四平地区鹅致病性大肠杆菌实验室耐药性分析

吴丹丹

吉林省梨树县兽医服务中心，吉林梨树 136500

近年来，由于肉鹅、蛋鹅市场行情较好，养殖前期投入不高，门槛较低，农民养殖的积极性较高，四平地区商品鹅养殖量大幅增加。随着养殖密度和养殖量的增加，传染病的发生成为制约养鹅发展的一个主要因素。本地农民养鹅的一个主要特点就是养殖圈舍简陋，养殖环境较差，养殖密度较大，导致传染病不断发生，增加养殖成本和养殖风险。大肠杆菌病是近几年在本地区流行较严重的传染病，各种日龄的鹅都有发生，20日龄以内发病较严重，死亡较大，成年鹅也有发生，一般为零星死亡或和其它传染病继发。临床中，同一抗菌药物对不同种类的病原菌敏感性不同，同一种病原菌的不同菌株对药物的敏感性各不相同，药敏试验是在实验室中筛选对致病菌敏感的抗菌药物的一种体外抑菌实验，临床中可以指导实践用药。笔者通过对四平地区鹅致病性大肠杆菌实验室耐药性分析，总结出其耐药规律和用药防治措施，指导实践。

1 样品采集

临床剖检过程中，无菌采集病死鹅肝脏、心脏，置于自封采样袋中，按采集先后顺序标号，备注采样时间和地点，当天不能送检的要至于-15 ℃冰箱冷冻保存，采样要求严格按照无菌操作进行。笔者在临床中采集样品65份，各地区比例见表1。

表1 各县区采样数量表

2 实验材料

普通营养琼脂培养基、麦康凯培养基、酒精灯、接种环、打孔器、广口瓶、定性滤纸。

3 实验步骤

3.1 药敏片的制备

用打孔器将定性滤纸打成直径为6 mm左右的圆形纸片，将打好的药敏片进行筛选，保留完整的，弃掉残次品，将挑选好的药敏片装入广口瓶，用牛皮纸封口扎紧，放入烘干箱中烘干消毒。

3.2 药物溶液配制

选择正规厂家有批准文号的兽药产品，安普霉素、金霉素、阿莫西林、新霉素、粘杆菌素、氨苄西林、氟苯尼考、恩诺沙星、磺胺间甲氧嘧啶钠、盐酸多西环素、林可大观霉素，上述药物按照治疗浓度配置药物溶液。配好后装入事先准备好刷洗干净的青霉素小药瓶中备用，瓶身贴好防水标签，标明药物名称、含量、配置时间。

3.3 培养基的制备

在化学试剂商店购买成品普通琼脂培养基和麦康凯培养基原料，按照说明操作，在培养皿中制成培养基。

3.4 细菌培养

在无菌操作台中，取小块病料，用手术剪剪开组织切面，用镊子夹住病料，均匀涂于麦康凯培养基表面，注意不要戳破培养基表面。放入37 ℃温箱，培养24 h，取出后可见培养基上长出粉红色圆形不规则菌落。在无菌操作台中，用酒精灯火焰消毒接种环，然后在麦康凯培养基上挑取适量菌落，以划线方式将细菌涂布到普通琼脂培养基上，直至细菌均匀密布于平皿。

3.5 放入药敏片

将烘干好的滤纸片浸入药物溶液中，完全浸透后用镊子轻轻贴于培养基表面，药敏片按梅花形摆放，外围6个，中间1个，每个药敏片的间距要相等，在培养皿外做好标记，记录好每个药敏片所代表的药物。上述步骤操作好后至于37 ℃温箱培养24 h。

3.6 结果判定

24 h后取出观察结果，按照抑菌环大小判断药物敏感性，具体可以用尺子测量抑菌环大小，具体情况见表2。

表2 药敏试验结果 单位：mm

4 结果分析

对上面的实验结果进行分析，得出安普霉素、粘杆菌素、氟苯尼考、磺胺间甲氧嘧啶钠、林可大观霉素几种药物对近段时间四平地区鹅大肠杆菌敏感，临床治疗效果较好，建议临床中使用上述几种高敏药物。

5 讨论

药敏试验是兽医临床中应用较为广泛的一种实验室辅助手段，可以为临床兽医提供较为准确的用药指导。但是由于操作手法和实验中的一些不确定因素，导致药敏试验也存在一定误差和弊端。一是实验过程是在动物体外的一种抑菌实验，所以受药物的吸收途径、药物在体内的利用率等因素影响，实验结果存在一定的误差；二是实验中药物溶液的配置时间也可影响实验结果；三是药敏试验需要一定的时间才能完成，所以在临床中不能完全依靠实验结果指导用药，要根据动物的发病情况，考虑边治疗边等结果的方式进行，防止病情发展造成严重的经济损失。

目前市场上在售的抗生素类药物种类较多，如果没有药敏试验，可能会凭兽医或养殖户的经验进行投药治疗，治疗效果不能很好保障。药敏试验的应用和普及，为临床治疗提供了用药选择，减少了治疗药物投入，为养殖提高利润，增加了农民收入，是一项实用技术。规模化养殖集团可以自建兽医室开展药敏试验，散养户可以委托乡镇兽医站或县级疫控中心等单位开展药敏试验，指导临床用药。临床中还出现过药敏试验结果没有高敏药物的现象，一般可以选择两种或两种以上中敏药物联合用药，联合用药一定要遵循联合用药规则，否则可能引起用药效果减弱或药物出现拮抗现象，临床中一定要避免此类现象的出现。联合用药可以起到一加一大于二的效果，两种药物相互增效，使药物杀菌效果达到最大。