非小细胞肺癌组织中KISS-1、C1QBP、ITGA7表达及相关性

符芳永 林巍 卢伟 马西淼

(中南大学湘雅医学院附属海口医院胸外科，海南 海口 570000)

肺癌的发病机制受环境、基因等多种因素影响。尽管随着靶向药物的出现，非小细胞肺癌患者的预后得到了较大改善，但临床疗效及生存期仅发生在部分患者中〔1,2〕。因此，目前对非小细胞肺癌的标志物进行探索，能够有效推进非小细胞肺癌的个体化治疗，从而改善患者的预后效果〔3〕。肿瘤转移抑制基因蛋白(KISS-1)是人类最早从黑色素瘤中发现的转移抑制基因，其与恶性肿瘤密切相关〔4〕。有临床研究显示，补体成分1q亚单位结合蛋白(C1QBP)在多种恶性肿瘤中呈现出高表达〔5〕。整合素α7(ITGA7)是整合家族中的一员，能够与多种细胞外基质层黏连蛋白结合发挥生理作用〔6,7〕。目前尚无有关KISS-1、C1QBP、ITGA7三者在非小细胞肺癌中的相关性研究，本文拟分析非小细胞肺癌组织中KISS-1、C1QBP、ITGA7表达及三者的相关性。

1 材料与方法

1.1研究对象 选取2017年4月至2020年4月中南大学湘雅医学院附属海口医院收治的非小细胞肺癌患者319例，均手术切除癌组织。其中男198例，女121例，年龄62～75岁，平均(68.5±5.2)岁；肺鳞癌201例，肺腺癌118例；病理分期：Ⅰa期58例、Ⅰb期76例、Ⅱa期68例、Ⅱb期77例、Ⅲa期22例、Ⅲb期16例、Ⅳ期2例；伴有淋巴结转移167例，无淋巴结转移152例。纳入标准：所有患者符合中华医学会放射肿瘤治疗学分会对非小细胞肺癌的诊断标准〔8〕；术后经病理学检测确诊为非小细胞肺癌者；临床病理治疗保存完整；所有患者及家属对本文研究知情，签署知情通知书，通过我院伦理委员会认可。排除标准：患者在手术前接收到放、化疗；合并其他恶性肿瘤者；手术后未保留癌组织样本或病理资料不全者。

主要试剂：柠檬酸缓冲液(厂家：北京伊塔生物有限公司；货号：SY3488)；中性甲醛(厂家：上海梵态生物科技有限公司，货号：YT9186)；辣根过氧化物酶(厂家：北京泽平科技有限责任公司；货号：MP 08364514)；苏木素溶液(厂家：上海麦克林生化科技；货号：G1142)。

1.2取材 手术切除非小细胞癌患者癌组织及癌旁组织进行标本制作，使用10%中性甲醛及4 μm防脱切片进行连续切片，切片后作免疫组化检测。

1.3免疫组化染色 对组织进行连续切片后，加入柠檬酸缓冲液，放置于微波炉中进行抗原修复，随后使用3%H2O2孵育，正常山羊血清封闭抗体，加入一抗后放置在4℃环境下过夜，次日滴加二抗，辣根过氧化物酶标记链霉素卵白素孵育，二氨基联苯胺(DAB)显色，苏木素溶液复染，脱水，晾干后使用中性树胶封片。

1.4免疫组化结果判定 免疫组化结果的判定根据细胞染色程度及细胞所占据面积进行判定，染色强度：0分为不染色，1分为轻度染色，2分为中度染色，3分为强染色；染色面积：无细胞染色为0分，染色面积<25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分。细胞染色呈棕黄色点状着色及细胞核着色计为阳性，两种积分相加之和>2分为阳性，≤2分为阴性表达。

1.5KISS-1、C1QBP、ITGA7表达检测 使用Western印迹检测肿瘤转移抑制基因蛋白KISS-1、C1QBP、ITGA7表达水平：对标本以磷酸盐缓冲液(PBS)进行冲洗后，行30 min裂解，后对蛋白浓度进行测定。选择20 μg/孔蛋白质，添加完成蛋白缓冲液后开始进行10 min电泳，后将电转膜浸泡在10%牛奶中，在常温环境下进行90 min封存。后结合一抗、稀释，进行1 d孵育，取出以TBST液冲洗，后结合二抗，保存60 min后开始清洗与显色，对KISS-1、C1QBP、ITGA7表达进行检测。

1.6统计学处理 使用SPSS20.0软件进行t检验、McNemar检验、χ2检验或Wilcoxon秩和检验及Spearman相关分析。

2 结 果

2.1癌组织及癌旁组织KISS-1、C1QBP、ITGA7表达对比 与癌旁组织相比，癌组织KISS-1、C1QBP、ITGA7表达较高，差异具有统计学意义(P<0.05)。在肺癌组织中以棕黄色颗粒表现在胞质内，且在高表达的组织中细胞核内也有所表达。见图1，表1，图2。

图2 Western印迹检测肺鳞癌中KISS-1、C1QBP、ITGA7表达

表1 癌组织及癌旁组织KISS-1、C1QBP、ITGA7表达对比

KISS

2.2KISS-1、C1QBP、ITGA7在临床病理特征中的表达 KISS-1、C1QBP、ITGA7在非小细胞肺癌组织中的表达与肿瘤直径、淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)；KISS-1、C1QBP、ITGA7高表达者多淋巴结转移、肿瘤直径更大；KISS-1、C1QBP、ITGA7表达与年龄、性别、分期、病理类型无关(P>0.05)，见表2。

表2 KISS-1、C1QBP、ITGA7在临病理特征中的表达(n,n=319)

2.3KISS-1、C1QBP、ITGA7表达相关性 KISS-1、C1QBP呈显著正相关(r=0.238；P=0.002)；KISS-1、ITGA7呈显著正相关(r=0.241；P=0.002)；C1QBP、ITGA7呈显著正相关(r=0.206；P=0.007)。

3 讨 论

非小细胞肺癌中最常见的病理类型为肺鳞状细胞癌和肺腺癌〔9,10〕。随着我国工业的快速发展，其大气污染物随之增多，加重了肺癌的发展。早期非小细胞肺癌在临床上的症状不明显，且缺乏特异性特征，导致所属患者发生时已然发展到了晚期，当非小细胞肺癌发展到晚期后，会严重影响患者的生存情况〔11,12〕。

KISS-1作为人类最早从黑色素瘤中发现的转移因子基因，其缺失表达与肿瘤浸润、转移密切相关〔13,14〕。临床研究指出KISS-1与恶性肿瘤密切相关，其在非转移性肿瘤中呈现高表达，而在转移性肿瘤中呈相反情况，其会出现低表达或不表达〔15〕。本研究发现，KISS-1在癌组织内呈现出高表达，结果与上述结果一致。本研究还发现，KISS-1与非小细胞肺癌有一定的关联性，呈现出高表达。

本研究发现，非小细胞肺癌组织中C1QBP表达呈现出高表达，且表达阳性程度与肿瘤直径、有无淋巴结转移有一定关联性。原因可能是C1QBP能够通过LICAM影响肿瘤细胞的黏附和转移，且能够发挥出保护氧化应激诱导的细胞凋亡作用〔16,17〕。有临床研究显示，C1QBP在恶性肿瘤中呈现出高表达，C1QBP与临床恶性肿瘤密切相关〔18〕。研究显示，C1QBP在增殖中增多，能够通过综合补体来防止宿主街道的细胞损伤，导致肿瘤细胞从免疫系统中逃脱，增加存活的激活〔19〕。还有临床研究指出，C1QBP在肿瘤细胞的免疫逃逸、血管生成中均有重要作用，以C1QBP为治疗靶点，可以起到广泛的抗肿瘤作用〔20〕。本研究结果与上述结果一致。

本研究发现，ITGA7在癌组织中呈现出高表达，且表达阳性程度与肿瘤大小、有无淋巴结转移有一定关联。原因可能是ITGA7能够通过调控多个信号通路，促进肿瘤细胞增殖、分化和迁移等情况〔21,22〕。ITGA7能够与整合素β1共同形成异二聚体，能够参与对骨骼肌的完整性调控。有临床研究显示，与乳腺癌癌旁组织相比，ITGA7在癌组织中表达有所下降，且ITGA7能够抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移〔23,24〕。本研究发现，ITGA7或许在非小细胞肺癌中能够起到促进癌症发展的作用。

但本研究中并未对KISS-1、C1QBP、ITGA7具体作用机制进行研究，且本次研究纳入样本量较少，且仅接纳了手术切除患者，未纳入不可手术的非小细胞肺癌患者，因此，未能评估KISS-1、C1QBP、ITGA7在这一部分患者中的表达水平和临床意义，且数据统计时可能存在一定偏倚，仍有待研究。本研究结果还说明KISS-1、C1QBP、ITGA7与非小细胞肺癌密切相关，三者可能共同参与非小细胞肺癌的发展演进。