离子色谱法测定乙基纤维素中氯离子的不确定度评定

顾晓风，顾倩，于杰

（1.苏州市药品检验检测研究中心，江苏苏州 215104； 2.青岛海洋科学与技术试点国家实验室，山东青岛 266200）

乙基纤维素作为药用辅料从2000 年版开始载入《中国药典》，具有良好的成膜性和水不溶性，是制备药物缓控释制剂最重要的辅料之一[1-2]。药用辅料是制剂的重要组成部分，同药物活性成分一同全程参与体内的吸收、分布、代谢、排泄过程，所以药用辅料的安全性直接影药物制剂的安全性[3-4]。由辅料引起的临床不良反应时有报道[5]，辅料对药品安全性的影响越来越引起药品监管部门的重视。从2010 年版开始，《中国药典》更是从定义上就特别强调了对辅料的安全性评估。

氯离子作为乙基纤维素的安全性指标之一，《中国药典》2020 年版[6]采用比浊法来评价其残留控制水平，无法得到氯离子含量的具体数值。为得到准确可靠的量化数据，以提高对乙基纤维素及药物制剂的安全性控制，笔者参考文献[7-9]，用离子色谱法测定药用辅料乙基纤维素中氯离子含量，并根据JJF 1059.1—2012 《测量不确定度评定与表示》[10]和CNAS GL006—2019 《化学分析中不确定度的评估指南》[11]，结合文献[12-15]对测定方法进行测量不确定度评定，分析不确定度的来源及影响因素，并计算各分量的值，为实验过程的控制和检测报告的评估提供科学的依据，有利于提高药品的质控水平和测定结果的准确性。

1 实验部分

1.1 主要仪器与试剂

离 子 色 谱 仪：DIONEX ICS-5000+ 型，包 括SP-DP 双泵、DC 柱温箱模块、EG-5 淋洗液自动发生器、AERS 500（4 mm）阴离子抑制器、DC-5 电导检测器和AS-AP 自动进样器，附带Chromeleon 7色谱工作站，美国赛默飞世尔科技公司。

电子天平：XS205DU 型，感量为0.1 mg，瑞士梅特勒-托利多公司。

超纯水仪：Milli-Q 型，密理博（中国）有限公司。

水中氯标准溶液：质量浓度1 000 μg/mL，U=0.7%，编号为GBW(E) 080268，中国计量科学研究院。

乙基纤维素：批号为20140409，分析纯，中国医药集团有限公司。

实验用水为去离子水，由Milli-Q 型超纯水仪制得。

1.2 色谱条件

色 谱 柱： Dionex IonPac AS19 柱（250 mm×4 mm，5 μm，美国赛默飞世尔科技公司）；保护柱：IonPac AG19 Guard 柱（50 mm×4 mm，5 μm，美国赛默飞世尔科技公司）；流动相：10 mmol/L 氢氧化钾溶液，等度洗脱，流量为1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样体积：25 μL[16]。

1.3 氯离子对照品溶液制备

精密量取水中氯标准溶液1 mL，置于10 mL 容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀；精密量取1 mL，置于100 mL 容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀，即得质量浓度为1.0 μg/mL 的氯离子对照品溶液。

1.4 样品溶液的制备

取样品约0.25 g，精密称定，置于烧杯中，加水50 mL，加热煮沸，放冷，转移至250 mL 容量瓶中，烧杯用水洗涤3 次，洗涤液合并至同一容量瓶中，加水稀释至标线，摇匀，滤过，取续滤液作为样品溶液。

1.5 实验方法与数学模型

取对照品溶液和样品溶液，按照1.2 色谱条件进样测定，以色谱峰面积按外标法定量，乙基纤维素中氯离子的含量按照式(1)计算：

mx——样品的质量，g；

Ax——样品中氯离子的色谱峰面积；

Vx——样品溶液的稀释倍数；

As——氯离子对照品溶液中氯离子的色谱峰面积；

Vs——氯离子对照品溶液的稀释倍数；

1 000——单位转换系数。

2 不确定度来源

根据实验过程和数学模型，乙基纤维素中氯离子含量测定的不确定度来源包括：

（1）水中氯离子标准溶液引入的不确定度；

（2）氯离子对照品溶液的配制过程引入的不确定度；

（3）样品的称量及样品溶液的配制过程引入的不确定度；

（4）离子色谱仪引入的不确定度；

（5）重复测定引入的不确定度。

3 不确定度评定

3.1 水中氯标准溶液引入的相对标准不确定度

水中氯标准溶液引入的不确定度为B 类测量不确定度。经查阅证书，水中氯标准溶液的质量浓度ρ为1 000 μg/mL，相对扩展不确定度为U=0.7%，k=2。则由标准物质引入的相对标准不确定度：

3.2 氯离子对照品溶液稀释引入的不确定度

其相对标准不确定度：

以此类推，10 mL 容量瓶允差为±0.020 mL，产生的标准不确定度为u(V10) = 0.013 04 mL，相对标准不确定度为urel(V10) = 0.001 304；1 mL 移液管的允差为±0.007 mL，标准不确定度为u(V1) = 0.004 087 mL，相对标准不确定度为urel(V1) = 0.004 087。

综上所述，由对照品溶液稀释引入的相对标准不确定度：

3.3 样品称量引入的不确定度

移取样品质量为250 mg，采用差减法称量，需称量2 次，因此由样品的称量引入的相对标准不确定度：

3.4 样品提取引入的不确定度

3.5 样品稀释引入的不确定度

样品稀释步骤操作简单，仅使用250 mL 容量瓶1 次，其允差为±0.15 mL，参照3.2 项下对照品溶液稀释的不确定度计算，由样品稀释引入的标准不确定度为u(V250) = 0.174 6 mL，则样品溶液稀释引入的相对标准不确定度：

3.6 离子色谱仪引入的不确定度

校正因子的测定主要受离子色谱仪稳定性影响，包括离子色谱仪自动进样器取样的体积、抑制器的稳定性、泵的稳定性、待测组分的保留程度等。由于对照品溶液与样品溶液在相同条件下测定，对于以上因素的影响，可以采用进样精密度来评定。考察仪器的进样精密度，取对照品溶液连续进样6 次，得到氯离子峰面积分别为0.300 0、0.299 5、0.300 0、0.301 4、0.299 5、0.299 7，计算平均值为0.300 0，标准偏差为0.000 714，则由离子色谱仪引入的相对标准不确定度：

3.7 样品重复测定引入的不确定度

3.8 合成相对标准不确定度及扩展不确定度

各分量的不确定度来源彼此独立不相关，其来源及量值汇总见表1。

表1 各不确定度分量的来源及量值

根据表1 数据进行计算，采用离子色谱法测定乙基纤维素中氯离子含量的相对标准不确定度为urel=0.017 4，因此合成标准不确定度：

u= 0.017 4×0.026 8% = 0.000 466%

测量结果符合正态分布，包含概率为95%时，取扩展因子k=2，则扩展不确定度：

3.9 测定结果表示

参照JJF 1059.1—2012 《测量不确定度评定与表示》[10]相关规定，离子色谱法测定乙基纤维素中氯离子含量：

4 结语

离子色谱法测定乙基纤维素中氯离子含量的不确定度主要来源于氯离子的提取、对照品稀释和样品重复测定。其中，提取和稀释均源于实验方法设计，故选择更优化的方法，可以提高测定结果的准确度，而不确定度的大小，也反过来说明方法设计的合理性。其次，针对重复测定引起不确定度，应在实验中规范操作，严格控制，尽量减小人员带来的随机误差。