壮药补肺消积饮颗粒的制备工艺及薄层色谱鉴别

洪晓华　莫春梅 王同彪 荣 震　

壮药补肺消积饮颗粒的制备工艺及薄层色谱鉴别

洪晓华1莫春梅2王同彪3荣 震2

（1.广西中医药大学，广西 南宁 530000；2.深圳宝安纯中医治疗医院，广东 深圳 518000； 3.广西中医药大学第一附属医院，广西 南宁 530000）

目的：依据因素选择和正交实验优选出壮药补肺消积饮颗粒的最佳提取、浓缩、干燥和成型工艺，为制备壮药补肺消积饮颗粒、研究其质量标准给予指导。方法：以主母药半枝莲中野黄芩苷含量和总干膏为综合评价指标，优化该制剂的制备工艺；同时对黄芪、白花蛇舌草、三七、半枝莲开展薄层色谱（TLC）鉴别。结果：壮药补肺消积饮的最佳水提工艺参数建议为10倍量水煎煮该复方十二味中药材，提取1 h×2次；提取液浓缩在70℃条件下的最优相对密度是1.30～1.32，最佳干燥工艺为在70℃下干燥2 h，干燥至含水量6%以下；最优成型工艺为加入辅料混合比例为2∶1糊精与羧甲淀粉钠，稠膏与辅料比例为1∶1.4。经质量标准初步研究，薄层色谱中能鉴定出白花蛇舌草、半枝莲、三七和黄芪。结论：该生产工艺科学稳定、规范合理、成品率好且质量可控，所得的工艺参数可为壮药补肺消积饮颗粒的生产提供参考，适合医药企业放大生产。

补肺消积饮颗粒；正交设计；制备工艺；薄层色谱；质量标准；含量测定

引言

肺癌（Lung Neoplasms，LN）是一种复杂的恶性疾病，具有多组织学和多分子类型，其位列全球癌症死亡主要原因的榜首[1,2]。此外，该病“双率”（发生率与病死率）在我国恶性肿瘤中也皆位列第一[3]。经流行病学证实，LN病人以NSCLC（非小细胞肺癌）为主，同时肺腺癌是最常见的亚型[4,5]。当前对于LN的治疗，多采用切除、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等联合使用，治疗效果及患者生存期较前获益，但现代各治疗药物所带来的近、远期毒副作用及易产生耐药性的问题仍较为显著[6]。壮药补肺消积饮是我国首批桂派中医大师、名老中医荣远明教授的经验方，前期研究[7-10]发现，壮药补肺消积饮联合化疗或靶向治疗中晚期肺腺癌时具有增效减毒、干预肿瘤免疫逃逸、降低肿瘤标志物表达、延长总生存期（Overall survival，OS）和无进展生存期（Progression-free survival，PFS）的作用，患者取得较好的临床获益。壮药补肺消积饮针对LN整体属虚，局部属实，因实致虚，因虚而实，实则不外嘘（气）滞、勒（血）瘀、热毒、痰浊数端的病机，方中主母药白花蛇舌草解热毒、除湿毒、除瘀血、通龙路；半枝莲清热解毒；主公药黄芪补虚健体；母帮药莪术、三七通龙路，除瘀血；麦冬补虚健体；公帮药五味子补虚生津、收敛固涩；公引药紫菀、浙贝母、款冬花通气道，止咳嗽；桑白皮解毒清肺、通气道、通水道；母引药鳖甲祛瘀软坚散结。该方补虚祛邪，畅通三道两路，使三气同步，阴阳调和，诸证得平。为克服汤剂煎煮、携带的不便，故以主母药半枝莲的主要成分野黄芩苷的含量辅以水提物总干膏作为主要指标，对验方壮药补肺消积饮制备颗粒制剂的工艺及质量标准进行初步探究。

1 实验部分

1.1 药材与试剂

壮药补肺消积饮中的十二味中药材（包含有白花蛇舌草、半枝莲、三七等），经广西壮族自治区中医药研究院鉴定，白花蛇舌草符合《广西中药材标准》（1996年版）项下有关规定，另含黄芪、三七与半枝莲等在内的十一味中药材同2015版《中华人民共和国药典》项下的相关标准相符。

1.2 方法与结果

1.2.1 工艺研究

工艺流程图如图1所示。

图1 工艺流程图

1.2.2 正交实验因素水平选择

由于壮药补肺消积饮为荣远明教授的临床验方，传统使用方法为水煎煮后患者口服药液，为不影响壮药补肺消积饮原汤剂的疗效，故壮药补肺消积饮的提取方式选用水煎煮法。根据中药制剂的常规方法及生产实际情况的经验，选出同煎煮提取率有关的3项关键因素：煎煮时间（A）、煎煮次数（B）和加水倍量（C），每个因素各选三个水平进行考察，因素水平选择见表1。

表1 正交因素水平表

1.2.3 正交实验的结果

进行壮药补肺消积饮的水提L9（34）正交实验，按配方比例，称取药材9份，每份396 g，安排9次正交实验，合并水煮液，浓缩定溶200 mL，制成1～9样品溶液，作为供试溶液。在测定总干膏方面，先准确吸量25 mL供试溶液，放于蒸发皿（已干燥恒重）里，再实施水溶蒸干操作，之后于105℃下对残渣实施180 min干燥处理，接着移至干燥器里，冷却0.5 h，再马上称量，同时对各实验点得分展开求解。野黄芩苷含量的测量是用液相色谱测定上述9个样品的野黄芩苷含量，单位为mg/mL，计算各实验点的得分。运用综合评分法进行评价，采取正交实验，涉及的指标包括野黄芩苷含量、总干膏，综合评分=（野黄芩苷含量/野黄芩苷量的最大值）×0.5＋（总干膏/总干膏最高值）×0.5。并对统计结果实施方差分析（ANOVA），结果显示A、C因素具有显著性，结合客观情况、节能减成本等情况，综合分析的结果显示，A2B2C2为最优组合，即煎煮60 min，实施两遍煎煮，加入10倍水量。结果如表2、表3所示。

表2 正交实验的方差分析

注：F1-0.05(2,2)=19.00 , F1-0.01(2,2)=99.00

表3 水提L9（34）正交实验的设计与结果

1.2.4 验证试验

根据壮药补肺消积饮正交实验结果，对上环节确定的最优水提工艺（A2B2C2）开展两组验证试验，分别对野黄芩苷的含量与总干膏实施测定。两次试验中野黄芩苷含量和总干膏稳定在较优水平，野黄芩苷含量均值是0.216 mg/mL，平均总干膏为32.55%，提示本水提工艺稳定可行，可见A2B2C2为最适提取工艺，即此中药方剂的12味药材，加10倍水量，煎煮提取次数为两次，单次用时是1 h。结果表4所示。

表4 验证实验结果

1.2.5 提取液浓缩试验

合格颗粒的制成，要求提取液浓缩所得的稠膏含水量须在一定范围内，经试验，稠膏浓缩至相对密度1.30～1.32（70℃）与辅料混匀制粒，制粒效果较好，故壮药补肺消积饮颗粒提取液浓缩的最佳相对密度为1.30～1.32（70℃）。

1.2.6 颗粒剂成型工艺试验

由于本方提取液浓缩所得的稠膏粘性较大，若单独使用糊精作为辅料，所制颗粒易出现溶化性不合格的情况。经试验得出使用糊精与羧甲淀粉钠（2∶1）混合后再与稠膏制粒效果最佳。确定糊精、羧甲淀粉钠作为辅料后，为便于生产操作及确保颗粒成型和成品率，故对糊精、羧甲淀粉钠的用量进行比较试验，取浓缩得到的稠膏按不同比例加入糊精、羧甲淀粉钠进行混合制粒，根据成型难易程度及成品率，确定糊精、羧甲淀粉钠用量。从试验结果（见表5）可知，稠膏与辅料比例为1∶1.4时，混合、制粒、成品率均良好。干燥工艺为湿颗粒在70℃下干燥2小时，而后过14目筛整粒，干燥至含水量6%以下。

表5 成型工艺考察结果

1.2.7 稳定性试验

取三批壮药补肺消积饮颗粒试验样品（批号：180606、180613、180620）开展长期、加速这两项稳定性试验。将上述三批样品在临床用药品包装条件下，分别置于室温贮藏的条件下和置于稳定性试验箱中（条件为：75%±5%的相对湿度，40±2℃的温度），除当月（0月）考核一次外，连续三个月和第六月各考核一次。经连续考核六个月，并观察直接与药品接触的包装材料对药品稳定性的影响。结果显示，三批壮药补肺消积饮颗粒试验样品无论在性状、鉴别、检查和含量测定方面均符合规定，此外微生物限度测试报告也表明同要求相符。本次试验的结果表明：壮药补肺消积饮颗粒在临床用药品包装条件下，两年内稳定。

1.2.8 白花蛇舌草、半枝莲、三七、黄芪的薄层色谱鉴别白花蛇舌草、半枝莲、三七、黄芪的薄层色谱鉴别[11-13]如下。

1.2.8.1 白花蛇舌草溶液的制作

（1）供试品溶液：备10 g供试品，同时研细，再添加30 mL甲醇（MT），实施0.5 h超声处理，待液体温度降至室温，再滤过，接着蒸滤液达近干状态，将2 g中性氧化铝（Al2O3）放到残渣内拌匀，继续将其干燥。把已干燥的移至中性Al2O3柱（5 g，100至200目，内径1 cm）上，运用20 mL的MT进行洗脱，而后弃去；然后再次洗脱时使用20 mL50%MT，收集并蒸干洗脱液，用1 mL的MT溶解，得到供试品溶液。（2）阴性对照溶液：阴性样品取10 g，并研细（无白花蛇舌草成分），参照以上步骤完成阴性对照液的制备。（3）对照药材溶液：备对照药材百花蛇草1 g，同时研细，参照上述操作完成对照药材溶液的制备。参考2015版《中国药典》四部（通则0502），实施TLC试验，吸取上述（1）（2）（3）步骤的溶液各0.01 mL，同时皆滴加于同一张含CMC-Na（羧甲基纤维素钠）黏合剂的硅胶G薄层板上，把2∶4∶2∶0.5的PE（石油醚）- TL（甲苯）- EAC（乙酸乙酯）-MT作为展开剂，展开后再取出晾干，之后向板上喷涂硫酸（H2SO4）乙醇溶液（10%），再置于105℃条件下，待呈现清晰斑点停止加热。在紫外灯波长为365 nm时，检视供试品色谱。结果发现在和对照品色谱相对区域，有相同颜色的荧光斑点显现，阴性未见干扰，如图2所示。

注：1～3：供试样品（20180806、20180813、20180820）；4：白花蛇舌草对照药材；5：阴性对照。

1.2.8.2 半枝莲溶液的制作

（1）供试品溶液：供试品取10 g，并研细，再添加30 mL的MT，同时实施0.5 h超声处理，待液体降至室温，之后滤过，再将滤液蒸干，通过20 mL水对残渣进行溶解，并通过20 mL水饱和NBA（正丁醇）实施2遍振摇提取操作，将溶液统一起来，并蒸干，用1 mL的MT对残渣进行溶解，此即供试品溶液。（2）阴性对照溶液及（3）对照药材溶液与1.2.7.1法同。参考2015版《中国药典》四部（通则0502），实施TLC试验，吸量以上（1）（2）（3）溶液皆0.01 mL，同时皆滴加于同一张含CMC-Na黏合剂的硅胶G薄层板上，将比值为5∶4∶1∶0.2的TL- EAC-MT-甲酸当做展开剂，展开后再取出晾干，之后向板上喷涂AlCl3（三氯化铝）乙醇溶液（5%），吹热风显示清晰斑点为止。在紫外灯波长为365 nm时，检视供试品色谱。发现在和对照品色谱相对区域，有相同颜色的荧光斑点显现，阴性未见干扰，如图3所示。

注：1～3：供试样品（20180806、20180813、20180820）；4：半枝莲对照药材；5：阴性对照。

1.2.8.3 三七溶液的制作

（1）供试品溶液：供试品取10 g，并研细，再添加30 mL的MT，同时实施0.5 h超声处理，待液体降至室温，滤过，接着蒸滤液为近干状态，取2 g中性Al2O3放入残渣内拌匀，继续将其干燥。之后移至中性Al2O3柱（1 cm内径，5 g，100至200目）上，洗脱时是使用20 mL的MT来进行，而后弃去；然后在洗脱时是使用20 mL的50%MT来进行，收集并蒸干洗脱液，用1 mL的MT溶解，得到供试品溶液。（2）阴性对照溶液及（3）对照药材溶液与1.2.8.1法同。参考2015版《中国药典》四部（通则0502），实施TLC试验，吸量以上（1）（2）（3）溶液皆0.01 mL，同时皆滴加于同一张含CMC-Na黏合剂的硅胶G薄层板上，将比值为4∶4∶1.5的TL- EAC-MT当做展开剂，展开后再取出晾干，之后向板上喷涂H2SO4乙醇溶液（10%），吹热风显示清晰斑点为止。在紫外灯波长为365 nm时，检视供试品色谱。结果发现在和对照品色谱相对区域，有相同颜色的荧光斑点显现，阴性未见干扰，如图4所示。

注：1～3：供试样品（20180806、20180813、20180820）；4：三七对照药材；5：阴性对照。

1.2.8.4 黄芪溶液的制作

（1）供试品溶液：供试品取10 g，并研细，添加30 mL的MT，同时实施0.5 h超声处理，待温度下降至室温水平，再滤过，接着蒸滤液为近干状态，将2 g中性Al2O3放到残渣内，并拌匀，继续将其干燥。之后移至中性Al2O3柱（1 cm内径，5 g，100至200目）上，洗脱时是通过使用20 mL的MT进行，而后弃去；然后在此洗脱的时候使用20 mL的50%MT来进行，收集并蒸干洗脱液，用1 mL的MT溶解，得到供试品溶液。（2）阴性对照溶液及（3）对照药材溶液与1.2.7.1法同。参考2015版《中国药典》四部（通则0502），实施TLC试验，吸量以上（1）（2）（3）步骤的溶液皆0.01 mL，同时皆滴加于同一张含CMC-Na黏合剂的硅胶G薄层板上，将比值为10∶1的三氯甲烷-MT作为展开剂，展开后再取出晾干，之后通过氨蒸气，实施熏蒸显色操作。在紫外灯波长为365 nm时，检视供试品色谱。发现在和对照品色谱相对区域，有相同颜色的荧光斑点显现，阴性未见干扰，如图5所示。

注：1～3：供试样品（20180806、20180813、20180820）；4：黄芪对照药材；5：阴性对照。

2 讨论

本研究通过因素水平选择，确定了影响壮药补肺消积饮颗粒水提效率的三个主要因素为煎煮时间、煎煮次数和加水倍量，并对该三个主要因素进行水提L9（34）正交实验。根据实验结果并结合实际情况及节能降成本等情况综合考虑，确立了壮药补肺消积饮颗粒的最佳水提工艺为A2B2C2，并进一步实施验证实验，证实此水提工艺具备可行性与稳定性，重复性较好。其次考察了壮药补肺消积饮提取液的浓缩工艺，得出了壮药补肺消积饮颗粒提取液浓缩的最佳相对密度。最后对壮药补肺消积饮颗粒的成型工艺进行了考察，得出辅料糊精与羧甲淀粉钠混合比例为2∶1，此辅料比例与壮药补肺消积饮稠膏制粒效果最佳，同时稠膏与辅料比例须为1∶1.4，此药辅比例下混合性良好，所得的颗粒成品率高。本研究首次研制壮药补肺消积饮颗粒，初步完成了此中药制剂的生产工艺和质量标准的建立，优化了该颗粒的制备工艺，提出了本方中特殊成分野黄芩苷的测定方法，进行方法学考察且符合相关标准。

3 结束语

本研究结果为测定壮药补肺消积饮颗粒中野黄芩苷的含量提供了理论基础。在本研究过程中，依托现代技术对黄芪、白花蛇舌草、三七、半枝莲实施TLC鉴别，专属性较强，对此中药制剂的品质能够做到有效控制。此外，该颗粒稳定性好，各项检测均符合规定，为治疗肺癌开发疗效好、安全性高的中药复方颗粒制剂提供了可靠的保证。

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Preparation Technology and Thin Layer Chromatography Identification of Zhuang Medicine Bufei Xiaojiyin Granules

Objective: According to factor selection and orthogonal experiment, the optimal extraction, concentration, drying and molding process of Zhuang medicine Bufei Xiaojyin granules were optimized, which provided guidance for the preparation of Zhuang edicine Bufei Xiaojyin granules and the study of its quality standard. Methods: Taking the content of scutellarin in Scutellaria barbata and total dry ointment as comprehensive evaluation indexes, the preparation process of the preparation was optimized; Meanwhile, Astragalus membranaceus, Hedyotis diffusa, Panax notoginseng and Scutellaria barbata were identified by thin layer chromatography (TLC). Results: The optimal water extraction parameters of Zhuang medicine Bufei Xiaojiyin is recommended to decoct the compound twelve-flavored Chinese medicines with 10 times the amount of water and extract them for 1h×2 times; the optimum relative density of the cextract concentrated at 70℃ is 1.30 to 1.32. The optimum drying process is to dry at 70℃ for 2 hours, drying to moisture content below 6%; the optimum molding process is to add excipients in a mixture ratio of 2∶1 dextrin and sodium starch glycolate, thick paste and the proportion of accessories is 1∶1.4. Preliminary research on quality standards showed that Oldenlandia diffusa, Scutellaria barbata, Panax notoginseng and Astragalus could be identified by thin layer chromatography. Conclusion: The process parameters optimized in this study can provide reference for the production of Zhuang medicine Bufei Xiaojiyin granules. The production process is scientific and stable, standardized and reasonable, with good yield and controllable quality, which is suitable for scale-up production of pharmaceutical companies.

Bufei Xiaojiyin granules; orthogonal design; preparation technology; thin layer chromatography; quality standard; content determination

R283; R29

A

1008-1151(2022)01-0048-05

2021-09-27

国家自然科学基金（81660774）；广西自然科学基金面上项目（2020GXNSFAA238011）；广西壮族自治区科技厅重点研发计划项目（桂科AB17195067）；广西研究生教育创新计划项目（YCBZ2021077）；广西高校中青年教师科研基础能力提升项目（2021KY0310）；国家中医药管理局荣远明老中医药专家学术经验传承工作室项目[2011]41号。

洪晓华（1992－），女，广东中山人，广西中医药大学在读博士研究生，从事中医药防治恶性肿瘤。

荣震（1971－），男，广西融安人，深圳宝安纯中医治疗医院教授，博士研究生导师，从事中医药防治恶性肿瘤。