F7基因c.1224T>G纯合突变致遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症临床及家系分析*

余 曼,彭 燕,万腊根,周普辉

南昌大学第一附属医院检验科，江西南昌 330006

遗传性凝血因子Ⅶ(FⅦ)缺陷症是由F7基因突变所致的一种常染色体隐性出血性疾病，男女均可发病。遗传性FⅦ缺陷症在人群中发病率约为1/500 000，临床表现呈异质性，部分患者无症状，部分患者存在不同程度出血，常见的出血症状为鼻出血、牙龈出血、皮肤瘀斑、创伤及手术后出血难止，有时可出现致命的颅内出血[1-6]。

1 资料与方法

1.1病例资料 先证者为38岁女性，因稽留流产和子宫腺瘤术前筛查提示凝血酶原时间(PT)延长，既往有鼻出血及碰伤出血轻微出血病史，父母为表兄妹近亲结婚。

1.2凝血功能和凝血因子活性检测 采集先证者及家系成员外周血于0.109 mol/L枸橼酸钠溶液的抗凝管中(血∶抗凝剂=1∶9)，2 000×g离心(离心机：上海科学器材有限公司)15 min分离乏血小板血浆，CS-5100全自动血凝仪(日本Sysmex公司)检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、PT，应用基于PT一步法乏因子血浆测定凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ和Ⅹ活性。

1.3F7基因分析 用TIANGEN全血DNA抽提试剂盒(北京天根生化科技有限公司)提取先证者及家系成员外周血基因组DNA。设计合成引物见表1，在聚合酶链反应(PCR)仪(美国Thermo Fisher公司)上扩增F7基因所有外显子及侧翼序列。PCR扩增产物在琼脂糖凝胶电泳(北京君意东方电泳设备有限公司)后割胶回收，TIANGEN胶纯化试剂盒(北京天根生化科技有限公司)纯化后送测序分析。所有测序均进行正反向测序验证。

表1 F7基因引物序列及扩增片段长度

续表1 F7基因引物序列及扩增片段长度

2 结 果

2.1临床及实验室表型 先证者PT延长，APTT正常，FⅦ活性为4.4%。先证者母亲、姐姐、哥哥和儿子PT和APTT均正常，FⅦ活性分别为84.9%、83.8%、118.2%和54.6%，见表2。

表2 遗传性FⅦ缺陷症家族的基因型和表型

2.2F7基因分析结果 先证者F7基因中发现一个纯合碱基替换，位于8号外显子的第1224T被G替代(c.1224T>G，His408Gln)，导致编码的组氨酸(His)被谷氨酰胺(Gln)取代。在家系其他成员中，先证者母亲、姐姐、哥哥和儿子均为c.1224T>G (His408Gln)杂合突变，先证者哥哥为正常野生型，父亲已故，见图1、2。

注：A为先证者1224T>G纯合突变；B为1224T>G杂合突变；C为先证者哥哥正常野生型。

注：Ⅰ-1为先证者母亲，Ⅰ-2为先证者父亲，Ⅱ-1为先证者姐姐，Ⅱ-2为先证者哥哥，Ⅱ-3为先证者，Ⅱ-4为先证者丈夫，Ⅲ-1为先证者儿子。

3 讨 论

根据FⅦ数据库(http://www.hgmd.cf.ac.uk/ac/gene.php?gene=F7)及相关文献报道，His408Gln为中国人群中较为常见的突变类型[7]，但纯合病例报道较少。目前全世界已报道6例His408Gln纯合突变患者[8-12]，其临床表现从无症状到重度出血，其中重度2例、轻度1例和无症状3例，FⅦ活性均≤5.0%,FⅦ抗原水平均明显下降。2000年KATSUMI等[8]报道1例His408Gln纯合突变患者，该病例为45岁的日本男性患者，父母近亲结婚，因反复咯血后确诊为遗传性FⅦ缺陷症，患者既往无出血史，13岁行阑尾手术时也无异常。GIANSILY-BLAIZOT等[9]发现1例His408Gln纯合突变亚洲女性表现为重度出血，FⅦ活性和抗原均为2.0%，呈现重度降低。SHEN等[10]发现1例His408Gln纯合突变，临床表现为轻度出血。而江明华等[11]和金艳慧等[12]报道了3例His408Gln纯合突变的无症状患者。

本研究中先证者因父母近亲携带c.1224T>G(His408Gln)突变导致F7基因纯合突变引起FⅦ缺陷。该病例临床表现为鼻出血及碰伤出血轻微出血，父母无出血倾向。从现有的7例病例观察，发现4例His408Gln纯合突变中国患者临床表现为无症状或轻微出血。临床表现是否与不同种族相关需进一步研究，对无症状患者还需观察其出血风险。

FⅦ是主要在肝脏中合成的依赖维生素K丝氨酸蛋白酶原，为外源性凝血途径中重要的启动因子。FⅦ在健康人群血浆中的水平为0.5～2.0 mg/L[13]。F7基因位于第13号染色体长臂(13q34)，由9个外显子及8个内含子组成，成熟FⅦ由406个氨基酸组成，相对分子质量为50×103[14-15]。结构上FⅦ由γ-羧基谷氨酸区、2个表皮生长因子样区和1个催化区(激活区和蛋白酶区)4个功能结构域组成[16]。

His408在结构上位于FⅦ丝氨酸蛋白酶催化区和螺旋状COOH末端[16]，His408Gln突变可能破坏分子内部氢键导致蛋白错误折叠影响蛋白空间结构[17]。体外细胞研究表明，His408Gln突变导致突变蛋白异常分泌，FⅦ蛋白在细胞内被降解从而导致血浆中FⅦ活性和抗原均降低，表现为交叉反应物质阴性，这样与其表型测定结果相符[8]。

因此，His408Gln突变是导致该家系遗传性FⅦ缺陷症的原因。His408Gln突变临床表现呈高度异质性，对于该突变患者应综合考虑患者出血史、FⅦ活性及手术类型等情况进行个体化管理。