古钩藤的化学成分研究

张 璐，梁 艳，韦建华，唐云丽，梁臣艳

(广西中医药大学，南宁 530200)

古钩藤[1]为萝藦科植物古钩藤（Cryptolepis buchnaiiRoem.et Schult.），为广西壮族民间的常用药材，也是广西特色中草药，在广西有着丰富的资源和药用基础，有良好的开发和利用价值。现代药理研究[2]表明，古钩藤具有护肝、调节血脂、抗炎镇痛、降血糖等功效。本次对壮药古钩藤地上部分的化学成分进行了研究，从古钩藤药材75%乙醇提取物的不同极性部位分离得到了18个单体化合物，分别鉴定为咖啡酸乙酯（1）、豆甾醇（2）、germanicol docosanoate（3）、β-谷甾醇（4）、羽扇豆醇（5）、正十五烷酸（6）、β-胡萝卜苷（7）、3-乙酰氧基齐墩果酸（8）、β-乳香酸（9）、熊果酸（10）、4-羟基香豆素（11）(11)、水杨酸（12）、隐绿原酸（13）、绿原酸（14）、新绿原酸（15）、咖啡酸（16）、异绿原酸 A（17）、异绿原酸 C（18）。

1 仪器与材料

AutoSpec Permier P776 质谱仪（美国Waters公司），AVANCE Ⅲ500MHz核磁共振仪（德国Brucker公司），LC-20AR半制备液相色谱仪（日本岛津公司）；柱色谱硅胶、薄层色谱硅胶（国药集团化学试剂有限公司）；CHP20/P120MCI GEL聚苯乙烯型反相树脂 （日本三菱化学公司）；提取分离用乙醇为食用级酒精，其余试剂均为分析纯；咖啡酸乙酯对照品（成都麦德生科技有限公司，批号：RP180624，纯度≥98%）。

古钩藤于2019年采自广西南宁，经广西中医药大学壮瑶药教学实验实训中心陆海琳高级实验师鉴定为萝藦科白叶藤属植物古钩藤的地上部分。标本存在于广西高校中药提取纯化与质量分析重点实验室。

2 提取与分离

1）取干燥古钩藤粗粉8 kg，用10倍量75%乙醇常温浸渍提取，合并提取溶液，回收溶剂至无醇味，得到总浸膏。依次用石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、水饱和正丁醇萃取，萃取液减压浓缩，分别得到不同极性部位浸膏。2）取古钩藤石油醚部位浸膏50 g，采用硅胶（100～200目）柱色谱分离，石油醚-乙酸乙酯（50:1～1:1）梯度洗脱，收集洗脱液。再采用硅胶柱色谱及重结晶等方法进行分离和纯化，分别得到化合物1（206.8 mg）、化合物2（25.5 mg）、化合物3（5 mg）、化合物4（36.8 mg）。3）取古钩藤乙酸乙酯部位浸膏50 g，采用硅胶（100～200目）柱色谱分离，三氯甲烷-甲醇（100:1～1:1）梯度洗脱，收集洗脱液。再采用硅胶柱色谱及重结晶等方法进行分离和纯化，分别得到化合物5（5.2 mg）、化合物6（10.4 mg）、化合物7（22.8 mg）、化合物8（5.6 mg）、化合物9（8.2 mg）、化合物10（11.6 mg）、化合物11（5.2 mg）、化合物12（15.6 mg）。4）取古钩藤正丁醇部位浸膏50 g，经MCI 柱色谱分离，依次水、不同浓度甲醇梯度洗脱，经制备HPLC、重结晶等方法反复分离纯化，得到化合物13（312.6 mg）、化合物14（17.6 mg）、化合物15（38.5 mg）、化合物16（225.6 mg）、化合物17（12.5 mg）、化合物18（6.5 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色针状结晶（氯仿），以咖啡酸乙酯对照品为对照，在薄层色谱经3种不同的展开系统展开，呈现单斑，Rf值一致。HPLC色谱图与对照品保留时间一致，加大峰比较法呈现单峰。故鉴定该化合物为咖啡酸乙酯。

化合物2：无色针状晶体（氯仿），EI-MSm/z：413[M+H]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3）δ：5.36（1H, d，J=3.6Hz,H-6），5.16（1H, dd,J=15.2, 8.88 Hz, H-22），4.99（1H, dd,J=15.2, 8.88 Hz, H-23），3.54（1H, m, H-3）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：37.3（C-1），31.7（C-2），71.8（C-3），42.3（C-4），140.8（C-5），121.7（C-6），28.9（C-7），31.9（C-8），50.2（C-9），37.0（C-10），21.1（C-11），39.7（C-12），42.3（C-13），56.9（C-14），24.4（C-15），28.3（C-16），56.0（C-17），12.1（C-18），19.4（C-19），40.5（C-20），21.2（C-21），138.3（C-22），129.3（C-23），51.3（C-24），31.9（C-25），21.1（C-26），19.0（C-27），25.4（C-28），12.2（C-29），以上数据与文献[3]报道对照基本一致，故鉴定该化合物为豆甾醇。

化合物3：无色针状晶体（氯仿），EI-MSm/z：749[M+1]+。1H-NMR (500 MHz, CDCl3): δ：4.86 (1H,s, H-19)，4.49 (1H, dd,J= 10.7, 5.8 Hz, H-3)，2.29 (2H,t,J= 7.6 Hz, H-2’)，1.62（2H, m, H-3’)，1.20-1.35（36H, m, H-4’-H-21’），1.08 (3H, s, H-26), 1.02 （3H, s,H-28），0.936，0.943（each 3H, s, H-29, H-30），0.90 （3H,s, H-25），0.88（3H, t,J= 6.9 Hz, H-22’），0.84（6H,s, H-23, H-24），0.73（3H, s, H-27）；13C-NMR （125 MHz,CDCl3）δ：173.7（C-1'），142.7（C-18），129.8 （C-19），80.6（C-3），55.6（C-5），51.1（C-9），43.3 （C-14），40.8（C-8），38.6（C-1），38.4（C-13），37.9 （C-4），37.7（C-16），37.4（C-22），37.1（C-10），34.9（C-7），34.5（C-2’），34.3（C-17），33.3（C-21），32.4（C-20），31.9（C-20'），31.3（C-29），29.3-29.7（C-4'-C19'），29.2（C-30），27.9（C-23），27.5（C-15），26.2（C-12），25.3（C-28），25.2（C-3'），23.7（C-2），22.7（C-21'），21.1（C-11），18.1（C-6)，16.7（C-26），16.6（C-24），16.1（C-25），14.6（C-27），14.1（q, C-22'）。以上数据与文献[4]报道对照基本一致，确定化合物3为germanicol docosanoate。

化合物4：白色针状结晶（甲醇），1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.32（1H, m,H-6），3.60（1H,m,H-3），1.12（3H, s,H-19），0.96（3H, m,H-21），0.91（3H, m,H-29），0.86（3H, s,H-26），0.84（3H,m,H-27），0.70（3H, s,H-18）；13C-NMR(125MHz,CDCl3）δ：37.4（C-1），31.8（C-2），72.0（C-3），42.4（C-4），140.9（C-5），121.9（C-6），32.1（C-7），32.1（C-8），50.4（C-9），36.7（C-10），21.2（C-11），39.9（C-12），42.5（C-13），56.9（C-14），24.4（C-15），28.4（C-16），56.2（C-17），12.1（C-18），20.0（C-19），36.3（C-20），18.9（C-21），34.1（C-22），26.2（C-23），46.0（C-24），29.3（C-25），19.5（C-26），19.2（C-27），23.2（C-28），12.0（C-29）.以上数据与文献[5]报道对照基本一致，确定化合物4为β-谷甾醇。

化合物5：白色针状结晶（氯仿），EI-MSm/z：426[M]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：4.68（3H,s,H-29），4.56（3H, s,H-29），1.67（3H, s, H-30），1.02（3H, s, H-26），0.97（3H, s, H-23），0.83（3H,s, H-25），0.79（3H, s, H-28），0.76（3H,s,H-24 ）；13C-NMR(125MHz, CDCl3) δ：38.9（C-1），28.0（C-2），79.0（C-3)，40.0（C-4），55.3（C-5），18.3（C-6），34.3（C-7），40.8（C-8)，50.4（C-9），37.2（C-10），19.3（C-11），25.2（C-12），38.1（C-13），43.0（C-14），27.5（C-15），25.2（C-16），42.8（C-17），48.3（C-18），48.0（C-19），151.0（C-20），29.9（C-21），40.0（C-22），28.0（C-23），15.4（C-24），16.1（C-25），16.1（C-26），14.6（C-27），18.0（C-28），109.3（C-29），20.9（C-30），以上数据与文献[6]报道对照基本一致，确定化合物5为羽扇豆醇。

化合物6：白色蜡状固体（二氯甲烷），EIMSm/z：412[M-H]+，227[M-CH3]+。1H-NMR（500MHz,CDCl3） δ：0.87（3H, t, 6.85Hz）1.25～δ1.64（22H, m）2.34（2H, t, 7.5Hz）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：13C-NMR 谱（500MHZ, CDCl3） δ：33.86（C-2），31.93（C-3），29.70（C-4），29.68（C-5），29.67（C-6），29.60（C-7），29.44（C-8），29.37（C-9），29.25（C-10），29.07（C-11），24.70（C-12），22.70（C-13），14.13（C-14）。以上数据与文献[7]报道对照基本一致，确定化合物6为正十五烷酸（pentadecanoic acid）。

化合物7：白色粉末（吡啶）。ESI-MSm/z：577[M]+；1H-NMR（500MHz，C5D5N）δ：5.34 (1H, s,H-6），4.30（1H, m, H-3），0.97（3H, d, H-19），0.91（3H, m, H-21），0.88（3H, m, H-29），0.86（3H, m,H-27），0.84 （3H, m, H-26），0.65（3H, s, H-18）；13C-NMR（125MHz，C5D5N）δ：37.0（C-1），34.3（C-2），78.1（C-3），39.4（C-4），140.9（C-5），122.0（C-6），29.5（C-7），32.1（C-8），50.4（C-9），36.4（C-10），20.0（C-11），28.6（C-12），41.1（C-13），56.3（C-14），24.6（C-15），37.5（C-16），56.3（C-17），12.2（C-18），19.3（C-19），36.4（C-20），19.1（C-21），32.1（C-22），26.4（C-23），46.1（C-24），23.4（C-25），12.0（C-26），28.6（C-27），19.5（C-28），19.0（C-29），102.6（C-1'），75.4（C-2'），78.6（C-3'），71.8（C-4'），78.7（C-5'），62.9（C-6'）。以上数据与文献报道数据[8]基本一致，故鉴定化合物7为β-胡萝卜苷。

化合物8：白色粉末结晶（甲醇），EI-MSm/z：499［M+1]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.28（1H,t,J=4.7 Hz,H-12)，4.51(1H, t,J=10Hz,H-3)，2.83（1H,dd,J=7.6, 3.6 Hz,H-18），2.05（3H, s,H-OMe），1.13（3H,s,H-27），0.95（3H, s,H-25），0.94（3H, s,H-30），0.93（3H,s,H-29），0.87（3H, s,H-24），0.85（3H, s,H-23），0.76（3H,s,H-26）；13C-NMR（125MHz, CDCl3）δ：39.0（C-1），23.2（C-2）80.9（C-3)，38.0（C-4），55.3（C-5），18.2 （C-6），33.8（C-7），39.0（C-8），47.5（C-9），37.6（C-10），23.6（C-11)，122.7（C-12），154.9（C-13）42.0（C-14），33.0（C-15），23.6（C-16）46.8（C-17），42.0（C-18），45.8（C-19），30.7（C-20），32.4（C-21），27.7（C-22），28.0（C-23），16.7（C-24），15.4（C-25），16.9（C-26），26.2（C-27），183.2（C-28），33.0（C-29），23.5（C-30），171.0（C-COCH3），21.3（C-OCH3）。以上数据与文献[9]报道对照基本一致，确定化合物8为3-乙酰氧基齐墩果酸。

化合物9：白色粉末结晶（甲醇），1H-NMR（500 MHz, MeOD）EI-MSm/z：457[M+H]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3） δ：5.28（1H, t,J=4.7 Hz,H-12），4.51（1H, t,J=10Hz,H-3），2.83（1H, dd,J=7.6, 3.6 Hz,H-18），2.05（3H, s,CH3CO），1.13（3H,s,H-27），0.95（3H, s,H-25），0.94（3H, s,H-30），0.93（3H,s,H-29），0.87（3H, s,H-24），0.85（3H, s,H-23），0.76（3H,s,H-26）；13C-NMR（125MHz, CDCl3） δ：39.0（C-1），27.7（C-2），80.9（C-3），38.0（C-4），55.3（C-5），18.2（C-6），33.8（C-7），39.0（C-8），47.5（C-9），37.6（C-10），23.6（C-11），122.6（C-12），143.6（C-13），42.0（C-14），27.7（C-15），23.4（C-16）。以上数据与文献报道数据[10]基本一致，故鉴定化合物9为β-乳香酸。

化合物10：白色粉末结晶（甲醇），EI-MSm/z：456[M]+。1H-NMR（500MHz, CDCl3）δ：5.46（1H,t,J= 3.0 Hz，H-12），3.26（1H,dd,J=11.4，4.5 Hz，H-3），1.23（3H，s，H-29），1.22（3H，s，H-27），1.03（3H，s，H-23），1.02（3H，s，H-24），1.01（3H，s，H-30），0.98（3H，s，H-26），0.86（3H，s，H-25)；13C-NMR(125MHz, CDCl3）δ：37.4（C-1），27.1（C-2），76.9（C-3），38.4（C-4），55.0（C-5），17.9（C-6），32.9（C-7），36.8（C-8），40.5（C-9），36.4（C-10），23.5（C-11），124.6（C-12），138.6（C-13），42.0（C-14），27.6（C-15），23.9（C-16），47.3（C-17），52.8（C-18），38.6（C-19），38.6（C-20），30.1（C-21），36.1（C-22），28.0（C-23），16.2（C-24），16.5（C-25），16.8（C-26），23.6（C-27），178.4（C-28），17.3（C-29），22.2（C-30）。以上数据与文献[11]报道对照基本一致，确定化合物10为熊果酸。

化合物11：白色粉末（氯仿），EI-MSm/z：138[M]+。1H-NMR（500MHz,CDCl3）δ：7.95（1H,d,J= 8.0 Hz,H-6），7.54（1H,t,J= 8.0 Hz，H-4)，7.02（1H，d，J= 8.0 Hz，H-3），6.95（1H，t，J= 8.0 Hz，H-5）；13C-NMR（CDCl3,125MHz） δ：175.0（C= O），162.2（C-2），137.1（C-4），131.0（C-6），119.6（C-5），117.9（C-3），111.3（C-1）。以上数据与文献[12]报道对照基本一致，确定化合物11为水杨酸。

化合物12：白色粉末（甲醇），EI-MSm/z：163[M+H]+。1H-NMR（500MHz ,CDCl3）δ：7.90（1H,d,J=12 Hz,H-5），7.63（1H,m,H-7），7.34（2H，m，H-6,H-8），4.85（1H,s,H-3）；13C-NMR（125MHz,CDCl3）δ：166.0（C-2），117.3（C-3），168.4（C-4），117.6（C-4a），124.6（C-5），125.3（C-6)，133.9（C-7），117.6 （C-8），155.2（C-8a）。以上数据与文献[13]报道对照基本一致，确定化合物11为4-羟基香豆素。

化合物13：白色无定形粉末（甲醇），ESIMSm/z：354[M]+。1 H-NMR（500 MHz ,DMSO-d6）δ：7.63（1H,d,J= 15.5 Hz,H-7），7.04（1H,d,J= 2.0 Hz,H-2)，6.93（1H,dd,J= 2.0, 8.0 Hz,H-6)，6.75（1H,d,J = 8.0 Hz,H-5），6.34（1H,d,J = 15.5 Hz,H-8)，4.85（1H,m,H-4'），4.36（1H,m,H-3'），4.27（1H,m,H-5'），2.10～ 2.20（2H,m,H-2'），1.95～ 2.07（ 2H,m,H-6'）。13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：79.5（C-1），38.8（C-2），79.4（C-3)，79.5（C-4），66.0（C-5），48.4（C-6），178.3（C-7），127.8（C-1'），115.2（C-2'），146.7 C-3'），149.5（C-4'），116.4（C-5'），122.6（C-6'），147.1（C-7'），115.3（C-8'），169.0（C-9'）。以上数据与文献[14]报道的隐绿原酸数据基本一致。

化合物 14：白色无定形粉末（甲醇），ESIMSm/z：354[M]+。1 H-NMR（500 MHz, MeOD）δ：7.91（1H,d,J= 16.0 Hz,H-7），7.62（1H,s,H-2），7.36（1H,d,J= 8.0 Hz,H-6)，7.34（1H,d,J= 8.0 Hz,H-5)，7.32（1H,d,J= 16.0 Hz,H-8），4.85（1H,m,H-3'），3.30（1H,m,H-5'），3.29（1H,m,H-4'）。13C-NMR(150 MHz,MeOD) δ：75.4（C-1），36.7（C-2），73.0（C-3），74.5（C-4），68.2（C-5），41.5（C-6），178.3（C-7），127.9（C-1' ），115.1（C-2'），146.8（C-3' ），149.4（C-4'），116.4（C-5'），122.8（C-6'），146.8（C-7'），115.8（C-8'），169.0（C-9'）。以上数据与文献[15]报道的绿原酸数据基本一致。

化合物 15：白色无定形粉末（ 甲醇），ESIMSm/z：355[M+H]+。1 H-NMR（500 MHz, MeOD）δ：7.56（1H,d,J= 15.5 Hz，H7），7.03（1H,d,J=2.0 Hz，H-2），6.95（1H,dd,J= 1.5，8.0 Hz，H-6），6.75（1H,d,J= 8.0 Hz，H-5），6.23（1H,d,J=16.0 Hz，H-8），5.32（1H,m,H-5'），4.15（1H,m,H-3'），3.72（1H,m,H-4'），2.10～2.20（2H,m,H-2'），2.04～2.09（2H,m,H-6'）。13C-NMR（150 MHz,MeOD）δ: 73.4（C-1），48.4（C-2），71.3（C-3），71.9（C-4），71.2（C-5），38.2（C-6），177.0（C-7），127.7（C-1′），115.1（C-2′），146.8（C-3′），149.5（C-4′），116.4（C-5′），122.9（C-6′），147.0（C-7′）。以上数据与文献[16]报道的新绿原酸数据基本一致。

化合物 16：白色无定形粉末（甲醇），ESI-MSm/z：180[M]+。1 H-NMR（500 MHz,MeOD）δ：7.52（ 1H,d,J= 15.9 Hz, H-7），7.04（1H,d,J= 1.6 Hz,H-2），6.94（1H,dd，J= 1.6，8.1 Hz,H-6），6.77（1H,d,J= 8.1 Hz,H-5），6.20（1H,d,J= 15.9 Hz,H-8）。13C-NMR (150 MHz,MeODδ：172.0（C-9），149.7（C-4），147.0（C-3），146.5（C-7），128.0（C-1），123.1（C-6），116.7（C-8），116.5（C-2），116.2（C-5）。以上数据与文献[17]报道的咖啡酸数据基本一致。

化合物17：白色粉末（ 甲醇），ESI-MSm/z:539[M＋Na]+。1 H-NMR（600 MHz, MeOD）δ: 7.62（1H,d,J= 15.7 Hz, H-7′′），7.59（1H, d,J= 16.2 Hz,H-7′), 7.05（2H, brs, H-2′, 2′′），6.96（2H, m, H-6′,6′′），6.78（1H, brs, H-5′′），6.76（1H, brs,H-5′），6.35（1H, d,J= 15.9 Hz, H-8′′），6.24（1H,d,J= 15.9 Hz, H-8′），5.42（1H, m, H-3），5.37（1H,m, H-5），3.97（1H, d,J=4.6 Hz, H-4），2.02～2.32（4H, m, H-2, 6）；13C-NMR（150 MHz, MEOD）δ: 177.2（COOH），168.8（C-9′′），168.3（C-9′），149.6（C-4′′），149.5（C-4′），147.2（C-7′′），147.0（C-7′），146.7（C-3′′, 3′），127.7（C-1′′），127.9（C-1′），123.0（C-6′′），122.9（C-6′），116.4（C-5′′, 5′），115.5（C-2′′，2′），115.2（C-8′′），115.0 （C-8′），74.6（C-1），72.4（C-5），72.0（C-3），70.8（C-4），37.5（C-6），35.9（C-2）。以上数据与文献[18]报道为异绿原酸 A数据基本一致。

化合物 18：淡黄色粉末 （甲醇），ESI-MSm/z:517[M＋H]+。1 H-NMR（600 MHz, MeOD）δ: 7.62（1H, d,J= 15.7 Hz, H-7′′），7.54（1H, d,J= 15.8 Hz, H-7′ ), 7.05（1H, brs, H-2′′），6.99（1H,brs, H-2′），6.92（2H, m, H-6′，6′′），6.75（1H, brs, H-5′′），6.75（1H, brs, H-5′），6.33（1H, d,J= 16.0Hz, H-8′′），6.24（1H, d,J= 16.0 Hz, H-8 ′），5.68（1H, brs, H-5），5.16（1H, m,H-4），4.40（1H, m, H-3），2.25（4H, m, H-2, 6）；13C-NMR（150 MHz, MEOD）δ: 176.0（COOH），167.0（C-9′′），167.0 （C-9′），148.4（C-4′′,4′），146.5（C-7′′），146.2（C-7′），145.2（C-3′′, 3′），126.3（C-1′′），126.4（C-1′），121.7（C-6′′, 6′），115.3（C-5′′, 5′），113.8（C-2′′, 2′），113.3（C-8′′, 8′），74.8（C-1），74.3（C-4）, 68.0（C-5），67.6（C-3），38.0（C-6），37.0 （C-2）。以上数据与文献[18]报道为异绿原酸 C数据基本一致。