血清高迁移率族蛋白B1和中性粒细胞/淋巴细胞比值与活动性结核病患者细胞免疫功能水平及38000蛋白的相关性

芦杰 胡海霞 韩中波

1 吉林省临床检验中心（吉林省医疗机构质量监测评价中心）质量控制科，长春 130021；2 吉林大学中日联谊医院胃肠结直肠外科，长春 130033；3 吉林市结核病防治研究所研究室，吉林 132011

结核病是重大感染性疾病之一，终身患病风险较大[1]。结核分枝杆菌入侵机体早期，患者可通过自身免疫功能来控制感染发展，降低感染率，或使疾病转归为慢性结核病[2-3]，免疫功能低下人群则可能发展成为急性、活动性结核病，部分慢性结核病患者也可能因免疫功能变化而发展为活动性结核病[4]。因此，检测患者免疫功能水平变化能有效评估患者转归和预后结局，是防治活动性结核病的重要手段。研究认为，血清中高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）表达水平与免疫反应时组织损伤和炎症程度有关，血清中的中性粒细胞与淋巴细胞比值（neutrophil-to-lymphocyte ratio，NLR） 也反映了全身炎症和免疫之间的平衡[5-6]。此外，研究表示38 000 蛋白为结核分枝杆菌抗原之一，可用其诊断活动性结核病和感染程度[7]。本研究探讨了HMGB1 和NLR 水平与活动性结核病患者细胞免疫功能及结核分枝杆菌38 000 蛋白的关系，旨在为活动性结核病临床诊治提供参考。

对象与方法

一、研究对象

选择2019年1月至2021年6月吉林市结核病防治研究所收治的60 例活动性肺结核患者为研究对象。纳入标准：（1）符合《中华人民共和国卫生行业标准—肺结核诊断标准（WS288—2017）》中对活动性肺结核的诊断标准，即痰结核菌检查阴性，X线检查肺部有渗出性病变、干酪性病变并周边渗出性病变、空洞、增殖性病变，临床表现为低热、咳嗽、消瘦、乏力等[8]；（2）原发性肺结核，且为初治；（3）无除肺结核以外的肺部疾病史。排除标准：（1）其他类型的结核病（结核性腹膜炎、结核性胸膜炎、结核性脑膜炎、结核性心包炎、肠结核）；（2）有实质性组织器官严重损伤或功能障碍、免疫疾病史、凝血造血功能障碍史、严重肿瘤疾病史；（3）近期使用细胞毒性类或免疫抑制类药物；（4）处于妊娠期或哺乳期，或有精神疾病、或认知障碍不配合研究工作、依从性较差。本研究经吉林市结核病防治研究所伦理委员会批准（伦理审批号：L1901003），所有研究对象均知情同意。

二、分组情况

纳入60 例活动性结核患者为A 组，男39 例，女21 例；年龄（45.92±5.26）岁，范围34～58 岁；体质量指数（21.99±1.48） kg/m2，范围18.53～25.74 kg/m2；轻度结核26 例，中度结核16 例，重度结核18 例。另选择同期收治的60 例非活动性肺结核病患者为B 组，男35 例，女25 例，年龄（46.33±5.03）岁，范围36～57 岁；体质量指数（21.82±1.74） kg/m2，范围（18.94～24.85） kg/m2；轻度结核30 例，中度结核16例，重度结核14 例。选择60 例健康志愿者设为C组，男35 例，女25 例；年龄（46.33±5.03）岁，范围36～57 岁，体质量指数（21.82±1.74）kg/m2，范围（18.94～24.85） kg/m2。三组在性别（χ2=0.74，P=0.689）、年龄（F=0.58，P=0.560）和体质量指数（F=3.01，P=0.078）等基础资料方面差异无统计学意义，具有可比性。

三、研究指标

两组患者于就诊当天，抽取外周静脉血10 mL，置于离心机（北京祥生兴业科技有限公司）中以3 000 r/min（离心半径为12.5 cm）离心10 min，取上层血清。采用酶联免疫吸附法检测HMGB1 水平，所有试剂均来源于HMGB1 ELISA 试剂盒 （上海酶联生物科技有限公司）。使用COULTER LH 780/LH 785血细胞分析仪[贝克曼库尔特国际贸易（上海）有限公司]检测中性粒细胞和淋巴细胞计数，中性粒细胞百分比正常范围为40%～75%，淋巴细胞百分比正常范围为20%～40%，计算NLR 水平。使用DxFLEX流式细胞仪[贝克曼库尔特国际贸易（上海）有限公司]检测血清样本中的CD3+、CD4+、CD8+、CD4+/CD8+，其正常范围分别为50%～84%，27%～51%，15%～44%，0.71～2.78[9]。采用酶联免疫吸附法检测结核分枝杆菌38 000 蛋白，试剂盒购自上海钦诚生物科技有限公司，该试剂中的结核分枝杆菌能够捕获血清中的含结核IgG 抗体，与葡萄球菌A 蛋白结合形成特异性红色斑点，若检测结果出现红色斑点，则判定为阳性，否则为阴性[10]。

四、统计学处理

采用SPSS21.0 进行数据处理与分析。正态性检验采用Kolmogorov-Smirnov（K-S）检验，符合正态分布的计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用方差分析，符合方差齐性使用Tukey HSD 检验进行多重比较，不符合方差齐性使用Tamhane’s T2进行多重比较； 不符合正态分布的计量资料以M（Q1，Q3）表示，组间比较采用Kruskal-Wallis H 检验；计数资料以例数和率表示，组间比较采用χ2检验。采用Pearson 或Spearman 相关分析对HMGB1、NLR 和活动性结核病患者的细胞免疫功能水平和结核分枝杆菌38 000 蛋白的相关性进行分析。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

结果

一、3 组患者HMGB1 和NLR 水平比较

3 组患者的HMGB1（F=101.72，P＜0.001）、中性粒细胞百分比（F=278.56，P＜0.001）、淋巴细胞百分比（F=567.80，P＜0.001）、NLR（F=727.79，P＜0.001）以及38 000 蛋白阳性表达率（χ2=74.30，P＜0.001）组间比较差异均具有统计学意义。其中HMGB1、中性粒细胞百分比、NLR、结核分枝杆菌38 000 蛋白阳性表达率均为A 组＞B 组＞C 组； 淋巴细胞百分比为A组＜B 组＜C 组。具体结果见表1。

表1 不同组别人群HMGB1 和NLR、38 000 蛋白比较

二、不同组别患者细胞免疫功能比较

3 组患者CD3+（F=697.61，P＜0.001）、CD4+（F=450.93，P＜0.001）、CD8+（F=427.89，P＜0.001）和CD4+/CD8+（H=92.01，P＜0.001） 细胞水平比较均具有统计学意义。其中，CD3+和CD4+水平为A 组＜B 组＜C 组，CD8+细胞水平为A 组＞B 组＞C 组。具体结果见表2。

表2 不同组别人群细胞免疫功能比较

三、HMGB1、NLR 与细胞免疫功能、38 000 蛋白的相关性

相关性分析显示，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+细胞水平与HMGB1 和NLR 呈负相关（P<0.001），CD8+、38 000 蛋白与HMGB1 和NLR 呈正相关（P<0.001）。具体结果见表3。

表3 HMGB1、NLR 与细胞免疫功能及38 000 蛋白相关性

讨论

活动性结核病的发生发展与患者机体免疫水平密切相关。HMGB1 具有较强的致炎活性，NLR 则与身体的免疫状况以及炎症表达密切相关[5-6]，了解其与活动性结核病患者的免疫相关指标和结核分枝杆菌38 000 蛋白之间的关系，可更全面地评估患者的免疫功能和感染程度。

一、HMGB1 和NLR 水平在不同免疫水平人群中有差异

本研究发现，活动性结核病患者体内HMGB1的表达水平高于非活动性结核病患者及健康者，推测其可能是由被结核分枝杆菌感染的免疫细胞释放，从而导致表达水平升高。

中性粒细胞是机体重要的天然免疫细胞，具有识别和吞噬入侵机体的结核分枝杆菌的作用[11]。研究证明，免疫功能紊乱的活动性结核病患儿外周血淋巴细胞整体数量低于健康儿童[12]。本研究结果也表明，活动性结核病患者的NLR 水平较非活动性结核病及健康者高。

二、HMGB1 和NLR 水平与结核病患者免疫功能及38 000 蛋白呈一定相关性

HMGB1 对结核病患者发生肝损伤具有一定的预测作用[13]，这同时伴随一定的炎症反应，炎症与免疫的失衡致使HMGB1 水平变化[14]。本研究发现，HMGB1 水平越高，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+细胞占比越低，CD8+细胞占比越高，免疫功能受损严重。结核分枝杆菌38 000 蛋白是结核分枝杆菌抗原之一，含有特异性的B 细胞和T 细胞抗原决定簇，可诱导早期免疫反应[7]。随着肺结核患者病情的加重，患者NLR 和结核分枝杆菌38 000 蛋白水平也逐渐升高[15]，本研究也发现NLR 和结核分枝杆菌38 000蛋白阳性表达率呈显著相关性，因此，检测活动性结核病患者外周血NLR 能有效评估其细胞免疫功能变化[16]。

综上所述，HMGB1 表达水平和NLR 可反映活动性结核病患者细胞免疫功能状态，可用其评估患者的免疫能力，为治疗提供指导依据。本研究也有一定的局限性，包括HMGB1 表达水平和NLR 参与影响活动性结核患者细胞免疫功能状态的分子生物学机制等有待进一步研究。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明芦杰：论文设计、整理和撰写；胡海霞：资料收集、数据处理和统计分析；韩中波：指导和修改稿件