老年非小细胞肺癌表皮生长因子受体突变的影响因素与分子靶向治疗的效果研究

瞿明奎 姜赛赛 陈裕民

438000 黄州区人民医院呼吸科，湖北黄冈

非小细胞肺癌(NSCLC)是临床常见的恶性肿瘤疾病，类型主要包括大细胞癌、鳞状细胞癌及腺癌等。相对于小细胞肺癌，NSCLC 的生长分裂速度较缓慢，扩散时间也偏晚。临床肺癌患者中约80%为NSCLC，因肺癌早期无典型临床症状，患者到院就诊时多已进入了中晚期阶段，错过手术治疗最佳时机，5年生存率较低，严重影响患者的生命健康和正常生活[1]。近年来，随着放疗及化疗技术的不断发展，根据驱动基因选择靶向治疗方案已成为临床研究的热点。研究表明，有40%～80%的NSCLC 患者中表皮生长因子受体(EGFR)呈高表达状态，EGFR 及其天然配体在NSCLC 启动和发展过程中发挥重要作用[2]。本研究旨在探讨老年NSCLC患者EGFR突变的影响因素与分子靶向治疗的效果，现报告如下。

资料与方法

选取2017年1月-2019年6月在黄州区人民医院经病理检查确诊为NSCLC的268例老年患者作为研究对象。其中男142 例，女126 例；年龄65～84 岁，平均(74.16±3.23)岁；吸烟者112 例，不吸烟者156 例；病理类型：腺癌144例，鳞癌78例，其他(大细胞癌、腺鳞癌、肺泡癌)46 例；肿瘤T 分期：T1～T2期108例，T3～T4期160例。

纳入标准：①患者经病理诊断确诊为NSCLC；②初始治疗的NSCLC患者；③心电图、血常规、肝肾功能等各项检查结果正常者；④患者自愿参与本研究，有良好的依从性，可接受定期随访；⑤患者预期生存期＞3个月。

排除标准：①以WHO 关于化疗药物相关毒性反应分级为准，患者存在严重(3级、4级)不良反应，难以耐受选择退出研究；②研究中途失访者；③临床资料缺失者；④存在认知障碍、精神疾病或沟通障碍者；⑤处于妊娠期的女性。

方法：①EGFR 突变检测：a.DNA 提取：患者组织蜡块连续切片5～10 张，经4%中性甲醛固定，进行HE 染色与组织学分型，筛选出肿瘤成分≥70%的肿瘤组织蜡块，置于1.5 mL 的EP 管内，应用蛋白酶将石蜡融化，采用石蜡包埋组织的DNA 抽提试剂盒，按照试剂盒操作说明提取、纯化石蜡组织DNA。提取样本基因组DNA，采用分光光度仪进行产物浓度及纯度检测，A260/A280=1.8±0.2，A260/A230≥1.7。将DNA 最终浓度稀释至2 mg/L，-20℃下保存，待测。b.EGFR 突变基因检测：采用优化寡核苷酸探针法对EGFR 基因进行检测，设计EGFR 基因探针，通过荧光定量PCR 平台探针水荧光，判定基因突变状态，采用人EGFR 基因突变定性检测试剂盒(生产厂家：北京博奥龙免疫技术有限公司)，根据试剂盒操作说明对EGFR 基 因19-del、 G719A、 L858R、G719C、G719X、T790M、L861Q、S768I、20-ins 外显子突变进行检测，每次反应设立阴性及阳性对照，利用荧光定量PCR 仪根据反应孔扩增曲线记录结果。c.DNA测序：对肿瘤组织标本DNA，应用巢式聚合酶链式反应(PCR)法扩增EGFR 基因外显子，采用水平式琼脂糖凝胶电泳法检测PCR 产物，纯化PCR 产物用Big Dye v3.1 试剂盒(生产厂家：北京博奥龙免疫技术有限公司)进行测序PCR 扩增，纯化产物用ABI 3500xl 试剂盒(生产厂家：北京博奥龙免疫技术有限公司)进行测序分析，标本均进行双向测序检测。②酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKIs)治疗：入组患者均给予厄洛替尼(生产厂家：上海罗氏制药有限公司；批准文号：国药准字H20170143)口服治疗，150 mg/次，1 次/d。或给予埃克替尼(生产厂家：浙江贝达药业有限公司；批准文号：国药准字H20110061)治疗，125 mg/次，3 次/d，连续服用至出现不可耐受的不良反应。

观察指标：①观察NSCLC患者EGFR基因突变情况。②分析影响NSCLC患者EGFR基因突变的相关因素。③根据WHO 实体瘤疗效评价标准评价两组治疗效果，比较两组疾病控制率(DCR)[3]。

统计学方法：数据均用SPSS 22.0 统计学软件予以处理；计数资料以[n(%)]表示，比较采用χ2检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

NSCLC 患者EGFR 基因突变情况：纳入的268 例NSCLC 患者中，EGFR 基因突变阳性136 例，突变率为50.75%，其中19del 突变66 例(48.53%)，L858R 突变54(39.71%)例，G719X 突变6 例(4.41%)，20-ins 突变4 例(2.94%)，19del 和L858R双突变2 例(1.47%)，19del 和T790M双突变2 例(1.47%)，L858R 和T790M双突变2例(1.47%)。

影响NSCLC患者EGFR基因突变的相关因素：年龄＞70岁与≤70岁患者的突变率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)；女性患者突变率高于男性，无吸烟史患者突变率高于有吸烟史患者，腺癌患者突变率高于黏液腺癌及其他类型NSCLC 患者，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 影响NSCLC患者EGFR基因突变的相关因素[n(%)]

EGFR 基因突变阳性、阴性患者疗效比较：EGFR 基因突变阳性患者的DCR 高于EGFR 基因突变阴性患者，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表2 EGFR基因突变阳性、阴性患者疗效比较[n(%)]

讨 论

NSCLC 是临床发病率较高的恶性肿瘤疾病，也是导致患者死亡的主要原因，危及患者生命安全。NSCLC 的诱因较多，较为典型的有遗传、辐射、吸烟以及职业接触等，早期阶段患者主要表现为胸部轻微的闷痛或隐痛，并无典型临床症状，因此，极易被患者忽视。大部分患者到院确诊时已进入中晚期，主要表现为体重异常下降、容易疲乏等，部分合并呼吸障碍、咯血等局部症状[4]。准确的临床检测及诊断是保障NSCLC 患者治疗效果的关键，临床应根据相关检测结果制定对应的治疗措施，以控制患者病情恶化，延长生存期，提高生活质量[5]。

EGFR基因突变是NSCLC中第一代驱动基因，表现为一个或一段碱基缺失，插入及碱基替换的错义突变，主要集中在第19号外显子缺失和第21号外显子L858R突变为主，约占EGFR 基因总突变率的85%～91%，EGFR 基因突变可引起EGFR 酪氨酸激酶活性增强。本研究结果显示，NSCLC 患者EGFR 基因突变率为50.75%，女性、无吸烟史及腺癌患者突变率高，与相关研究结果一致[6-7]。

EGFR-TKIs 是目前治疗晚期NSCLC 的有效方法，其治疗效果突出，且安全性高。在晚期NSCLC 患者中，肿瘤样本的可获得性较差，且EGFR 基因突变的NSCLC 患者对EGFR-TKIs 会产生耐药性。本研究结果显示，接受EGFR-TKIs 治疗后，EGFR 基因突变阳性患者DCR(90.44%)高于EGFR 基因突变阴性患者(59.09%)，说明EGFR-TKIs 靶向治疗EGFR 基因突变患者的有效率更高。

综上所述，NSCLC 患者EGFR 基因突变率较高，以女性、无吸烟史和腺癌患者多见，EGFR 基因突变阳性患者应用EGFR-TKIs治疗的效果更好。