犊牛致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

高祥军

摘要：目的：為确诊青海省民和县某奶牛场致犊牛腹泻病死的病原菌以及敏感药物。方法：对病死犊牛进行尸体剖检，采集样本进行细菌分离鉴定、生化试验、药物敏感性试验。结果：在犊牛肠道内检测到一种溶血性大肠杆菌，药敏实验结果对头孢类抗生素敏感。结论，XX地区奶牛养殖场引起犊牛病死的致病菌为大肠杆菌，对头孢类药物敏感，该牧场可用头孢类药物对致犊牛腹泻类疾病进行预防和治疗。

关键词：犊牛;致病性大肠杆菌;分离鉴定;药敏试验

中图分类号：S858.23   文献识别码：A

大肠杆菌作为一种革兰氏阴性菌，广泛的存在于环境中，在不同的条件下可以加引起疾病的发生。牛大肠杆菌可经过消化道、生殖系统等方面感染，且对于犊牛伤害十分严重[1]。大肠杆菌主要表现为引起腹泻、败血症、痢疾、肠毒血症严重者几小时或者1天内死亡[2]。大肠杆菌对于成年牛伤害较小，不会引起很高的死亡率，主要表现为乳房炎，产奶量下降等症状。大肠杆菌作为肠道的常在菌，是各种原因综合引起的疾病，所以在饲养的过程中要加强管理，发生疾病以后要尽快进行相应的处理，做到早发现、早预防、早治疗，采取必要的措施[3]。2021年11月XX地区发生了犊牛腹泻致死的情况，本试验通过对病死犊牛进行病原分离鉴定以及药物敏感性试验，为XX地区的养牛业更好的发展提供有力的保障。

1 材料和方法

1.1病料

病料采集于青海省民和县地区某奶牛养殖场。

1.2 采样

无菌环境下采集青海省民和县地区某奶牛养殖场致死犊牛的肝、肺、脾、肠道。肝、肺、脾取病变与健康交界处的样本，肠道进行结扎保存，保存于无菌培养皿内，保存与4℃环境内尽快进行分离培养。

1.3 试验材料

无菌培养皿、载玻片、血平板、药敏片、革兰氏染色剂、生化试验试剂盒。

1.4 细菌培养

无菌环境下，用酒精棉对样本表面进行消毒，取出表皮后用剪刀切取1cm*1cm的组织块，镊子夹取组织块均匀涂抹于血平板上，肠道样本用接菌环蘸取样本均匀的在血平板进行划线。倒置放于37℃培养箱内培养16小时，观察菌落形态。

1.5 细菌染色

无菌环境内，用接菌环将菌落挑至滴有生理盐水的载玻片上，酒精灯轻烤载玻片，固定完成后，即可进行革兰氏染色，分别草酸铵结晶紫染色1min，清水冲洗干净后碘液染色1min，无水乙醇脱色30s，沙黄复染30秒后进行镜检。

1.6 细菌鉴定

显微镜观察染色后的菌体形态，对菌种进行初步的判定。

1.7 生化试验

根据镜检结果结合临床经验，选择适当的生化试剂，37℃培养36h观察生化管的变化。

1.8 药敏试验

将纯化后的细菌均匀涂布于血平板上，贴药敏片，37℃培养24小时观察结果。

2 结果

2.1 细菌分离结果

血平板培养的结果显示，接种肝、肺、脾、肠道病料中，只有接种肠道内容物的血平板观察到长了溶血性的菌落，菌落形态为灰白色、四周光滑、像水珠状，散发出特殊的气味，镜检结果显示染色后细菌为革兰氏阴性菌，短杆状，个别为球状或长丝状。可初步判定为大肠杆菌。

2.2 生化试验结果

将细菌接种于生化管内可以观察到该类细菌可以引起葡萄糖、乳酸、麦芽糖、甘露醇产酸产气，木糖、山梨醇、阿拉伯糖、硝酸盐阳性产酸、其他几类为阴性，对比生化试验结果显示该种细菌符合大肠杆菌生化特征。

2.3药敏试验

2.4 药敏试验结果

对分离出的大肠杆菌进行药敏试验，结果显示对头孢噻肟、头孢曲松敏感、对阿奇霉素、多西环素中度敏感，对环丙沙星、恩诺沙星 、链霉素耐药。结果见表2

3 讨论

致病性大肠杆菌对于犊牛的伤害十分的严重，且随着疾病发生的增多，发生了很多耐药的情况。2015年普绍林等[4]在云南分离到一株致犊牛腹泻的大肠杆菌并进行了药敏试验，结果显示该细菌对小鼠具有很高得致病性，且对环丙沙星、左氧氟沙星、氧氟沙星、头孢噻肟、头孢哌啶、头孢吡啶、头孢曲松钠高度敏感。2016年刘少昆[5]对北京、天津部分地区的致牛腹泻大肠杆菌进行分离鉴定，并对其耐药性进行分析，结果显示天津、北京地区致病株对诺氟沙星耐药率最高，分别达到100%和86.67%。2017年岳山[6]对于黑龙江部分地区肉牛大肠杆菌的耐药性进行调查结果显示多重耐药性较为普遍，对青霉素、氨苄西林、四环素、甲氧苄啶等药物具有较强的耐药。

本试验检测结果显示该奶牛场引起犊牛腹泻的主要致病菌为大肠杆菌，药敏试验显示该细菌对头孢噻肟、头孢曲松具有较强的敏感、对环丙沙星、恩诺沙星、链霉素耐药。该牧场可选用头孢类药物对该病进行有效的防治。为了减少耐药性的发生，希望大家能够精准用药，避免滥用药，高效的防治疾病的发生，为养牛事业的发展提供一份力量。

参考文献：

[1]严勇，李新圃，武小虎，丁学智，严作廷，王胜义，李宏胜，王旭荣.牛源大肠杆菌研究进展[J].中兽医医药杂志，2020，39（05）：35-41.

[2]崔银雪，敖日格乐，王纯洁，斯木吉德，阿日查，何利娜，张剑，刘波，张晨.致病性大肠杆菌诱发腹泻对犊牛早期肠道黏膜通透性及免疫功能的影响[J].黑龙江畜牧兽医，2020（23）：16-19+27.

[3]赵玉印，姜茹.新生牛犊腹泻大肠杆菌的分离和诊治[J].养殖与饲料，2021，20（02）：69-70.

[4]普绍林，石於友，李美荃，宋聪，刘宁，杨荣丽，姚俊.致犊牛腹泻大肠杆菌云南株的分离鉴定及药敏试验[J].云南畜牧兽医，2015（03）：1-4.

[5]刘少昆. 京津部分地区犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定及耐药性分析[D].吉林农业大学，2016.

[6]岳山. 黑龙江部分地区肉牛大肠杆菌耐药基因与毒力基因检测及耐药性分析[D].黑龙江八一农垦大学，2017.