羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒试验

张莉敏，常攀峰，党 岩，张述斌，马志宏

（甘肃省畜牧兽医研究所，甘肃 平凉 744000）

羊接触传染性脓疱性皮炎俗称羊口疮（ORF），又称羊传染性脓疱（contagious ecthyma,CE）或羊传染性脓疱性皮炎（contagious pustular dermatitis,CPD），是一种由羊接触传染性脓疱性皮炎病毒引起的急性接触性传染病，患羊在口腔黏膜、唇侧唇部、面部、腿部和乳房部的皮肤形成丘疹、脓疱、溃疡及结痂，影响采食、哺乳及运动，导致患羊身体衰弱，继发感染其他疾病而死亡[1]。我国养羊的地区均有该病流行。甘肃省畜牧兽医研究所从20世纪80年代开始经多年研究，从多株羊传染性脓疱病毒中选育出毒力强、免疫原性好的HCE毒株，在犊牛睾丸细胞上连续继代致弱，培育出免疫原性较好的弱毒株，在此基础上研究出的细胞弱毒冻干疫苗免疫保护率达75%以上，免疫期3个月[2]。交互免疫试验证明对甘肃、青海、新疆、内蒙古、湖北、广州、云南等10多个地区绵山羊传染性脓疱病毒的攻击均有良好的保护作用。该疫苗于1989年通过专家验收鉴定，获甘肃省科学技术进步奖三等奖，原农业部生物制品规程委员会审议通过了《羊传染性脓疱皮炎活疫苗的制造及检验规程》，原农业部颁发了《新兽药证书》，产品在原兰州生物药品厂进行中试生产，推广应用于甘肃、陕西、湖北、内蒙古等地。该疫苗采用口唇划痕法接种，方法简单、易掌握，对发病羊群免疫可控制该病流行，对潜伏期羊只免疫可使发病症状减轻，特别对1月龄左右的羔羊和育成羊具有良好的保护作用。

该病免疫学的特殊性及日益广泛的世界贸易活动，导致我国原在西北地区已经控制的ORF，近年来在全国普遍流行，特别是山东、天津、北京和江苏等地流行严重，给我国养羊业造成了巨大的经济损失[3]。在这样的情况下，甘肃省畜牧兽医研究所与山东华宏生物工程有限公司合作，进行羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗研制，以求尽快将羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗应用于生产中。本文就羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒苗的免疫攻毒试验报告如下。

1 试验材料

1.1 种毒

试验用的ORF种毒来源于甘肃省畜牧兽医研究所动物医学研究室种毒试验室。

1.2 动物与疫苗

试验羊为甘肃省平凉市崆峒区某羊场的健康羔羊。羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗由山东华宏生物工程有限公司和甘肃省畜牧兽医研究所协作生产。

1.3 场所与仪器设备

试验场所设在甘肃省畜牧兽医研究所动物房。仪器设备由甘肃省畜牧兽医研究所提供。

1.4 药品与试剂

NaCl、CaCl2、KCl、MgSO4、Na2HPO4、KH2PO4、葡萄糖、酚红、NaHCO3等购自生工生物工程（上海）股份有限公司。Hanks原液及应用液、1%酚红、7.5% NaHCO3等按常规配制。

2 试验方法

2.1 羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒预试验

选择6月龄左右的健康绵羊25只，随机分为5组，每组5只。每组羔羊分别用10 mg/ml、10 mg/ml×3.2-1、10 mg/ml×3.2-2、10 mg/ml×3.2-3、10 mg/ml×3.2-4的HCE强毒进行口腔下唇黏膜划痕攻毒0.2 ml，观察8 d并记录试验结果。

2.2 羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒试验

选择6月龄左右的健康绵羊16只，随机分成3个试验组和1个对照组共4组，每组4只。3个试验组分别以正常剂量疫苗组、5倍稀释疫苗组和25倍稀释疫苗组进行口腔黏膜划痕接种0.2 ml，观察21 d[4]。试验组羊免疫试验21 d后，对试验组和对照组羊只用100 ID80HCE强毒口腔黏膜划痕攻击，观察10 d并记录试验结果[5]。

3 结果与讨论

3.1 羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒预试验结果

由表1可知，ID100为第四组，ID60为第五组。根据《兽药质量标准》（2017年版）和免疫学原理，选择100 ID60/0.2 ml为攻毒剂量[6]。

表1 免疫攻毒预试验效果

3.2 羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒试验结果

由表2可知，相对于对照组而言，3个试验组均对羊体有不同程度的保护作用，正常剂量疫苗组对羊体的保护作用达到100%，故这批ORF弱毒疫苗达到了《兽药质量标准》中的规定。

表2 疫苗的免疫攻毒试验测定结果

3.3 讨论

羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗的免疫攻毒试验是ORF疫苗生产过程中疫苗成品效价测定的重要组成部分，也是控制疫苗生产质量的重要手段之一[7]。羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗成品的免疫攻毒试验的准确性是决定疫苗质量的重要因素。由于羊接触传染性脓疱性皮炎的局部细胞免疫学的特点（大部分动物疾病以体液免疫为主，但有的疾病以细胞免疫为主，即以体内产生的细胞介质抗病，ORF是以细胞免疫为主的疾病，且仅感染动物皮肤黏膜，故具局部细胞免疫学的特点），羊接触传染性脓疱性皮炎弱毒疫苗免疫过程中，免疫羊的血清抗体不易检测，所以免疫攻毒试验是检验疫苗免疫原理的可靠手段[8]。本试验选择100 ID60/0.2 ml为攻毒剂量，使免疫攻毒试验的结果更加可靠。考虑到动物免疫攻毒试验的个体差异对试验结果的影响比较大，故在本试验中增加了2个试验组，提高了免疫攻毒试验结果的可靠性。