田蓟苷对动脉粥样硬化模型小鼠的改善作用及机制研究

曹文疆 信盼 赵云丽 袁勇 郭新红 马晓莉 黄川生 文志萍 王新春

摘 要 目的 研究田薊苷对动脉粥样硬化（AS）模型小鼠的改善作用及可能机制。方法 以8只C57BL/6J小鼠作为正常组;将40只载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠随机分为模型组，田蓟苷低、中、高剂量组[2.1、3.5、7.0 mg/（kg·d）]和辛伐他汀组[阳性对照药物，3.5 mg/（kg·d）]，每组8只。正常组小鼠饲以普通饲料，其余各组小鼠饲以高脂饲料建立AS模型。同时，正常组和模型组小鼠灌胃生理盐水，各给药组小鼠灌胃相应药液，每天1次，连续12周。测定小鼠血浆中总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）、白细胞介素1β（IL-1β）、IL-6、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平;观察小鼠主动脉病理形态学变化;测定小鼠主动脉中细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞间黏附分子1（VCAM-1）和增殖细胞核抗原（PCNA）的阳性率;测定小鼠主动脉中基质金属蛋白酶2（MMP-2）、MMP-9、转化生长因子（TGF-β1）、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平以及TGF-β1、Smad2/3、磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）蛋白的表达水平。结果 与正常组比较，模型组小鼠血浆中TC、TG、LDL-C、Ox-LDL、IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α水平均显著升高（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）;主动脉有脂质斑块生成，且斑块面积较大并致使管腔严重狭窄;主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA的表达水平，ICAM-1、VCAM-1、PCNA蛋白表达阳性率以及TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组上述指标水平大部分均显著回调（P<0.05或P<0.01）。结论 田蓟苷可能是通过抑制TGF-β1/Smads信号通路的激活，进而抑制血管平滑肌细胞增殖、减轻炎症反应、调节脂质代谢来抑制AS的形成。

关键词 田蓟苷;动脉粥样硬化;转化生长因子β1/Smads信号通路;炎症反应;脂质代谢

中图分类号 R285 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2022）01-0019-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2022.01.04

ABSTRACT   OBJECTIVE To study the improvement effects of tilianin on the atherosclerosis （AS） model mice and its potential mechanism. METHODS Eight C57BL/6J mice were taken as the normal group. Forty ApoE-/- mice were randomly divided into model group， tilianin low-dose， medium-dose and high-dose groups [2.1， 3.5， 7.0 mg/（kg·d）] and simvastatin group [positive control drug， 3.5 mg/（kg·d）]， with 8 mice in each group. Normal group was given normal diet， and other groups were given high-lipid diet to induce AS model. At the same time， normal group and model group were given normal saline intragastrically， administration groups were given relevant drug intragastrically， once a day， for 12 consecutive weeks. The levels of TC， TG， LDL-C， HDL-C， Ox-LDL， IL-1β， IL-6， MCP-1 and TNF-α in plasma were determined. The pathomorphological changes of the aorta in mice were observed. The positive rate of ICAM-1， VCAM-1 and PCNA in the aorta were determined. mRNA expressions of MMP-2， MMP-9， TGF-β1， Smad2 and Smad3 as well as protein expressions of TGF-β1， Smad2/3 and p-Smad2/3 were also determined in aorta of mice. RESULTS Compared with normal group， the plasma levels of TC，TG， LDL-C， Ox-LDL， IL-1β， IL-6， MCP-1 and TNF-α in model group were increased significantly （P<0.01）， while HDL-C level was significantly reduced （P<0.01）. Lipid plaques were formed in the aorta， and the plaque area was large and caused severe stenosis of the lumen. mRNA expressions of MMP-2， MMP-9， TGF-β1， Smad2 and Smad3 as well as positive rate of  ICAM-1， VCAM-1， PCNA and protein expression TGF-β1， Smad2/3， and p-Smad2/3 in the aorta were significantly increased （P<0.01）. Compared with model group， most of above indexes of medication groups were improved significantly （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS Tilianin can inhibit the activation of TGF-β1/Smads signaling pathway and then inhibit the proliferation of vascular smooth muscle cells， reduce inflammation and regulate lipid metabolism to inhibit the formation of AS.

KEYWORDS   tilianin; atherosclerosis; TGF-β1/Smads signaling pathway; inflammation; lipid metabolism

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一种动脉血管壁的慢性进行性疾病，血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMC）的增殖、迁移与AS斑块纤维帽及新生血管的生成具有重要联系[1]。转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）是一类具有多种生物学功能的生长因子，可参与调节细胞的生长、增殖、分化和迁移等过程;其不仅可刺激多种细胞因子和炎症介质的合成与分泌，还可参与细胞外基质的合成与降解[2]。而在TGF-β家族中，又以TGF-β1的功能最多、活性最强、分布最广。Smads蛋白家族是TGF-β1信号转导的主要分子，介导信号从细胞膜向细胞核的传递[3]。近年来的研究发现，TGF-β1/Smads信号通路可刺激炎症介质生成、参与血管新生、调控VSMC的增殖与迁移，而这些过程在AS的发生发展过程中发挥着重要作用[4-6]。

香青兰Dracocephalum moldavica L.为唇形科青兰属一年生草本植物，以地上全草入药，具有清热燥湿、凉肝止血的功效[7]。香青兰中主要含黄酮类、多糖、萜类等成分，其中黄酮类成分具有抗炎、抗氧化、保护心肌及抗AS等作用[8-9]。田蓟苷是香青兰总黄酮中的主要活性成分，具有降血脂、抗炎、抗氧化应激等作用，对AS具有一定的防治作用[10-13]。本課题组前期研究发现，田蓟苷可以抑制血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠VSMC过度增殖和迁移，并且此过程涉及TGF-β1/Smads信号通路的激活和调控[14]。因此，本研究以载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠为动物模型，研究田蓟苷是否能通过调控TGF-β1/Smads信号通路来抑制ApoE-/-小鼠AS的形成，为进一步阐明田蓟苷抑制AS的作用机制提供参考。

1 材料

1.1 主要仪器

本研究所用的主要仪器有5430R小型台式高速低温冷冻离心机（德国Eppendorf公司），XL-200型低速离心仪器（江苏海门其林贝尔仪器制造有限公司），EM-UC6型超薄型切片仪、RM2245型半自动石蜡切片机（美国Leica公司），VE-180型垂直电泳及电转仪（上海天能科技有限公司），EC3600型凝胶成像系统（美国UVP公司），Rotor-Gene Q型实时荧光定量-聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction，qRT-PCR）仪（德国Qiangen公司），Modular DPP-H7600型全自动生化分析仪（德国罗氏诊断有限公司），TES99型石蜡包埋机（湖北徕克医疗仪器有限公司），CKX53型常规倒置显微镜（日本Olympus公司），M200 Pro型多功能酶标仪（瑞士Tacan公司）。

1.2 主要药品与试剂

本研究所用的主要药品与试剂包括：田蓟苷（新疆维吾尔自治区药物研究所，批号20100626，纯度≥98%），辛伐他汀片（杭州默沙东制药有限公司，批号M042689，规格为20 mg/片），4%多聚甲醛（武汉博士德生物工程有限公司，批号11K17B68），苏木精（美国Sigma公司，批号SLBP6815V），伊红（上海蓝季科技发展有限公司，批号100715），二甲苯（天津市富宇精细化工有限公司，批号20150519），二氨基联苯胺（DAB，丹麦丹科股份有限公司，批号20039541），兔源甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）多克隆抗体（武汉三鹰生物技术有限公司，批号10494-1-AP），辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔免疫球蛋白G（immunoglobulin G，IgG）二抗、辣根过氧化物酶标记的山羊抗小鼠IgG二抗（北京中杉金桥生物技术有限公司，批号分别为131879、131224），小鼠氧化低密度脂蛋白（oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL）、白细胞介素1β（interleukin-1beta，IL-1β）、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF-α）、单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1，MCP-1）酶联免疫吸附检测（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）试剂盒（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批号分别为AK0017OCT19007、AK0017OCT19004、AK0017OCT19006、AK0017OCT19003、AK0017OCT- 19005），动物组织总RNA提取试剂盒、QuantiNovaTM SYBR? Green PCR Kit（北京天根生化科技有限公司，批号分别为Q5920、154045739），cDNA合成试剂盒、ECL超敏发光试剂盒（美国Thermo Fisher Scientific公司，批号分别为00422714、RJ238588），RIPA 组织细胞裂解液、磷酸酶抑制剂混合物（北京索莱宝科技有限公司，批号分别为20150319、P1260），小鼠源TGF-β1单克隆抗体、兔源Smad2/3单克隆抗体、兔源磷酸化Smad2/3（p-Smad2/3）多克隆抗体、小鼠源细胞间黏附分子1（intercellular cell adhesion molecule-1，ICAM-1）单克隆抗体、兔源血管细胞间黏附分子1（vascular cell adhesion molecule-1，VCAM-1）单克隆抗体、兔源增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen，PCNA）单克隆抗体（英国Abcam Cambridge公司，批号分别为ab64715、ab202445、ab272332、ab171123、ab134047、ab92552）;其余试剂均为分析纯或实验室常用规格，水为蒸馏水。PCR实验中的引物序列均由生工生物工程（上海）股份有限公司设计并合成。

1.3 动物

本研究所用动物为健康雄性SPF级ApoE-/-小鼠（40只）和健康雄性SPF级C57BL/6J小鼠（8只）。两种小鼠均为8周龄，体质量20～24 g，购于北京维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产合格证号均为SCXK（京）2016-0011。所有小鼠均单笼单只饲养，饲养期间自由进食和饮水。动物房环境温度为22～25 ℃、相对湿度为50%～60%、每天的光照时间为12 h。本实验过程满足动物实验“3R”原则。

2 方法

2.1 分组、造模与给药

小鼠经过2周的适应性喂养后进行正式实验。以8只C57BL/6J小鼠作为正常组;将40只ApoE-/-小鼠随机分为模型组，田蓟苷低、中、高剂量组[2.1、3.5、7.0 mg/（kg·d）][11]和辛伐他汀组[阳性对照药物，3.5 mg/（kg·d）][15]，每组8只。正常组小鼠饲以普通饲料，其余各组小鼠均通过饲以高脂饲料（0.75%胆固醇、15%猪油和84.25%基础饲料）的方式建立AS模型，连续饲养12周[13]。同时，各给药组小鼠灌胃相应药物（均以生理盐水为溶剂溶解），正常组和模型组小鼠灌胃生理盐水，灌胃体积均为10 mL/kg，每天1次，连续12周。

2.2 样本取材及处理

末次灌胃24 h后，小鼠先禁食不禁水12 h，然后摘眼球取血。将血样置于含肝素钠的抗凝管中，以3 000  r/min离心10 min，分离血浆并分装。将部分血浆用于血脂指标检测;部分血浆于-80 ℃保存，备用。取血后将小鼠处死，开胸剪取主动脉，剥离外膜脂肪组织，然后用预冷的灭菌生理鹽水冲洗主动脉。取洗净后的主动脉根部（长约1.0 cm），置于4%多聚甲醛溶液中固定;其余的主动脉用锡箔纸包裹并标记好后迅速置于液氮中冷冻，再于-80 ℃保存，备用。

2.3 血浆中血脂指标水平检测

取“2.2”项下血浆，采用全自动生化分析仪检测血浆中总胆固醇（total cholesterol，TC）、三酰甘油（triglyce- ride，TG）、低密度脂蛋白胆固醇（low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平。

2.4 血浆中Ox-LDL、IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α水平检测

采用ELISA法进行检测。取“2.2”项下血浆，按照相应试剂盒说明书方法操作，采用酶标仪在450 nm波长处测定血浆中Ox-LDL、IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α的水平。

2.5 主动脉病理形态学变化观察

采用苏木精-伊红（HE）染色法进行观察。取4%多聚甲醛溶液固定的主动脉，常规制备石蜡切片（厚度约5 μm），行常规HE染色后，置于光学显微镜下观察。

2.6 主动脉中ICAM-1、VCAM-1、PCNA蛋白表达检测

采用免疫组化法进行测定。取4%多聚甲醛溶液固定的主动脉，常规制备石蜡切片（厚度约5 μm），60 ℃脱蜡后，在100 ℃下用pH 6.0的柠檬酸盐抗原修复液修复5 min，然后在25 ℃下用3%过氧化氢溶液阻断内源过氧化物酶活性10 min;加入ICAM-1一抗（稀释比例1 ∶ 100）、VCAM-1一抗（稀释比例1 ∶ 125）、PCNA一抗（稀释比例1 ∶ 200），4 ℃孵育过夜;加入相应二抗（稀释比例1 ∶ 500），37 ℃孵育30 min;进行磷酸盐缓冲液（PBS）洗涤、DAB显色、苏木精染色、封片后，在光学显微镜下检测。ICAM-1和VCAM-1主要在胞浆中表达，胞浆阳性染色呈棕黄色。通过Image-Pro Plus 6.0软件计算棕黄色部位的平均光密度（IOD）值和阳性表达蛋白的分布面积，计算2种蛋白的阳性率[阳性率（%）=IOD值/阳性表达蛋白的分布面积×100%]。PCNA主要在细胞核中表达，细胞核阳性染色呈棕色，阴性染色呈蓝色。通过Image-Pro Plus 6.0软件计数阳性细胞个数和视野中所有细胞个数，并计算PCNA阳性率[阳性率（%）=（阳性细胞个数/视野中所有细胞个数）×100%]。

2.7 主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达的检测

采用qRT-PCR法进行检测。取“2.2”项下冻存的主动脉，常规解冻后，按动物组织总RNA抽提试剂盒方法提取组织中的总RNA;验证其纯度后，按cDNA逆转录试剂盒方法合成cDNA，并以cDNA为模板进行PCR扩增。反应体系（共20 μL）：2×QuantiNova SYBR Green PCR Master mix 10 μL，上、下游引物各1 μL，cDNA模板 2 μL，ddH2O 6 μL。PCR反应条件：95 ℃预变性1 min;95 ℃变性10 s，60 ℃退火/延伸15 s，共40个循环。以GAPDH为内参，采用2-ΔΔCt法计算各目的基因的mRNA表达水平。引物序列及产物扩增长度见表1。

2.8 主动脉中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达的检测

采用Western blot法进行测定。取“2.2”项下冻存的主动脉，常规解冻后，采用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂的RIPA裂解液提取组织中的总蛋白;测定蛋白的浓度和纯度后，将蛋白进行高温变性。取变性后蛋白进行10%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（分离胶电压100 V、浓缩胶电压80 V，电泳时间2 h），湿法转移至聚偏二氟乙烯膜上（电流200 mA，转膜时间2 h），用5%脱脂奶粉或5%牛血清白蛋白封闭1 h;加入TGF-β1一抗（稀释比例1 ∶ 1 000）、Smad2/3一抗（稀释比例1 ∶ 1 000），p-Smad2/3一抗 （稀释比例1 ∶ 1 000）、GAPDH一抗（稀释比例1 ∶ 5 000），4 ℃孵育过夜;TBST洗膜10 min×3次，加入相应二抗（稀释比例1 ∶ 20 000），室温孵育1 h;加入ECL显色，凝胶成像系统成像、显影。用Image J 1.8.0软件分析，以目的蛋白与内参（GAPDH）蛋白条带灰度值的比值表示目的蛋白的表达水平。

2.9 统计学方法

采用SPSS 22.0软件进行统计分析。结果以x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验。检验水准α=0.05。

3 结果

3.1 田蓟苷对AS模型小鼠血浆中血脂水平的影响

与正常组比较，模型组小鼠血浆中TG、TC、LDL-C水平均显著升高（P<0.01），HDL-C水平显著降低（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠血浆中TG水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）;田蓟苷高剂量组和辛伐他汀组小鼠血浆中TC水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）;田蓟苷中、高剂量组和辛伐他汀组小鼠血浆中LDL-C水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组小鼠血浆中血脂指标水平测定结果见表2。

3.2 田蓟苷对AS模型小鼠血浆中Ox-LDL水平的影响

与正常组比较，模型组小鼠血浆中Ox-LDL水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠血浆中Ox-LDL水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组小鼠血浆中Ox-LDL水平测定结果见表3。

3.3 田蓟苷对AS模型小鼠血浆中IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α水平的影响

与正常组比较，模型组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、MCP-1和TNF-α水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，除田蓟苷低剂量组小鼠血浆中TNF-α水平降低不显著外（P>0.05），其余各组小鼠血浆中上述指标水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组小鼠血浆中IL-1β、IL-6、MCP-1、TNF-α水平测定结果见表4。

3.4 田蓟苷对AS模型小鼠主动脉病理形态学的影响

正常组小鼠主动脉层次清晰，内膜完整，无泡沫细胞与胆固醇结晶形成;管腔未发生明显狭窄，且无脂质斑块生成。模型组小鼠主动脉层次紊乱，有脂质斑块生成，且斑块面积较大并呈现向管腔发展的占位性病变;管腔严重狭窄，斑块脂质核心大，存在大量泡沫细胞和胆固醇结晶。田蓟苷各剂量组和辛伐他汀组小鼠主动脉层次有所改善，斑块面积减小;管腔狭窄程度明显减轻，斑块脂质核心小，斑块内泡沫细胞和胆固醇结晶减少。各组小鼠主动脉病理形态学观察结果见图1。

3.5 田蓟苷对AS模型小鼠主动脉中ICAM-1、VCAM-1和 PCNA蛋白表达的影响

与正常组比较，模型组小鼠主动脉中ICAM-1、VCAM-1和PCNA蛋白表达的阳性率均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠主动脉中上述蛋白表达的阳性率均显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组小鼠主动脉中ICAM-1、VCAM-1和 PCNA蛋白表达的免疫组化图见图2，蛋白表达的阳性率测定结果见表5。

3.6 田蓟苷对AS模型小鼠主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA表达的影响

与正常组比较，模型组小鼠主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠主动脉中上述因子 mRNA的表达水平均显著降低（P<0.05或P<0.01）。各组小鼠主动脉中MMP-2、MMP-9、TGF-β1、Smad2和Smad3 mRNA的表达水平测定结果见表6。

3.7 田蓟苷对AS模型小鼠主动脉中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达的影响

与正常组比较，模型组小鼠主动脉中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达水平均显著升高（P<0.01）。与模型组比较，各给药组小鼠主动脉中上述蛋白的表达水平均显著降低（P<0.01）。各组小鼠主动脉中TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白表达的電泳图见图3，蛋白表达水平测定结果见表7。

4 讨论

载脂蛋白E可特定地与外周细胞受体结合，对脂蛋白成分的正常分解、代谢至关重要;敲除ApoE基因后，会影响胆固醇与细胞表面的脂蛋白结合，造成胆固醇无法降解，胆固醇蓄积会导致AS的发生[16]。本研究选用ApoE-/-小鼠为动物模型进行研究。以高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠后，容易形成AS，而AS的主要临床表现为血脂水平升高和斑块形成[17]，因此，控制血脂水平、抑制斑块形成对防治AS具有重要意义。临床上常用辛伐他汀治疗高脂血症，其可降低血脂水平（如TC、TC、LDL-C等），因此本研究选择辛伐他汀作为阳性对照药物。结果显示，模型组小鼠血浆中TG、TC、LDL-C水平均显著升高，主动脉内可见明显的AS斑块，说明以高脂饲料喂养ApoE-/-小鼠可成功建立AS模型;而给予不同剂量田蓟苷后，AS模型小鼠血浆中TG、TC、LDL-C水平均不同程度地降低，AS斑块均不同程度地减小，说明田蓟苷具有降低血脂水平和抑制斑块形成的作用。

AS发病机制复杂，脂质代谢紊乱和炎症被认为是AS发病的主要危险因素[18-19]。Ox-LDL可以促进脂质堆积，导致AS斑块形成[20]。本研究通过检测小鼠血浆中脂质代谢相关指标Ox-LDL水平和炎症标志物IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1的水平发现，模型组小鼠血浆中Ox-LDL、IL-6、IL-1β、TNF-α、MCP-1水平均显著升高，而不同剂量田蓟苷均可不同程度地降低AS模型小鼠血浆中上述指标的水平，说明田蓟苷可以调节脂质代谢和抑制炎症反应。

ICAM-1和VCAM-1均属于黏附分子免疫球蛋白家族，主要参与细胞的识别和黏附，两者均可介导细胞的黏附、迁移和分化，使单核细胞、白细胞、T淋巴细胞等在血管内壁大量堆积，致使血管发生炎症和形成斑块[21]。PCNA表达水平的高低可反映VSMC增殖能力的大小，其表达水平越高表示VSMC的增殖能力越强[22]，而VSMC大量增殖会促进斑块坏死核心的形成[23]。本研究结果显示，模型组小鼠主动脉中ICAM-1、VCAM-1和PCNA蛋白表达的阳性率均明显升高，而不同剂量田蓟苷均可降低AS模型小鼠主动脉中上述蛋白表达的阳性率，说明田蓟苷可通过抑制细胞的黏附和VSMC的增殖、迁移来抑制AS斑块的形成。

在AS的发展过程中，巨噬细胞、平滑肌细胞、淋巴细胞和泡沫细胞均可以合成和分泌基质金属蛋白酶（matrix metallo proteinases，MMPs），其中MMP-2与MMP-9可降解细胞外基质，导致AS斑块不稳定和破裂[24]，而不稳定斑块是血栓形成的主要原因[25]。本研究结果显示，模型组小鼠主动脉中MMP-2、MMP-9 mRNA的表达水平均显著升高，而不同剂量田蓟苷均可降低AS模型小鼠主动脉中MMP-2、MMP-9 mRNA的表达水平，说明田蓟苷可起到稳定斑块的作用。

TGF-β1/Smads信号通路的激活是许多血管疾病的标志[1]。TGF-β1具有促进炎症细胞浸润、VSMC增殖和迁移以及细胞外基质沉积等作用[2]，Smad2和Smad3是TGF-β1/Smads信号通路的重要下游信号转导分子和靶点[3]，激活TGF-β1/Smads信号通路会促进VSMCs增殖和基质合成[26-27]，从而导致AS斑块形成。因此，抑制TGF-β1/Smads通路的激活可减少炎症介质生成、抑制VSMC增殖和AS斑块形成。本研究结果显示，模型组小鼠主动脉中TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA的表达和TGF-β1、Smad2/3、p-Smad2/3蛋白的表达均显著上调，而不同剂量田蓟苷均可下调AS模型小鼠主动脉中上述因子mRNA和蛋白的表达。以上结果说明，田蓟苷可通过抑制TGF-β1及其下游信号分子Smad2/3、p-Smad2/3的表达，从而发挥抑制VSMC增殖和迁移的作用。

综上所述，田蓟苷可能是通过抑制TGF-β1/Smads信号通路的信号传导，进而抑制VSMC增殖、减轻炎症反应、调节脂质代谢来抑制AS的形成，但其具体的作用机制还有待进一步确定。

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（收稿日期：2021-07-25 修回日期：2021-11-22）

（編辑：林 静）