加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠行为学及中枢单胺类神经递质的影响*

刘晓敏，唐 彬，伊丽娥，马端鑫，林亚明

(1.云南省中医医院，云南 昆明 650021；2.云南中医药大学，云南 昆明 650500)

抑郁障碍是最常见的精神障碍之一，该病严重危害人类健康。根据WHO全球疾病负担的研究，抑郁障碍占非感染性疾病所致失能的比重为10%[1]。以情绪低落、兴趣缺乏以及乐趣丧失为核心症状[2]。目前研究认为单胺类神经递质其浓度降低可导致情绪抑郁、行为绝望、精神不振等临床表现，导致抑郁障碍，而调节单胺类神经递质浓度能有效缓解症状[3]，减轻抑郁障碍的症状[4]。笔者在前期的临床研究中[5-6]，加味丹栀逍遥散临床疗效确切，为进一步研究加味丹栀逍遥散的药理机制。本次研究加味丹栀逍遥散对下丘脑、垂体单胺类神经递质的影响，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 仪器 立柱体敞箱，离心机：离心机(国产湘仪CTK150R)，美国产EPOCH酶标仪，国产新芝(GH-30)恒温箱。

1.1.2 药品与试剂 盐酸氟西汀胶囊(规格：20 mg)礼来苏州制药有限公司提供(批号：9824A)；加味丹栀逍遥散为云南省名中医林亚明教授经验方(方药组成由丹皮，栀子，黄连，柴胡，川芎，白芍，当归，茯神，炙甘草，茯苓，白术，干姜，薄荷，香附，佛手，合欢皮，夜交藤适量组成(云南省中医医院中药房提供)；大鼠DA ELISA 试剂盒(批号：MB-1896B)、大鼠NE ELISA试剂盒(批号：MB-2097B)、大鼠5-HT ELISA 试剂盒(批号：MB-1983B)，由江苏酶标生物科技有限公司提供。

1.1.3 动物 健康SD大鼠50只，♂，SPF 级，体重180～200 g，购自成都达硕实验动物有限公司[生产许可证号：SYXK(滇)K2013-007]。购入后适应性饲养7d后进行实验。饲养条件为室温为(22±1)℃、相对湿度为65%～70%、光照周期为12 h/12 h。

1.2 方法

1.2.1 实验动物分组与给药 将实验动物适应性喂养1周后，按体重随机分为空白组、模型组、加味丹栀逍遥散组、氟西汀组，在同样的环境中饲养；每组各10只。

1.2.2 抑郁大鼠模型的制备 适应性饲养1周后，除空白组外，其他各组大鼠每天给予1种应激因子刺激，以构建抑郁症模型。应激因子包括：倾斜鼠笼、禁食、潮湿垫料、限制行动、昼夜颠倒、禁水、强迫游泳、摇晃鼠笼、夹尾。

1.2.3 给药 空白对照组： 不给予任何刺激，每日正常进水、进食，与模型组同一时间灌注生理盐水。每日1次，连续21 d。模型组：每天灌注给药容积为1 mL/100 g的等量生理盐水，30 min后随机给予一种应激因子刺激。每日1次，连续21 d。加味丹栀逍遥散组：剂量换算，每天灌服加味丹栀逍遥散水煎液1.2 mL/100 g，30 min后随机给予1种应激因子刺激，每日1次，连续21 d。氟西汀组：每天灌服0.154 mg/mL的氟西汀悬浮液(1 mL/100 g)，30 min后随机接受一种的应激因子，持续21 d。

1.2.4 观察指标

1.2.4.1 观察各组大鼠的一般状态 于造模第1 d及第21 d分别对实验动物进行一般状态监测，包括精神状态、进食、体重等。

1.2.4.2 旷场实验(Open-field test) 于实验开始前1 d和第22 d各进行一次旷场实验。安静环境下，将大鼠置于旷场箱中，箱体墙壁、底面划分成面积相等的25块方格。观察3 min内大鼠活动，以动物穿越底面块数为水平活动得分，以直立次数为垂直活动得分。

1.2.4.3 大鼠悬尾实验 实验开始前1 d和第22 d各进行一次大鼠悬尾实验，将大鼠呈倒挂状态，尾端(1 cm)固定于水平木板上，悬挂物两侧使用木板遮挡动物视线。实验中，大鼠为克服不适体位而挣扎活动，一定时间后，大鼠可出现间断性“不动”，显示处于“失望”状态，计算大鼠不动的时间(MT)，并观察大鼠挣扎幅度。

1.2.4.4 糖水消耗试验 在安静房间内，先训练大鼠适应含糖饮水，先将大鼠饮用1%浓度的蔗糖水，每笼放置2个水瓶，在第一个24 h里，两瓶均装1%蔗糖水。在随后的头24 h，一瓶装1%蔗糖水，另一瓶装纯水。适应性训练完成后，禁水断食24 h后，再进行大鼠的基础糖水/纯水消耗试验，给予每只大鼠等量的1瓶l%蔗糖水以及1瓶纯水。60 min后，取两瓶水定量测定计算大鼠的糖水偏爱百分比(糖水偏爱%=糖水消耗量/总液体消耗量×100%)。于实验开始前开始前1 d、第22 d进行一次糖水消耗试验。

1.2.5 取材 实验结束后，大鼠立即快速断头处死，在冰盘上迅速分离大鼠大脑，分离出下丘脑和垂体组织，称重后置EpPendorf管中，保存于-80℃待测。

1.2.6 指标检测 取组织100 mg放入组织研磨器加入，制成匀浆。冻融2次，将组织匀浆，离心5分钟取上清。取适量上清液用酶标仪在450 nm 波长下测定。吸光度(OD值)，计算样本浓度。用样本稀释液将样本1∶400倍稀释。从试剂盒中取出标准品，于6000～10000 rpm离心30 s。用1 mL样本稀释液溶解，充分混匀得到标准品，放置备用。样本用样本稀释液进行1∶400倍稀释后根据试剂说明书操作，制作标准曲线，测得样本的实际浓度。

1.2.7 统计学方法 所得数据均以均数±标准差表示，采用SPSS18.0统计软件分析数据，采用单因素方差分析，不同组差异采用多因素方差分析法比较，以双侧P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 模型大鼠体重变化观察结果 见表1。

表1 各组大鼠体体重测定结果

2.2 糖水消耗试验 见表2。

表2 大鼠糖水摄入变化比较

2.3 旷场实验 见表3。

表3 各组大鼠旷场变化比较

2.4 鼠尾悬挂实验 见表4。

表4 各组大鼠鼠尾悬挂实验比较

2.5 对下丘脑DA、5-HT、NE含量的影响 见表5。

表5 各组大鼠下丘脑DA、5-HT、NE含量测定结果

2.6 对垂体DA、5-HT、NE含量的影响 见表6。

表6 各组大鼠垂体DA、5-HT、NE含量测定结果

3 讨论

中医学并无“抑郁障碍”、“焦虑状态”病名，依据其临床症状表现特点，应属中医“郁病”范畴，中医认为郁病是多因情志不畅、精神刺激致使忧思气结，气机不畅，久之化热生火，扰动心神失常而产生的疾病。

有研究表明[7-8]，单胺类神经递质参与到抑郁障碍发病的病理生理过程之中。5-HT和DA均属于兴奋性神经递质，参与到中枢神经系统多项活动中，5-HT、DA等神经递质浓度的变化与抑郁障碍的发病可能有关[9-10]。中枢神经递质5-HT功能低下是抑郁障碍发病重要的神经生物学标志，可出现情绪低落、食欲降低、睡眠障碍、运动功能抑制等表现[11-12]。多巴胺(DA)与人的情绪、快感、运动功能有关。其既是NE的前体，又是独立的神经递质。有研究[13]检测了抑郁障碍患者脑脊液中DA的代谢产物，发现其含量较健康人群减少。有临床研究[14]认为通过增加中枢DA的浓度，可有效缓解抑郁障碍的临床症状，而减少脑内DA的浓度，则可出现抑郁患病率和复发率升高。现在，阻断5-HT、NE重吸收和代谢的药物已被广泛地用于治疗抑郁障碍[15]。近年来新出现的治疗抑郁障碍药物，包括选择性5-HT再摄取抑制剂以及5-HT和NE重吸收抑制剂等[16-17]，这些都基于影响单胺类神经递质的代谢而起到治疗作用[18-19]。下丘脑是单胺类神经递质的主要来源，也是大脑情感反应的高级中枢，为此选择下丘脑作为本研究的对象。目前，选择性5-HT再摄取抑制剂为临床治疗抑郁障碍的常用药物，该类药物的主要药理作用是选择性抑制中枢神经系统突触前膜5-HT的再摄取[20]，达到增加突触间隙内5-HT含量，实现抗抑郁的治疗作用；盐酸氟西汀是临床上常用的5-HT再摄取抑制剂，故本次研究使用盐酸氟西汀作为阳性对照药物。

研究中，造模初期，实验大鼠即出现打斗、撕咬、尖叫等情绪过激行为。随着造模时间的推移，实验动物糖水偏爱度显著下降、自主活动明显减少、活动量减少、摄食行为降低、及体重增长缓慢等行为学改变，旷场实验中的水平运动和垂直运动可作为反应动物对陌生环境的探究行为与好奇程度的指标，得分越高，提示其自主活动能力越强。实验中，抑郁模型组动物在水平运动及垂直运动均有减少趋势，以上表明，实验动物出现摄食兴趣消失，运动能力下降，这与临床抑郁障碍表现的快感缺乏、兴趣丧失等症状相一致，提示模型复制成功。

经药物干预后，模型大鼠活动较前增加，食、水摄入量逐渐增加，反应较前灵敏。偶有斗打、撕咬等行为，表明药物治疗具有疗效。加味丹栀逍遥散组大鼠体重增加接近空白对照组模型大鼠的体重增长量，可认为加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠体重起干预调节作用。旷场实验中，模型组大鼠的水平及垂直运动减少，说明模型大鼠在心理上已经处于绝望和行为退缩状态，自主活动能力和探究欲望明显降低。氟西汀和加味丹栀逍遥散可提高抑郁模型大鼠的旷场实验运动时长，说明加味丹栀逍遥散对应激状态的抑郁情绪具有预防或治疗作用。经治疗后，与模型组比较，氟西汀与加味丹栀逍遥散均可提高大鼠中枢下丘脑及垂体中单胺类神经递质5-HT、DA的含量。推测加味丹栀逍遥散治疗作用可能与影响下丘脑、垂体5-HT、DA等单胺类神经递质代谢有关。

综上所述，加味丹栀逍遥散能提高大鼠中枢下丘脑及垂体中单胺类神经递质5-HT、DA的含量，从而能增加大鼠的快感程度和兴趣程度，而起到治疗抑郁障碍(郁病)的作用。但其具体作用的详细机制还有待进一步深入研究揭示。