多种方法检测乳粉中菌落总数能力验证样品

◎ 李 璐，马 宁

（山西省检验检测中心，山西 太原 030031）

能力验证是评价和证明实验室检测能力的重要手段，也是一种非常有效的外部质量评估方式。实验室可以通过参加能力验证检测其对检测程序、方法、设备、人员等运行控制的有效性[1]，也可有效识别实验室存在的问题，监督和改进自身检测能力，完善质量管理体系[2]。2020年，本实验室参加由中国食品药品检定研究院组织和实施的乳粉中菌落总数检测能力验证，两个浓度的样品检测结果均为满意。为提高检测结果的准确性，此次考核由双人平行试验，同时使用两个厂家的培养基，并增加了显色剂对照组和测试纸片对照组，本文对此次能力验证的过程和结果进行总结分析，以期对其他实验室的能力验证活动有所帮助和参考。

1 材料与方法

1.1 样品

来源于中国食品药品检定研究院组织的乳粉中菌落总数的能力验证，编号为52、127。每个编号对应1份为白色球状西林瓶装样品和1袋乳粉样品。

1.2 培养基与试剂

平板计数琼脂（北京陆桥，200717），平板计数琼脂（青岛海博，20200227），菌落总数测试片（3M，335JJJ），菌落总数测试片（北京陆桥，20190604AC），红四氮唑（TTC，上海沪震实业，HZ10103901），磷酸盐缓冲液（北京陆桥，200304）。

1.3 仪器设备

TOMY-700高压灭菌锅，Heratherm IGS 400培养箱，Scout SE-SE2001F电子天平，BagMixer 400VW拍击式均质器，Thermo 1384生物安全柜。

1.4 检测方法

按照《乳粉中菌落总数计数检验作业指导书》（NIFDC-PT-252）和《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》（GB 4789.2—2016）的要求进行样品处理、稀释和培养计数[3]。

1.5 样品处理及稀释

在生物安全柜内将含有菌落总数样品的西林瓶打开，取225 mL磷酸盐缓冲液加入到无菌均质袋中，并将西林瓶内的小球加入到磷酸盐缓冲液或生理盐水中，充分溶解。然后再将与西林瓶相同编码的奶粉样品加入到上述磷酸盐缓冲液或生理盐水中，充分均质混匀。依此方法分别对两件样品进行处理。

取1 mL 1∶10样品匀液加入到9 mL磷酸盐缓冲液中，反复吹打使其混合均匀，制备1∶100样品匀液，依此法共制备10-1～10-66个稀释度稀释液，按照GB 4789.2—2016进行计数。由两名人员同时使用两种不同厂家来源的平板计数琼脂进行操作。为防止菌落蔓延和方便计数，另外一组在倾注培养基前，在培养基中添加终浓度为0.001%的TTC。另外使用北京陆桥和3M的菌落总数测试片进行计数，每片接种量为1 mL。以上各组置于36 ℃培养48 h。

2 结果与分析

试验由双人独立操作，使用北京陆桥和青岛海博两种培养基，每种培养基设置TTC对照组，另外使用北京陆桥和3M的菌落总数测试片同时试验，结果见表1、表2。两位检验员的检测结果基本一致，52号样品的菌落总数最终报告为各组均值16 083 CFU·g-1。127号样品因菌数较多，纸片法菌落重叠较为严重，不易计数，故呈现出较大误差，故最终报告为平皿法的各组均值2 487.5 CFU·g-1。Z值分别为0.23、0.22，结果为满意。

表2 127号样品菌落总数计数结果表

（续表2）

3 结论与讨论

《乳粉中菌落总数计数检测能力验证计划》（NIFDC-PT-252）为定量检测项目，设计了2个不同浓度的样品。本实验室两个浓度的样品菌落总数的测试结果均为满意，但两个样品的结果报告值均略高于指定值（52和127号样品的菌落总数指定值分别为14 000 CFU·g-1和2 200 CFU·g-1）。分析原因可能为从样品稀释至倾注培养基时间较长，导致样液中菌数有所增殖。另外，127号样品因生长菌落数较多，使用菌落测试片检测时菌落堆叠蔓延的情况较为严重，误差较大，而且不同厂家的测试纸片结果差异较大。

实验中的关键控制点分析。①设置双人同时试验，减少人员操作误差，两人平行试验结果应满足再现性要求，即对数值绝对差值不大于0.45[4]。②样品应充分稀释并混合均匀，确保样液的均一性，稀释度至少制备至10-6，确保有适宜计数的平板。③设置TTC对照组，TTC不仅可使生长菌落更易辨认，还具有防止菌落蔓延的作用。但应注意其使用浓度，《中国药品检验标准操作规范（2010年版）》中建议使用浓度为0.001%[5]，《化妆品安全技术规范（2015年版）》中使用浓度为0.005%[6]。刘胜桃等[7]研究发现使用0.001%～0.002%的TTC用于乳及乳制品菌落总数检测较为适宜，浓度过高会抑制菌落生长。④培养至24 h、48 h时应分别计数，防止菌落蔓延导致菌落无法计数的情况出现。

掌握以上关键操作点是获得可靠试验数据的前提，通过多种方法相互验证，可以进一步提高数据的准确性，使实验室报出结果时更具有把握。实验室可通过参加能力验证活动不断积累实践经验，提升检验人员的技能水平，确保实验室检验质量。