核酸检测与酶联免疫吸附试验在血液标本内乙肝病毒检测中的价值

朱晓晨

核酸检测(nucleic acid testing,NAT)可直接在检测当中使用,在诊断乙肝上意义重大。有相关研究显示,此种检测方式优点在于高灵敏度且结果准确,在临床检验当中得到了广泛使用,针对于各种原因导致的漏检血液具有高准确度,显著减少了因输血引起的病毒感染发生率,为临床检查提供了有效措施［1,2］。为探究NAT、酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)在血液标本内HBV 检测中的价值,故选择20140例合格血液标本进行检测,现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 选取2019年7月～2020年8月间20140 份无偿献血血液合格标本纳入研究,经过干化学法进行谷丙转氨酶(ALT)检测,选择金标试纸法对乙肝病毒表面抗原(HBsAg)进行检测,结果合格。

1.2 方法

1.2.1 血液采集方法 样管离心速率3000 r/min,离心力1600 g,时间为15 min,在4℃环境下进行保存,检测时间在48 h 内,对血液采集日期、样品编码等信息进行记录保存。对标本的处理时间在2 h 内,转存至冰箱,冰箱温度设定在2～8℃,经过2～3 h 后进行离心储存处理,在24 h 内进行血清学检查。

1.2.2 检测方式 所有操作均按照规定进行,试剂在有效期内使用,选择STAR 全自动样仪、BEHRUNG全自动酶免后处理机、Cobas s201 核酸检测系统、COBAS Ampliprep 核酸提取仪、COBAS Taqman 核酸扩增检测仪。ELISA 检测：对血液标本进行HBsAg 检测,选择2 种ELISA 试剂,在实验中设定阴性对照组、阳性对照组、室内质控品组与空白对照组,检验结果判定：样本光密度值与临界值的比值(S/CO)≥1 为阳性,此状态血液不符合标准；0.5＜S/CO＜1 为灰区,此状态血液不符合标准；S/CO＜0.5 为阴性,此状态血液符合标准。NAT 检测：选择混样方案进行NAT 检测,在混样中设定6 个标本,设定对照组,混合测定阴性为阴性,对混合测定阳性者进行拆分,如拆分检测表现阴性则为NAT 阴性,如拆分测定呈现阳性,则为NAT 阳性。针对NAT 阳性标本中,经过NAT 检查判定为阳性,HBsAg 检测结果为阴性与NAT 判定阴性献血者进行随访,在2 个月后进行重新采样。

2 结果

20140 份血液标本中,ELISA 检测双试剂阳性6 份,单试剂阳性8 份,双试剂阴性20126 份。在双试剂阴性标本中,NAT 检测呈阴性20111 份,阳性15 份,在确认阳性的15 份标本中,对符合诊断条件的献血者进行追踪,ELISA 阴性转化阳性3 份,均在ELISA 窗口期经过NAT 检测确认,NAT 检测中发现2 份隐匿性HBV 感染。

3 讨论

HBV、丙型肝炎病毒、艾滋病病毒三类病毒的特点在于均为血液传播,严重威胁了人们的生命安全。相关资料显示,对发展中国家的血液标本进行分析,发现5%～20%的血液中存在感染的危险,历年的输血以及非安全性注射当中,HBV 感染人数为1600 万,丙型肝炎病毒感染人数为470 万,艾滋病病毒感染人数为16 万,高感染率对人民的生命安全造成了威胁,且对国家经济以及社会安全造成了严重影响［3,4］。当患者身体虚弱时,免疫功能显著下降,相比于健康者有更大几率感染血液中的病毒,且因为病毒感染造成严重后果,严重影响了医患关系,为保证患者的输血安全性,维护正常的医疗秩序,我国临床对血液的安全性十分重视。

我国是HBV 感染高发国家,HBV 作为一种可通过血液传播的病毒,对献血人群进行血液检测是防控HBV 感染的最佳手段。在临床诊断中ELISA 的使用较为广泛,在正常情况下,HBsAg 是临床检测的常用指标,同时ELISA 检测方式的优点在于价格低廉、操作便捷［5］,所以在血液检查当中具有重要意义。但因为隐匿性HBV、HBV 感染窗口期的存在,在临床检验中同样有较高的漏诊情况。NAT 作为临床血清学诊断方法,也是新型分子生物学诊断措施,同时对HBV-DNA含量进行检测能直接检测出患者的感染情况,因为有高灵敏性、高特异性等优点,在临床血液检查中得到了广泛使用［6］。在输血的过程中是否有可靠的安全性,关键在于检查病毒的窗口期,根据相关结果显示,通过NAT 检测后能显著降低HBV 的窗口期,降低率已经达到了40%～75%,能有效减少病毒通过血液传输途径传播的可能性。在本研究中,对NAT 检验结果阳性标本中,NAT 确认为阳性,但检验结果为阴性以及NAT 确认阴性献血者进行随访追踪,经过ELISA 检测阴性转化为阳性3例,该血样于ELISA 窗口期通过NAT 检测方法确认,并且发现隐匿性HBV 感染者,同时说明了NAT 在血液检验中具有重要价值［7］。NAT 检测中所选择的试剂同样具有高灵敏性和高特异性,同时对实验环境也有一定的要求,在血液筛查的过程中所应用的设备和试剂应当具有更高要求,尽管显著提升了血液筛查的成本,但同时也大大提升了血液安全的保证,同时,NAT 自身存在一定约束,如果病毒含量较低,选择NAT 检测无法得到准确结果［8］。然而在检测当中选择NAT 检测方式能有效提升病毒检测准确率,为输血安全性提供了保障,并且NAT 检测可以显著减少窗口期,降低了通过输血方式传播病毒的可能,不过在血液检测中可能会发生漏检情况,在进行NAT 检测的时候,应当特别注意病毒核酸,ELISA 则为抗原或抗体,所以,两种方法在检测原理上具有一定差异性,所以,两种检测方式可以同时应用于血液检测中,发挥互补的效果,两种措施针对于血液筛查均为关键检测方案。因为HBV 作为一种能通过血液传播的病毒,能使患者传染乙肝,在近年来,外界环境逐渐复杂,乙肝传染率开始逐渐上升,所以为降低感染发生、缩短输血传播的窗口期,开展了NAT 检测,增强献血血液的检查力度。ELISA 作为临床中最常见的血液标本HBV 检验方式,能通过血液标本中HBsAg 的检测对HBV 进行筛查,具有高检出率的特点,但是对于窗口期、特异性以及灵敏度存在一定的局限性,有一定的漏诊情况［9,10］。然而NAT 检测法能通过直接检测血液标本内的HBV数量进行HBV 筛查,所以能更直观的筛查出检测血液标本内是否存在HBV,对血液标本的筛查和排查具有积极意义。

因为血液传播是HBV 感染的重要途径之一,所以HBV 筛查是血液系统中最为主要的内容,当下ELISA作为一类血清学方法,也成为了诊断HBV 使用最为广泛的方法,在临床诊断和血液筛查当中具有关键作用,HBV-DNA 检测是近年来快速发展起来的分子生物学诊断措施,对于发现早期HBV 具有重要意义,且结果可靠,根据相关资料显示,ELISA 检测HBV-DNA和HBsAg 的结果存在一定差异,主要原因可能是HBV感染早期,献血者血液中病毒数量较低,HBsAg 不能被ELISA 检测到,然而DNA 已经存在于血清当中,所以,HBV-DNA 检测呈现阳性。虽然HBV-DNA 检测是快速发展的分子生物学诊断措施,但是针对于早期HBV 感染并不能对病毒进行定量,尽管近年来ELISA试剂盒的灵敏度、特异性正在改善,但依然无法避免病毒感染窗口期、病毒免疫、免疫沉默等因素引发的漏检情况,然而NAT 技术不断被亚洲欧美等多个国家作为筛查献血者血液的主要方法,作为高度敏感、特异的筛查输血传染因子的检测方法主要针对人类免疫缺陷病毒、丙型肝炎病毒以及HBV,在我国,NAT 检测HBV 的方法正逐渐被推广开来,根据相关研究表示,在献血者的血液筛查当中,选择NAT 检测技术能显著提升输血的安全性,在经过NAT 检测后,能够显著缩短人类免疫缺陷病毒、HBV、丙型肝炎病毒的ELISA 窗口期,在一定程度上降低了病毒经过血液传播的风险。

综上所述,NAT 以及ELISA 在临床诊断中均存在一定效果,两种试验方式具有一定互补性,且NAT 在临床诊断中具有高灵敏度以及高特异性,在进行血液检查中能显著降低漏诊情况的发生,缩短了HBV 的窗口期,确保输血治疗安全性。上述两种检测方式在原理以及方法上存在区别,但在筛查结果中不存在重复性,均为血液筛查的关键检测方式。