复元饮合剂质量标准研究

李文静 金卫洲 柳 茜 刘 军

银川市中医医院，宁夏 银川 750001

疳积尤多见于5岁以下小儿，又称“小儿疳积”[1-2]，属中医儿科四大要证(痘、麻、惊、疳)之一,是一种多由喂养不当或其他疾病导致小儿脾胃受损,水谷不化，精微不布，气血运行不畅的慢性消耗性疾病，属虚实夹杂，多采用消积健脾的治疗原则[3]。西药在治疗疳积中手法单一，效果不佳[4]，而市面常用中成药因考虑携带、使用和储存方便，多采用颗粒剂和丸剂，但用于小儿疳积起效略慢。目前临床亟需挖掘一款处方精简、疗效明确、起效迅速的合剂。复元饮是我院儿科应用多年的临床经验方，主要用于治疗小儿湿热疳积，食欲不振。药味少、组方精当、疗效明确，在临床中受到医生及患者的一致好评。该方在四君子的基础上进行加减化裁，补益脾胃之气，与“疳皆脾胃病，亡津液之所作”的病因病机相吻合。全方攻补兼施，药方平和，益气健脾补肺的同时健胃消食，从而改善疳积导致的肺苷、肝苷、脾苷各类症状。本文旨在通过建立制剂中甘草及白芍的薄层鉴别，并对方中芍药苷含量进行测定，以期建立该制剂的质量标准，进而通过临床验证形成疗效稳定可控的治疗小儿疳积的医院中药制剂，更好地推广和提升中医特色医疗技术水平。

1 材料与仪器

1.1 仪器 1260型高效液相色谱仪(美国安捷伦公司，配有G1315D DAD检测器)；Agilent 5TC-C18色谱柱(460mm×250mm，5 μm)，KQ-250D B超声清洗机(昆山市超声仪器有限公司)；电子天平(METTLER TOLEDO XS205，精度可达万分之一)；SHZ-D(III)循环水式真空泵(巩义市宇翔仪器有限公司)。

1.2 试药 芍药苷(批号：S-010-180416)、薄层G板(青岛海洋化工厂分厂和烟台市化学工业研究所，规格：50 mm×100 mm)、甘草苷(批号：111610-201106)，水是超纯水，乙腈为色谱纯，其他均为化学纯。复元饮合剂银川市中医医院自制(批号：20201117、20200816、20200517)。

2 方法与结果

2.1 TLC鉴别

2.1.1 白芍[5-6]取本品20 mL，用氨试液调节PH至12，用水饱和正丁醇(1∶1)振摇提取3次，合并上层正丁醇液；用水洗至下层无色，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇适量使其溶解，作为供试品溶液。同供试品法制备缺本药的阴性对照液。取对照品芍药苷，用乙醇制成1 mg/mL的待用对照品溶液。分吸上述3种溶液各5 μL，点于同一G薄层板上，放置于有CHCL3-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20∶3∶7∶0.1)展开剂的层析缸内，展开，取出，晾干。喷以适量10%硫酸乙醇显色剂，挥干105 ℃加热至斑点清晰后日光下检视。如图1所示。

2.1.2 甘草[7-9]取复元饮合剂20 mL，用1∶1乙酸乙酯萃取2次，合并乙酸乙酯层，置水浴蒸干，残渣加甲醇适量溶解，作为供试品溶液。取适量甘草苷对照品，用甲醇制成对照品溶液。参照供试品制备法制成缺甘草的阴性对照液。各吸取上述5 μL，分别点于同一薄层G板上，在乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶2∶2)展开剂的层析缸内展开，取出，晾干，喷以适量10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至显色清晰并在365 nm紫光灯下检视。如图2所示。

2.2 HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件 参考《中国药典》2020年版一部中白芍含量测定项的条件，选用以C18为填充剂(4.6 mm×250 mm，5 μm)。测定波长[10]：230 nm；流动相：乙腈-0.1%磷酸液(14∶86)，要求理论论板数≥2000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称量适量芍药苷对照品，50%甲醇定容制成0.24 mg/mL对照溶液备用。

2.2.3 供试品溶液提取溶剂的考察 精密量取样品溶液1 mL，共4份，置10 mL容量瓶中，用不同溶剂定容至刻度，摇匀，离心，取上清液作为供试品溶液。按上述色谱条件进样10 μL检测，记录峰面积。结果见表1。

表1 不同提取溶剂考察结果

结果表明，50%甲醇作为溶剂，芍药苷含量较高，故选择50%甲醇作为供试品溶液制备溶剂。

2.2.4 供试品溶液的制备方法 精密量取本品 1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，即得。

2.2.5 阴性对照溶液的制备 按照复元饮工艺路线及供试品制备法制备不含白芍的阴性对照溶液。

2.2.6 专属性考察 分别取上述3种溶液，按 “2.2.1” 项下条件进样10μL，结果表明：复元饮供试品溶液在芍药苷对照品溶液色谱峰保留时间处有相应色谱峰出现，而阴性对照溶液无对应色谱峰，说明阴性对照对芍药苷的测定无干扰，所建立的色谱方法专属性良好，分离度良好(大于1.5),其理论塔板数>2000。如图3所示。

2.2.7 标准曲线 制备3.6、4.8、7.2、9.6、12、24 μg/mL的对照品溶液，按 “2.2.1” 项下条件进样，测定峰面积。分别以6种对照品浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回归，得方程y=9514.4X-11.052，R2=0.9999。结果表明，芍药苷在4.80～24.00 μg/mL范围与峰面积呈良好的线性关系。

2.2.8 精密度测定 取浓度为 12.00 μg/mL的芍药苷对照品溶液，进样10 μL检测，重复进样 6 次，芍药苷峰面积，结果RSD为0.46%，表明仪器精密度良好。

2.2.9 重复性试验 取6 份复元饮各1 mL，置10 mL容量瓶中，加50%甲醇定容至刻度，制备供试品溶液，进样10 μL检测，测定芍药苷含量，结果RSD为1.81%，表明方法重复性良好。

2.2.10 稳定性试验 精密量取同一供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 各进样1次，每次进样10 μL检测，测定芍药苷峰面积，RSD为1.57%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.11 加样回收率试验 精密量取已知芍药苷成分含量的复元饮样品9份，每份1 mL，置10 mL容量瓶中，分别按高、中、低浓度芍药苷与所取供试品中其含量之比为1.5∶1，1∶1，0.5∶1精密加入，加50%甲醇至刻度，摇匀，离心，取10 μL进样检测，计算回收率，结果表明芍药苷平均回收率为93.73%，符合《中国药典》2020版规定的范围需要确定范围，且RSD%<1%，表明本法的准确度符合要求。见表2。

表2 加样回收率试验结果 (n=9)

2.2.12 样品测定 取样品6批，照含量测定方法操作，测定其芍药苷的含量，分别为1.48、1.67、1.08、1.02、1.25、1.24 mg/mL。

2.2.13 白芍药材含量测定及同批制剂转移率的计算 取六批复元饮样品中的原药材白芍，参照《中国药典》2020年版一部中白芍含量测定项供试品制备法测定芍药苷含量，并计算其转移率约为71.39%。

3 讨论

3.1 TLC方法建立 在对组方中甘草及白芍进行薄层鉴别的过程中，除了对专属性及重现性进行考察外，还通过对比不同厂家薄层板、不同温度(6℃、30℃)及湿度(38%、80%)下的展开效果进行耐用性的考察，结果显示所建立的相应薄层鉴别方法专属性、重现性等良好，且阴性均无干扰，适宜于该方白芍与甘草的薄层定性鉴别。

3.2 供试品制备方法的选择 在提取溶剂选择方面，以色谱峰的吸收强度及分离度为考察指标，选取了甲醇、50%乙醇、乙醇、50%乙醇为提取溶剂，结果表明50%甲醇提取液中芍药苷色谱峰的数目以及分离度明显优于其他的提取液，因此最终选择50%甲醇作为提取溶剂。

3.3 HPLC指标成分的选择 吴鞠通[11]在《温病条辨》篇中首次将本病治法作出总结，提出治疳九法[12]，其为：疏补中焦；升降胃气；升陷下之脾阳；甘淡养胃；调和营卫；食后击鼓，以鼓动脾阳；伤其脾胃者，调其饮食；如果生有疳虫，再少用苦寒酸辛；若见疳即予苦寒杀虫便误矣，用丸药缓运脾阳，缓宣胃气。小儿疳证虽有专病专药治之，但目前亦有特殊辨证论治，典型的治则治法包括：甘淡清补法、健脾消积杀虫法、清热解毒法等[13]。白芍性味酸寒，敛阴敛汗，具有很好地改善小儿疳积后虚热伤阴的症状，方中与炙甘草配伍具有养血敛阴，柔肝缓急止痛的功效，可以有效改善小儿疳积后引起的肚肿青筋，胃脘胀痛的症状，现代且药理研究[14]表明其具有抗炎镇痛、抗抑郁、抗癌、抗血栓、降血脂、降 糖、保肝、改善心肌肥厚、改善骨关节炎、改善斜视性弱视、改善缺血再灌注的影响、通便、减毒增效的作用，同时对口腔扁平苔藓、硬皮症、高泌乳血症具有治疗作用。因此，本研究选择芍药苷为检测指标。为了更有效并全面的控制其质量，后期笔者正在对其制剂的稳定性进行跟踪考察，以期为临床治疗小儿疳积等安全用药提供有力的科学依据。

4 结论

中药成分复杂，提取过程中的浸润与渗透、解析和溶解、扩散与置换阶段相互联系，其中任何一个阶段受阻碍或限制，都将导致有效成分转移率降低并直接影响中成药的疗效。本研究建立了HPLC测定复元饮合剂中芍药苷含量的方法，六批样品中芍药苷含量均符合要求，且芍药苷转移率高达70%以上，充分证明我院研制的复元饮处方工艺合理、质量可控、稳定性良好。以上试验结果表明，所建立的质量标准方法操作简便，结果准确，灵敏度高，重现性好，回收率好，干扰小，且阴性对照溶液对测定无干扰，可以有效地控制复元饮合剂的内在质量。