新疆奎屯垦区规模化奶牛场致病菌分离及常用消毒剂筛选

(1.新疆兵团第七师胡杨河市畜牧兽医站，新疆 奎屯 833200；2.新疆农业大学动物医学学院，新疆 乌鲁木齐 830000；3.新疆天润牧业股份有限公司，新疆 乌鲁木齐 830000)

0 引言

随着奶牛养殖集约化、规模化发展，有效预防奶牛疾病变得愈发重要。困扰规模化牛场的两大疾病：犊牛腹泻和奶牛乳房炎，都与环境有密切联系，外界环境中病原微生物随时会入侵动物机体，一些被感染的牛群也会污染周围环境。同时，规模化奶牛场饲养密度较大，牛群接触频繁，使病原菌传播更快速。选择适合有效的消毒剂，制定合理的消毒程序，能够有效阻止疫病发生和传播。本研究针对奎屯垦区大型规模奶牛养殖场，在春季奶牛乳房炎和犊牛腹泻的高发期进行采样，挑选出牛场中具有代表性的病原微生物，用不同的消毒剂进行处理，以探求适合奶牛场的消毒剂。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 培养基

营养肉汤培养基(生产批号：201112)、M-H琼脂平皿(生产批N21GK001)、血琼脂平板(生产批号：T21GT003)、麦康凯琼脂平板(生产批号：N21GK001)、营养琼脂平板(生产批号：N20GK006)，以上均选购自南通凯恒生物技术开发有限公司。

1.1.2 消毒剂

选择了5种常用消毒剂，用来筛选抑菌效果，具体如表1所示。

1.1.3 仪器设备

超纯水仪(KZ-CK-50L)，上海科治环保设备有限公司；电子天平 (FA1204)、高压灭菌锅(DGS-280C+)，力辰科技有限公司；高速离心机(TG16G)，河南北弘实业有限公司，净化工作台(SW-CJ-2FD)，苏州净化设备公司。

表1 5种常用消毒剂

1.2 方法

1.2.1 样品的采集

样品采集于新疆奎屯垦区2个规模牛场。共采集环境样品41个，分别取自消毒通道、犊牛舍、挤奶厅、运动场等场所。使用无菌棉签采集相关场所的环境样品后分别放置装有无菌生理盐水的10 mL离心管中并且做好标记。将标记的样品密封在无菌袋中，放在带冰袋的泡沫盒中，并保存在-20℃备用。

1.2.2 细菌培养及分离纯化

取100 μL样品上清液放入营养肉汤培养基中，37℃培养12 h，用接种环蘸取菌液在营养琼脂培养基、血琼脂培养基、麦康凯培养基中划线培养12 h，观察培养基中的细菌菌落，挑取差异较大的进行革兰氏染色镜检，观察出不同细菌后继续进行分离纯化，最后用接种环蘸取纯化的细菌菌落接种在营养肉汤中进行增菌。

1.2.3 药敏制片的制备

用打孔机将定性滤纸打成6 mm直径的圆形小纸片。将圆纸片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经121℃，15～20 min高压消毒后，放在37℃温箱中数天，使其完全干燥。在上述纸片的青霉素瓶内加入按照说明书稀释过的消毒剂0.25 mL，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖。

1.2.4 消毒剂敏感性试验

将培养的细菌溶液用无菌盐水稀释至浓度为0.5麦氏比浊浓度，将100 μL细菌溶液吸到M-H药物敏平板上，用涂布器涂均匀，静置 1 min。将5张制备好的含不同消毒剂的药敏制片均匀地贴在不同的药敏平板上，放在37℃的培养箱中18～24 h，然后根据测量抑菌环的直径判断消毒剂的敏感度。标准判定参考表2。

表2 消毒剂敏感性 单位：mm

2 结果与分析

2.1 致病菌分离结果

从养殖场采集的样品中分离出具有代表性的致病菌为化脓隐秘杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、肠球菌等。

2.2 药敏试验结果

从养殖场样品中分离出的致病菌通过K-B药物敏感性试验，根据测量抑菌环的直径判断消毒剂的敏感度。结果表明，所测得的几种致病菌主要对新洁尔灭、葵甲溴铵碘、戊二醛较为敏感。其中对甲酚皂耐药的细菌最多，葡萄球菌对聚维酮碘中敏，具体如表3所示。

表3 消毒剂药敏试验结果 单位：mm

3 讨论

牛场中最理想的消毒剂应该具有对人和牛都安全无害、副作用低、杀菌能力强、杀菌普广等优点[1]。消毒剂分为很多种，按成分可以将消毒剂分为酚类、醇类、醛类、卤素类、酸类、碱类、氧化剂类及季铵盐类[2]。复方甲酚皂属于酚类消毒剂，主要杀菌成分为甲酚[3]，在本次试验分离出的4种病原菌中，复方甲酚皂，只有化脓隐秘杆菌对其敏感，其他病原菌都显示耐药，这与之前该牧场大量使用复方甲酚皂未及时更换消毒液有关。新洁尔灭属于季铵盐类消毒剂，在本次实验中所有致病菌都对其比较敏感，且在吴俊容的研究中新洁尔灭在有机物存在时仍旧具有良好的抑菌效果，比较适合牛场使用[4]。聚维酮碘和葵甲溴铵碘属于含碘类消毒剂，但此类消毒剂性质不稳定，有机物、pH值及温度都对其效果影响较大[5]。在本次试验中除了葡萄球菌对聚维酮碘是中敏以外，其他病原菌都对其敏感，说明此类消毒剂对该牧场的病原菌杀灭效果较好。戊二醛属于醛类消毒剂，在此次实验中所有病原菌对其都较为敏感，但此类消毒剂成本较高，气味较大。

4 结论

本试验中4种病原菌都敏感的消毒剂有：新洁尔灭、葵甲溴铵碘、戊二醛。实验结果对前期这2个牧场饲养环境的消毒工作具有较强的指导意义[6]。建议牧场采用这3种消毒剂，进行替换使用，避免长时间使用一种消毒剂造成耐药性，以达到最佳消毒效果。