Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主动脉瘤中的表达及意义*

林志强, 王丹

绍兴市人民医院 1血管疝外科， 2感染外科(浙江绍兴 312000)

腹主动脉瘤主要表现为腹主动脉管壁局限性，严重情况下破裂致大出血，对患者的生命造威胁[1]。有研究表明[2]，腹主动脉瘤在所有动脉瘤中的发病率位居第1位。随着我国居民生活水平的提高，人口老龄化加剧，腹主动脉瘤的发病率逐年上升[3]。目前临床中缺少安全有效的腹主动脉瘤的预测手段[4]。Fibulin-3是一种细胞外基质蛋白，广泛表达于动脉血管系统在内的各种组织中，Fibulin-3参与基底膜的组织和弹性纤维的形成，参与基质蛋白的相互作用，调节细胞增殖和迁移，此外，Fibulin-3会刺激血管生成并且参与各种细胞内信号传导[5]。骨桥蛋白(osteopontin，OPN)被认为是合成性感染诱导血管平滑肌细胞(infection-induced vascular smooth muscle cells，VSMC)的标志物，在腹主动脉瘤中的表达明显升高，提示在腹主动脉瘤中VSMC主要为和成型，而在正常的腹主动脉壁中VSMC主要为收缩型VSMC的表型会在腹主动脉瘤中发生明显转化[6]。ICAM-1是一种黏附分子，免疫蛋白家族的重要成员之一，在促进炎症粘连、肿瘤恶化转移及机体免疫调节中有着重要作用。其通过结合特异性受体，能够增强炎症细胞及肿瘤细胞等于内细胞之间的黏附，激活内细胞，使其更易穿透到内皮[7-8]。本文旨在探讨Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主动脉瘤中的表达及意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2020年2月至2021年2月在我院就诊的50例腹主动脉瘤患者为AAA组，年龄46～70岁，病程2～7(5.23±2.34)年，体质指数(BMI) 24～29 kg/m2，吸烟35例，饮酒26例，合并疾病：高血压4例，糖尿病6例，慢性阻塞性肺疾病3例，慢性肾脏病5例。选取同时期在我院体检的健康人群50例为对照组，年龄40～75岁，BMI 24～29 kg/m2。两组一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。

表1 基线资料比较

纳入标准：符合腹主动脉瘤诊断与治疗指南[9]诊断标准：无腹主动脉瘤病史；无缺血性心脏病、脑血管疾病病史，无外周血光疾病及自身免疫性疾病；腹主动脉形态为真性动脉瘤、梭形，其直径为>3 cm；B性超声检查可见动脉瘤周围血管表现动脉硬化且多发；患者入组前未经过任何治疗；患者及其家属对本研究知情同意，签署知情同意书，经我院伦理委员会批准(ZSML-RY-2019-028-07)。

排除标准：有严重精神疾病，存在认知障碍患者；有严重感染或自身免疫疾病患者；严重心脏病或系统性炎症性疾病或肿瘤疾病患者；周围动脉出现狭窄性病变，且表现严重患者；下肢深静脉血栓形成患者；囊状动脉瘤、假性动脉瘤或感染性动脉瘤患者。

1.2 指标检测

1.2.1 Fibulin-3、OPN检测 采集患者5 mL空腹外周静脉血，经枸橼酸钠抗凝后，以3 000 r/min离心10 min，留取血清，采用酶联免疫吸附法检测血清Fibulin-3、OPN。(1)取出冻存标本，并设标准曲线的抗体标准浓度。(2)加入抗体标准液和标本100 μL至相应孔内，用封板胶纸封住反应孔，室温孵育120 min。(3)除了空白孔以外，每孔按说明书要求稀释的生物素标注的二抗100 μL，封住板孔。(4)除空白孔外，每孔加已按要求稀释的酶联物100 μL封住板孔。(5)每孔加底物A、B各50 μL避光10～30 min。(6)每孔加终止液50 μL，即刻在450 nm酶标仪测定标本的吸光度，画出标准曲线，计算出血清样本的表达水平。

1.2.2 ICAM-1检测 采用酶标仪双抗体夹心法测定ICAM-1水平，将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体，洗涤除去为结合的抗体及杂质，加ICAM-1血清，使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原体与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物，洗涤除去其他未结合物质，加酶标抗体使固相免疫符合无上的抗原与酶标抗体结合，彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有酶量与标本中受检物质的量呈正相关。夹心式复合物中酶催化会成为有色产物。根据颜色的程度进行该抗原的定性或定量。

2 结果

2.1 Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主动脉瘤中的表达 AAA组Fibulin-3水平低于对照组，OPN、ICAM-1水平高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 Fibulin-3、OPN、ICAM-1在腹主动脉瘤中的表达

2.2 Fibulin-3、OPN、ICAM-1表达水平与腹主动脉瘤患者病理特征关系 Fibulin-3、OPN、ICAM-1表达水平在腹主动脉瘤患者不同年龄(<60、≥60岁)、性别、高血压部位比较差异无统计学意义(P>0.05)。Fibulin-3、OPN、ICAM-1表达水平与腹主动脉瘤患者肿瘤最大径(>5 cm、≤5 cm)、有无吸烟饮酒、有无心脑血管意外有关比较差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 Fibulin-3、OPN、ICAM-1水平表达与腹主动脉瘤患者病理特征关系

2.3 血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1对腹主动脉瘤的预测价值 ROC曲线分析血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1预测腹主动脉瘤的曲线下面积(area under the curve，AUC)依次为0.942(95%CI：0.8899～0.9945，P=0.001)、0.616(95%CI：0.470～0.762，P=0.004)、0.868(95%CI：0.768～0.967，P=0.001)、0.869(95%CI：0.779～0.960，P=0.001),见图1。敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值见表4。

表4 血清Fibulin-3、OPN、ICAM-1诊断腹主动脉瘤的效能分析 %

图1 Fibulin-3、OPN、ICAM-1对腹主动脉瘤的预测价值(ROC曲线)

3 讨论

腹主动脉瘤是一种严重威胁生命安全的常见疾病，随着动脉瘤的逐渐扩张并最终破裂，导致患者死亡[10]。腹主动脉瘤的发病原因尚不清楚，目前认为是环境、遗传、解剖学因素、免疫炎症反应、病原微生物、平滑肌细胞凋亡共同作用的结果，其病理学基础是动脉壁弹力纤维和胶原纤维的降解与损伤[11]。随着腔内技术的进步，对于符合手术标准腹主动脉瘤的治疗不在困难，但是对于腹主动脉瘤的早期诊断和小于手术标准的动脉瘤的检测仍然是临床难点[12]。

Fibulin-3也叫EFEMP1，是一种细胞外机制糖蛋白，上皮细胞、内皮细胞等各种细胞都能分泌和表达Fibulin-3，Fibulin-3定位在细胞外基质中具有构架作用，能够活化下游信号通路，比如表皮生长因子受体。有学者研究显示，Fibulin-1和Fibulin-2相比，Fibulin-3的功能知之甚少[13]。有研究中发现[14]Fibulin-3能修复高血压损伤的内皮结构，降低Fibulin-3蛋白表达，可出现明显的血压降低，使腹主动脉管壁厚度增加，弹力纤维横径增大。Fibulin-3会在多种肿瘤中异常表达，Fibulin-3是肿瘤促进因子，也是肿瘤抑制因子，但是在腹主动脉瘤中相关研究较少[15]。有学者研究发现[16]，Fibulin-3在结肠癌和前列腺癌的组织中表达下降，与患者的诊断标志物和预测患者的生物标记物相关。但是，关于Fibulin-3是否参与腹主动脉瘤发展尚未得到论证，需要进一步研究[17]。本研究中AAA组患者血清Fibulin-3水平低于对照组，ROC分析显示Fibulin-3预测腹主动脉瘤的AUC达0.616，敏感度和特异度分别为74.32%、72.41%提示Fibulin-3表达可用于评估AAA患者风险。

OPN是一种富含唾液酸的分泌型磷酸化糖蛋白，依分子中的磷酸化及糖基化程度而定[18]。OPN最早是从骨基质中分离出来而得名，随后发现许多组织如肾、内耳等以及许多病理性组织如炎症、肿瘤活化的免疫细胞等均有不同程度的OPN表达[19]。有学者研究发现[20]，OPN通过抵消凋亡及促血管生成的方式发挥促肿瘤生长作用，大多数的实验证明OPN参与恶性肿瘤细胞的侵袭转移，把OPN基因称为转移基因。有学者研究发现[21]，恶性肿瘤细胞的侵袭迁移与淋巴细胞的归巢机制相似，介导机体应激、炎症、创伤口愈合及心血管分布的调控，而非机体生长发育过程所必需的基因所调控。本研究显示OPN在预测腹主动脉瘤发病风险方面表现出较高的效能，说明OPN表达升高是腹主动脉瘤发病风险的预测因子。

ICAM-1是由人的第19对染色体编码的单链糖蛋白。由于在特定组织中糖计划程度不同，分子量介于70～120 kD之间，有5个结构[22]。有学者研究发现[23]，它在肿瘤细胞和基质细胞中主要表达是纤维细胞，可以弥散在细胞浆中或集中分布的变化改变其亚细胞的分布。有学者研究中发现[24]，ICAM-1黏附途径是细胞间相互作用和传达信息的一个关键途径，共同参与免疫、炎症及肿瘤转移一系列重要生理和病理过程。但是，关于ICAM-1是否参与腹主动脉瘤发展尚未得到论证，需要进一步研究[25]。本研究显示血清ICAM-1在预测腹主动脉瘤发病风险方面表现出较高的效能，说明ICAM-1水平表达升高是腹主动脉瘤发病风险的预测因子。ROC分析显示ICAM-1预测腹主动脉瘤的AUC达0.868，敏感度和特异度分别为80.11%、66.23%提示ICAM-1是腹主动脉瘤病变的警示指标。

综上所述，腹主动脉瘤患者Fibulin-3水平降低OPN、ICAM-1水平升高，低水平Fibulin-3与高水平OPN、ICAM-1与腹主动脉瘤高度相关，是预测发生腹主动脉瘤的风险预测因子。

利益相关声明：所有作者均声明不存在任何利益冲突。

作者贡献说明：林志强、王丹：设计研究方案，实施研究过程，论文撰写，提出研究思路，分析试验数据，论文审核；林志强：资料搜集整理，论文修改，进行统计学分析。