自发性脑出血患者血清microRNA-130a、microRNA-210表达水平及与早期神经功能恶化的关系*

李光波，王新港，张旭伟

（连云港市中医院神经外科，江苏连云港 221000）

自发性脑出血（spontaneous cerebral hemorrhage,ICH）为非外伤情况下各种原因引起的脑大、小动脉，以及静脉、毛细血管自发性破裂导致的脑内出血，是脑卒中的一种亚型，占脑卒中总数的15%左右，具有高致残率、高病死率的特点[1-2]。早期神经功能恶化（early neurological deterioration, END）是ICH早期常见并发症，提示ICH 患者预后不良[3]，寻找特异性高的END 预测因子，对改善患者生活质量，减轻家庭及社会负担具有重要意义。

MicroRNA（miRNA）由21～25 个核苷酸组成，参与细胞增殖、分化等多个生物学过程。多数miRNA表达水平与血氧含量密切相关，还可逆向反映血氧供应状况。有研究表明，血清microRNA-130a（miR-130a）、microRNA-210（miR-210）表达水平与脑血管疾病的发生、发展关系密切，但两者与ICH 患者发生END 的关系尚不明确[4-5]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年7月—2021年6月连云港市中医院收治的ICH 患者82 例作为ICH 组，另取同期本院60 例健康体检者作为对照组。本研究经医院医学伦理委员会批准同意[No：2020-伦理审查（KY）-29]，患者或家属均签署知情同意书。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准①ICH 组患者符合ICH 诊断标准[6]，并经头颅CT 确诊；②发病至入院时间＜12 h；③年龄≥18 岁。

1.2.2 排除标准①继发于创伤的ICH；②48 h转科、转院或出院者；③重要脏器功能严重障碍或衰竭者；④颅内肿瘤或合并其他恶性肿瘤者；⑤脑血管异常者；⑥颅内静脉窦血栓形成或凝血功能异常者；⑦合并血液系统疾病者；⑧缺血性脑卒中出血性转换者。

1.3 逆转录聚合酶链反应检测血清miR-130a、miR-210

入院当天（对照组于体检当天）用抗凝采血管（抗凝剂乙二胺四乙酸-2k）采集所有研究对象外周静脉血5 mL，3 500 r/min 离心5 min，取血清-20℃保存待测。采用miRNA 提取试剂盒（杭州诺扬生物技术有限公司）提取血浆miRNA，并检测miRNA 的质量和浓度，将miRNAs 逆转录为cDNA。总反应体系：2×SYBR Mix 10 μL，10×cDNA 模板1 μL，正反向引物各1 μL，H20 8 μL。反应条件：95℃预变性3 min，95℃变性10 s、60℃退火32 s，75℃延伸2 min，共36 个循环，72℃继续延伸8 min。在逆转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR）仪（型号：ABI7500，美国应用生物系统公司）上进行反应，以U6 作为内参，采用2-ΔΔCt法计算基因相对定量。

表1 RT-PCR引物序列

1.4 END判定及分组

END 判定标准[7]：ICH 患者入院1 h 内采用美国国立卫生研究院卒中量表（National Institutes of Health Stroke Scale Score, NIHSS）评分对其神经功能缺损情况进行评分，患者入院3 d 内进行多次NIHSS复评（均由同一位神经内科专家完成），若24 h 内NIHSS 总分增加≥2 分或运动功能评分增加≥1 分则判定为END，并依据ICH 患者是否发生END 分为END 组和非END 组。

1.5 资料收集

收集影响ICH 患者END 发生的临床资料，主要包括括性别、年龄、体质量指数（body mass index,BMI）、是否合并基础疾病（糖尿病、高血压、高脂血症、冠心病）、吸烟史、饮酒史、入院收缩压（systolic blood pressure, SBP）、入院舒张压（diastolic blood pressure, DBP）、脑卒中史、入院格拉斯哥昏迷评分（Glasgow coma score,GCS）[8]、入院NIHSS 评分[9]、是否为脑萎缩、血肿体积、血肿是否破入脑室、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、纤维蛋白原、血清miR-130a、miR-210。

1.6 统计学方法

数据分析采用SPSS 25.0 统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；计数资料以构成比或率（%）表示，比较用χ2检验。绘制受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线；影响因素的分析用一般多因素Logistic 回归模型。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ICH组与对照组的临床资料

ICH 组与对照组性别、年龄、BMI 比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。两组血清miR-130a、miR-210 比较，差异有统计学意义（P＜0.05），ICH 组血清miR-130a、miR-210 高于对照组。见表2。

表2 ICH组与对照组临床资料比较

2.2 END组与非END组患者的临床资料

本研究中ICH患者END发生率为20.73%（17/82）。两组患者入院SBP、入院GCS 评分、入院NIHSS评分、血肿体积、血肿破入脑室占比、miR-130a、miR-210 比较，差异有统计学意义（P＜0.05），END 组入院SBP、入院NIHSS评分、血肿破入脑室占比、miR-130a、miR-210 高于非END 组，入院血肿体积大于入院非END 组，GCS评分低于非END 组。两组患者性别、年龄、BMI、是否合并基础疾病（糖尿病、高血压、高脂血症、冠心病）、吸烟史、饮酒史、入院DBP、脑卒中史、是否脑萎缩、白细胞计数、血小板计数、血红蛋白、纤维蛋白原比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。见表3。

表3 END组与非END组患者临床资料比较

2.3 影响ICH患者发生END的多因素分析

以入院SBP、入院GCS 评分、入院NIHSS 评分、血肿体积、miR-130a、miR-210（均为连续变量）、血肿破入脑室（否=0，是=1）为自变量，ICH 患者是否发生END 为因变量（发生=1，未发生=0），进行一般多因素Logistic 回归分析，结果显示：血肿体积[=2.846（95%CI：1.253，6.784）]、血肿破入脑室[=2.787（95%CI：1.877，5.862）]、miR-130a [=3.347（95% CI：2.475，8.275）]及miR-210[=3.086（95%CI：2.051，7.436）]为ICH患者发生END的影响因素（P＜0.05）。见表4。

表4 ICH患者发生END的一般多因素Logistic回归分析参数

2.4 血清miR-130a、miR-210 对ICH 患者发生END的预测效能

ROC 曲线结果显示，血清miR-130a、miR-210 预测ICH 患者发生END 的最佳截断值分别为3.65、1.57，敏感性分别为82.35%（95% CI：0.768，0.894）、76.47%（95%CI：0.702，0.815）；特异性分别为80.00%（95% CI：0.753，0.836）、86.15%（95% CI：0.808，0.925），曲线下面积（area under curve, AUC）分别为0.824（95% CI：0.724，0.899）、0.868（95% CI：0.776，0.933）。见表5和图1。

图1 血清miR-130a、miR-210预测ICH患者发生END的ROC曲线

表5 血清miR-130a、miR-210预测ICH患者发生END的相关参数

3 讨论

ICH 是由环境、遗传等多种因素引起的一种脑实质内出血，发病突然，进展迅速[10]。有研究表明，部分ICH 患者即使积极治疗，但神经功能仍持续恶化，最终导致END 的发生，严重影响患者预后[11]。相关研究报道，血清miR-130a、miR-210 表达与神经系统疾病发生、发展关系密切[12-13]。

miRNA 为单链、内源性、非编码RNA，广泛参与细胞增殖、分化等病理过程，既往对miRNA 的研究多集中在肿瘤学领域。近年来，有研究发现miRNA与神经系统发育及功能密切相关，多种miRNA 参与脑血管疾病的发病及进展[14-16]。董雨等[17]研究报道，miR-340-5p 能够通过抑制水通道蛋白的表达，扩大局部脑水肿体积，其表达水平与高血压性脑出血患者预后有关。

本研究结果提示，与健康者比较，ICH 患者血清miR-130a、miR-210 高表达。有研究报道，颅脑损伤患者外周血miR-130a 高表达，且与血肿周边水肿体积呈正相关，并指出miR-130a 可通过小凹蛋白-1/基质金属蛋白-2 通路影响血脑屏障的通透性[18]。miR-210 为缺氧特异性miRNA，被认为是缺氧相关性miRNA 的重要因子之一。WANG 等[19]研究表明，在体外缺氧环境下，miR-210 可通过抑制靶基因EphrinA3，促进血管内皮细胞形成血管。本研究中ICH 患者END 发生率为20.73%，稍高于既往孙婷婷等[20]报道的15.45%，可能与研究对象的年龄、合并基础疾病存在一定的差异有关。本研究中，END 组入院SBP、入院NIHSS 评分、血肿破入脑室占比、miR-130a、miR-210 高于非END 组，入院血肿体积大于入院非END 组，入院GCS 评分低于非END 组；一般多因素Logistic 分析结果显示，血肿体积、血肿破入脑室、miR-130a 及miR-210 是ICH 患者发生END的影响因素，临床上需逐一控制以上因素对ICH 患者的影响，以降低END 的发生率。血肿体积较大可能会导致缺血再灌注损伤，从而促使ICH 患者发生END[21]。血肿破入脑室可能会加重颅内压力，此外血流刺激脑室系统上皮细胞产生的炎症反应，以及对下丘脑的冲击均可导致意识状况变差，从而增加END 的发生风险[22]。miR-130a 可能参与急性脑出血患者早期病情变化，通过抑制其表达可有效改善血脑屏障通透性，降低脑组织水肿程度，改善预后[23]。miR-210 被证实在体外缺氧环境下，其表达稳定上调，可促进血管生成，并通过多种途径参与心血管疾病的发生、发展过程[24]。胡兆婷等[25]研究表明，血清miR-210 表达水平与急性脑梗死患者早期神经功能改善相关，其表达水平越高，越不利于早期神经功能改善。ROC 曲线结果显示，血清miR-130a、miR-210 预测ICH 患者发生END 的最佳截断值分别为3.65、1.57，敏感性分别为82.35%、76.47%；特异性分别为80.00%、86.15%，AUC 分别为0.824、0.868，提示血清miR-130a、miR-210 对ICH 患者发生END 的预测效能较高，可作为评估ICH 患者发生END 的重要参考指标。

综上所述，血清miR-130a、miR-210 在ICH 患者中高表达，可影响END 的发生，可作为评估ICH 患者发生END 的重要参考指标。建议入院时检测ICH患者血清miR-130a、miR-210，若表达水平异常偏高，需及时采取有效措施进行调控，以降低END 的发生率。本研究存在的不足之处在于为单中心小样本研究，可能存在一定偏差；此外，血清miR-130a、miR-210 参与END 发生的具体生物学机制尚未明确，有待进一步研究证实。