重庆市野生黄精粗多糖含量分析与评价

2022-11-15 03:32罗长琴肖国生朱显平樊汶樵郑容
中国野生植物资源 2022年10期
关键词:万州黄精根茎

罗长琴,肖国生,朱显平,樊汶樵,郑容

(1.重庆市万州食品药品检验所,重庆 万州 404100;2.重庆三峡学院生物与食品工程学院,重庆 万州 404100;3.重庆安全技术职业学院,重庆 万州 404100;4.重庆文理学院,重庆 永川 4021603)

黄精(Polygonatum sibiricumRed.)为百合科黄精属多年生草本植物,为药食两用植物,以根茎入药[1]。目前全世界普遍认可的黄精属有87种,主要分布于北温带和北亚热带国家,我国有黄精属40余种,广泛分布于32个省级行政区[2-3],其中西南地区(四川省、重庆市、云南省、贵州省和广西省)的黄精属植物的种类最多,达23种,是黄精属植物的热点地区和多样性中心[4]。

黄精性平、味甘,常用于治疗脾虚胃弱、糖尿病、高血糖、高血脂、高血压等疾病[5]。

目前对黄精的文献报道多集中在多糖类和甾体皂苷类[6-8],黄精多糖是黄精化学组成中最重要的有效成分之一,具有降血糖[9-10]、抗氧化[11-12]、抗菌[13-14]以及免疫调节[15-16]等药用价值,《中国药典》将黄精多糖含量作为黄精的质量控制指标[17]。粗多糖的药典测定方法是采用有机溶剂回流1 h后,过滤除去杂质,在残渣中加水再回流1 h提取粗多糖,加入显色试剂,利用分光光度计进行定量测定。该方法前处理经过两次回流处理,操作繁琐,且消耗大量有机试剂,回流后还有大量黏液物质造成过滤困难,导致误差偏大,影响测定结果准确性。

本研究采用水浴提取-醇沉法制成粗多糖提取液,以葡萄糖为标准品,苯酚-硫酸为显色试剂,利用紫外分光光度法对野生黄精粗多糖含量进行测定,比较重庆市不同区县的野生黄精不同部位多糖含量差异,为野生黄精的深入研究提供数据支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要仪器与试剂

刀式混合研磨仪(GM200,德国RETSCH);电热鼓风干燥箱(BPG-9240A,上海鳌珍);分析天平(QUINTIX224-1CN,德国赛多利斯);数显恒温水浴锅(HH-6,友联);冰箱(BCD-206TAS,海尔);涡旋仪(IKAMS3digt,德国IKA);离心机(SIGMA3-30K,德国SIGMA);紫外可见分光光度计(TU1901,北京普析)。

葡萄糖(优级纯),购自天津市光复科技发展有限公司;无水乙醇(分析纯),硫酸和苯酚(优级纯),购自成都市科龙化学品有限公司。

1.1.2 样品采集与制备

从重庆市奉节县、万州区、梁平区、石柱县、巫山县等地采集野生黄精样品,从湖南襄阳市采购人工种植黄精作为参比样品。采集野生黄精根茎34份、根须4份、叶子4份、种子4份,种植黄精根茎6份,共52份样品。将根茎、根须、叶子及种子样品清洗干净(根茎切成约1 mm厚的薄片,其余类型样品无需处理),放入电热烘箱内,60℃加热12 h,取出冷却,用研磨仪制成粉末状,装入自封袋中,常温保存备用。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的制备

将葡萄糖于105℃烘箱中烘干2 h,冷却后精密称取0.013 07 g于10 mL容量瓶中,用水溶解并定容至刻度制成标准储备液,再吸取储备液1.00 mL于10 mL容量瓶中,用水定容至刻度,制成浓度为0.103 7 mg/mL的标准中间液。

1.2.2 样品溶液的制备

称取样品约0.5 g于50 mL离心管中,加水至25 mL,加盖,涡旋1 min,于80℃水浴锅中水浴1 h,取出,放置5 min,8 000 r/min离心5 min。精密量取上清液2 mL于15 mL离心管中,加入无水乙醇8 mL,加盖,置于冰箱中,4℃醇沉24 h。取出后8 000 r/min离心10 min,弃去上清液,加入无水乙醇3 mL于离心管中醇洗沉淀2次,弃去乙醇,加入8 mL水溶解沉淀,于10 ml容量瓶中定容待测。

1.2.3 粗多糖测定

分别精密量取葡萄糖标准中间液0 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL和样品溶液0.2 mL于10 mL比色管中,加水至2 mL,加入5%苯酚溶液1.00 mL,再迅速加入浓硫酸5.00 mL,放置10 min后涡旋混匀,放入30℃水浴锅中水浴20 min,取出于490 nm处,以零管调零,利用紫外可见分光光度计测定吸光度值。

1.2.4 数据分析

采用SPSS 25.0软件对数据进行统计分析,利用GraphPad Prism8软件进行作图。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 标准曲线及其相关性

以葡萄糖浓度为横坐标(X),吸光度值为纵坐标(Y),绘制标准曲线:Y=6.067 4X-0.002 6,R2=0.998 8,在0~0.131 mg范围内线性良好,见图1。

图1 葡萄糖标准曲线Fig.1 Standard curve of glucose

2.1.2 精密度测定

取同一样品溶液平行测定6次,记录吸光度值(A)和相对标准偏差(Relative standard deviation,RSD),结果显示平均吸光度值为0.516,RSD为1.36%(n=6),说明仪器的精密度良好,见表1。

表1 粗多糖精密度测定结果Tab.1 The precision results of polysaccharide

2.1.3 重复性测定

称取同一黄精样品6份,按照上述方法进行前处理,制成6份样品溶液进行测定,记录吸光度(A),结果显示平均吸光度值为0.519,RSD为2.06%(n=6),表明该方法重复性较好,见表2。

表2 粗多糖重复性测定结果Tab.2 The repeatability results of polysaccharide

2.1.4 稳定性测定

精密吸取样品溶液0.20 mL进行显色,水浴结束后,分别在放置0、0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h后测定吸光度值(A),结果显示平均吸光度值为0.521,RSD为1.45%(n=5),说明待测液稳定性良好,见表3。

表3 粗多糖稳定性测定结果Tab.3 The stability result of polysaccharide

2.2 野生黄精根茎中粗多糖含量情况

重庆市野生黄精根茎粗多糖平均含量为(12.64±5.57)g/100 g,略高于种植黄精(10.50±1.76)g/100 g,但差异不显著(P>0.05);野生黄精比种植黄精多糖含量范围广,最大值达24.07 g/100 g,最小值仅3.52 g/100 g,而种植黄精根茎粗多糖含量均大于7.89 g/100g;以药典中不得少于7%作为标准值进行判定[17],总样本合格率为87.50%(n=35),其中野生黄精根茎合格率为85.29%(n=29),种植黄精根合格率茎为100.00%(n=6),合格率详见表4。

表4 黄精根茎粗多糖含量Tab.4 The content of polysaccharide in rhizome of P.sibiricum

2.3 不同区县野生黄精根茎中粗多糖含量比较与分析

40份样品中粗多糖平均含量为(12.32±5.22)g/100 g,范围3.52~24.07 g/100 g。分析不同区县黄精根茎中粗多糖含量发现,含量高低依次为:石柱、万州、梁平、巫山、种植、奉节,其中石柱(17.19±2.20)g/100g和万州(15.49±5.23)g/100g平均含量均显著高于其他区县(P<0.05),见表5。含量最高的采自梁平(24.07 g/100 g),为标准值(≥7%)的3.44倍,最低的采自奉节(3.50 g/100 g),仅为标准值的一半。比较各个地区的粗多糖合格率,万州、石柱、巫山、种植均为100%,而奉节和梁平较低,分别为71.42%和75.00%。总体来说,重庆市的野生黄精根茎中粗多糖含量较高,具有可观的开发利用价值。

表5 不同区县黄精根茎中粗多糖含量比较与分析Tab.5 Comparison and analysis of crude polysaccharide content in P.sibiricum rhizome from different districts and counties

2.4 野生黄精不同部位的粗多糖含量差异

对比奉节县采集的4批次野生黄精的根茎、根须、叶子和种子的粗多糖测定结果,平均含量:根茎(17.90±0.47)g/100 g>根须(12.00±0.93)g/100 g>种 子(11.32±0.11)g/100 g>叶 子(9.68±0.09)g/100 g,其中根茎含量明显高于其他部位(P<0.05);叶子含量明显低于其他部位(P<0.05),见表6。

表6 野生黄精不同部位的粗多糖含量Tab.6 The content of polysaccharide in different parts of wild P.sibiricum

3 讨论与结论

野生黄精常生长于林下,自然形成的遮荫环境中,阴凉、潮湿等因素有利于多糖的累积[18],其根茎多糖含量可达24.07 g/100 g,且平均含量高于种植品种,与吴启国等[19]研究安徽产地的野生与栽培黄精测定结果相吻合。然而在没有人为控制下,过度的遮荫环境,加上群落物种与黄精形成的种间竞争会阻碍黄精的生长[20],导致部分黄精多糖积累量较少,最低仅为3.52 g/100 g。因此野生黄精生长环境较分散,生长年限存在差异,种源多样化[21-22],综合导致多糖含量差异大。本研究测定的重庆市野生黄精根茎粗多糖平均含量为(12.22±5.28)g/100 g,与焦劼等[23-26]等的研究结果相比含量更高,表明重庆野生黄精品质较好,具有较高的开发利用价值。

本研究采用水浴-醇沉提取,紫外分光光度法测定黄精中粗多糖的含量,该方法简单,结果准确可靠,精密度好,可用于大批量样品的检测。样品测定结果发现,重庆市野生黄精粗多糖含量可观,根茎合格率高达85.29%,其中石柱和万州含量较高,奉节最低。黄精根须、种子和叶子中也含有丰富的多糖类物质,后续可对此类副产物做进一步研究,为黄精全株高效综合利用提供一定的理论基础。

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