3）：2833.

[4]中華医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会.急性ST段抬高型心肌梗死诊断和治疗指南（2019）[J].中华心血管病杂志，2019，47（10）：766-783.

[5]中华医学会心血管病学分会，中华心血管病杂志编辑委员会.非ST段抬高型急性冠状动脉综合征诊断和治疗指南（2016）[J].中华心血管病杂志，2017，45（5）：359-376.

[6]Persic V， Raljevic D， Markova-Car E， etal. Vitamin D-binding protein （rs4588） T/T genotype is associated with anteroseptal myocardial infarction in coronary artery disease patients.Ann Transl Med.2019，7（16）：374.