HPLC测定益肾减脂胶囊中淫羊藿苷含量

王缨，历娜，李桂荣，张玲

（山东药品食品职业学院·山东威海·264200）

益肾减脂胶囊具有温肾去湿、减脂排毒功效，其处方中含有槲寄生、淫羊藿苷、山楂等药味。为了更全面地控制药品质量，建立用高效液相色谱法测定淫羊藿苷的含量[1]。

1 仪器与试药

1.1仪器

岛津SPD-20AT高效液相色谱仪；色谱柱Ajilent C18250×4.6mm 5μm。

1.2对照品

淫羊藿苷，购自中国食品药品检定研究院，批号为110737-201516，含量为94.2%。

1.3试剂

色谱纯甲醇，分析纯甲醇，分析纯乙醇，娃哈哈纯净水。

2 方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1 对照品溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品适量，用甲醇溶解并稀释制成含淫羊藿苷约40μg/ml的溶液。

2.1.2 供试品溶液的制备

取胶囊内容物约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.1.3 阴性对照溶液的制备

取处方中除去炙淫羊藿药材的其他药味，按处方比例制成缺炙淫羊藿的阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。

2.1.4 加样回收率测试溶液的制备

取已测知含量的胶囊内容物约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入淫羊藿苷对照品溶液15ml，加稀乙醇10ml，密塞，称定重量，超声处理（功率300W，频率40kHz）30min，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。平行制备6份。

2.1.5 线性测试溶液的制备

精密称取淫羊藿苷对照品（含量：94.2%）10.5mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液适量制成含淫羊藿苷约20、30、40、60、80μg/ml的溶液。

2.2检测波长的选择

通过测试对照品溶液的紫外吸收光谱，其吸收光谱如图1所示。由图1得知最大吸收波长为270nm，因此检测方法选择270nm作为检测波长。

2.3色谱条件

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（53∶47）为流动相；SPD-20A紫外检测器；检测波长为270nm；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：40℃。

2.4方法学考察

2.4.1 专属性

分别取淫羊藿苷对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，色谱图详见图2、3、4。

由色谱图得出结论：在与对照品保留时间18.2min相同的位置上，供试品色谱图中有相应色谱峰，而阴性对照色谱图中无相应色谱峰。说明处方中其他药味以及溶剂对测定结果无干扰。

2.4.2 系统适用性试验

取淫羊藿苷对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，连续测定5次，结果见表1。

表1 系统适用性试验结果

取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定。分离度R=3.26。由此得出结论，系统适用性试验符合要求。

2.4.3 精密度

取淫羊藿苷对照品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，连续进样5次，测其峰面积。结果见表2。

表2 精密度试验测定结果

由试验结果得出结论：仪器精密度符合要求。

2.4.4 重复性

取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，重复测定6次，用外标法计算含量。结果见表3。

表3 重复性试验测定结果

由试验结果得出结论：方法的重复性符合要求。

2.4.5 加样回收率试验

取加样回收率测试溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，用外标法计算含量。结果见表4。

表4 加样回收率测定结果

由试验结果得出结论：测定方法的回收率符合要求。

2.4.6 线性与范围

取线性测试溶液10μl，注入高效液相色谱仪，测定，结果见表5。

表5 淫羊藿苷线性关系测定结果

以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程，y=24022x-4.5893，相关系数r=1.0000。详见图5。

由试验结果得出结论：淫羊藿苷浓度在20～80μg/ml之间，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.4.7 样品稳定性

取供试品溶液10μl，在0、2、4、8、24、48h，分别注入高效液相色谱仪，测定淫羊藿苷的峰面积。结果见表6。

表6 稳定性试验结果

由试验结果得出结论：供试品溶液在48h内稳定性良好。

2.5样品测定

按测定方法，测试3批样品，结果见表7。

表7 淫羊藿苷含量测定结果

根据表7中淫羊藿苷含量以及平均装量的测定结果，计算出每粒胶囊中淫羊藿苷的含量，结果见表8。

表8 每粒胶囊中淫羊藿苷含量

3 讨论

3.1选择稀乙醇为溶剂，超声提取30min可有效地提取淫羊藿苷，并且环保、价格便宜。

3.2通过筛选流动相，确定了用甲醇-水（53∶47）作为流动相[2]测定益肾减脂胶囊中淫羊藿苷含量[3]。处方中其他药味以及溶剂对测定结果无干扰。

3.3本文采用高效液相色谱法测定益肾减脂胶囊中淫羊藿苷含量，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以甲醇-水（53∶47）为流动相，检测波长为270nm，流速为1.0ml/min，进样量为10μl，柱温为40℃。方法的专属性、准确度、精密度、线性、稳定性等均符合方法学验证要求。