替米考星可溶性粉在乌鸡体内的药动学研究*

秦晓冰（青岛农业大学/山东省预防兽医学重点实验室，山东 青岛 266109）

替米考星（Timicosin）可溶性粉为类白色结晶性粉末，属于大环内酯类半合成抗菌药，具有抗菌性强、吸收快、分布容积大、与其它药物无交叉等特点，已被广泛应用于鸡、猪、牛、羊等畜禽[1-3]。替米考星敏感菌主要包括革兰氏阳性菌、部分革兰氏阴性菌、螺旋体等，特别是对巴氏杆菌、支原体和胸膜肺炎放线菌等有较好的作用[4-6]。家禽生产中常常被各种病原微生物侵袭，其中能够感染家禽的支原体就达20余种，一旦感染很难根除，而且往往与其它病原微生物混合感染，降低家禽的生产性能，造成养禽业严重的损失[7]。由于支原体类型复杂，疫苗免疫效果不甚理想，目前多使用大环内酯类、四环素类、喹诺酮类进行治疗。随着减抗政策的不断实施，替米考星作为非处方药经常被用来预防和治疗支原体等病。关于替米考星在动物体内的药动力学国内外均有报道[8-9]，但在乌鸡体内的研究目前尚无资料。10%磷酸替米考星可溶性粉与10%替米考星可溶性粉效果相当，增加磷酸基团显著增加了水溶性，使得该药应用更加便捷广泛。本研究将通过对替米考星在乌鸡体内的药动学研究，为该药在给药方案和临床上合理应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 药品及配制

10%的磷酸替米考星可溶性粉，批号190404，购自诸城市华特兽药有限公司，推荐鸡混饮用量：2.5 g/L。

替米考星对照品，含量为95.0%，购自德国Dr.Ehrenstorfer Gmb H公司，批号17582000。

磷酸替米考星饮用水（口服液）的配制：10%磷酸替米考星可溶性粉使用前用蒸馏水配成1 g/L溶液，供口服给药。

替米考星标准贮备液（标准液）的配制：对照品用天平称取27.47 mg，流动相溶解后，定容，配制浓度为1 mg/mL，-20 ℃保存备用。

1.2 试验动物与分组

60日龄黑凤乌鸡24只，公母各半，体重（1.0±0.1）kg，购自青岛市城阳区仙家寨养殖场。随机分为A组和B组，每组12只，公母各半。A组服用口服液，B组服用标准液，服用剂量为12 mg/kg体重（以替米考星计）。鸡只给药前12 h禁饲，自由饮水，饲喂全价日粮。

1.3 主要试剂与仪器

乙腈、甲醇和四氢呋喃，色谱级，购自Fisher Scientific公司；正己烷和二氯甲烷，分析纯，购自天津市大茂化学试剂厂；二正丁胺，色谱纯，购自Sigma-Aldrich Chemie GmbH。

高效液相色谱仪（购自岛津仪器有限公司）、漩涡混合仪（购自德国IKA公司）、离心机（购自德国Sigma公司）、超声机（购自宁波科生仪器厂）。

1.4 血样采集

在给药前采血一次，记为0 h，给药后0.25、0.5、1、2、4、6、8、12、16、24、48、72 h各采血一次。采血部位为鸡翼下静脉，剂量为每次2 mL。置于含肝素钠的管中，离心出血浆，-20 ℃保存备用。

1.5 血浆中替米考星的测定

准确吸取0.1 mL乌鸡血浆于1 mL离心管内，加入0.4 mL二氯甲烷-正己烷混合液，涡旋1 min，8000 r/min离心5 min，取上清液，35 ℃水浴下蒸干，取0.4 mL流动相溶解漩涡，0.45 μm的微孔滤膜过滤后进行HPLC分析。

从表2中可以看出，与安静对照组相比，力竭运动即刻组(E0)骨骼肌和血清中AMPK含量上升，有极显著性差异(P<0.01)；而C组、E24组、E48组之间骨骼肌和血清中AMPK含量无明显差异。

色谱条件：C18色谱柱；280 nm检测波长；0.05mol/L磷酸-二丁胺（pH=2.5），乙腈-流动相(85：15，v/v )，流速：1 mL/min；进样量：30 μL；柱温：25 ℃，手动进样。

1.6 标准曲线及线性范围

取空白血浆0.5 mL，添加一定量的替米考星标准液和稀释液，分别配制替米考星浓度为0.05、0.1、1、5、10、20 μg/mL，按照方法1.5进行处理并进行HPLC分析，每个浓度重复 5次。

1.7 回收率和精密度测定

将一定浓度的替米考星稀释液加入0.5 mL空白血浆中，制得低、中、高三个梯度浓度分别为0.05、0.5、5 μg/mL，按照1.5处理并进行HPLC分析，每个浓度每日重复 5次，1周内测定5个批次，求出日内变异系数（RSD）和日间变异系数。

回收率 = A · 100% /AS

式中，A为添加样品中替米考星实测峰面积；AS为对应标准液中替米考星峰面积。

1.8 数据分析

采用Win Nonlin 5.2 药动学分析软件进行数据分析，药物动力学参数由该软件进行非房室药动力学模型计算。

2 结果

2.1 替米考星的线性方程、检测限和定量限

设X为所测血药浓度，Y为色谱峰面积值，得到标准曲线回归方程为： Y = 4010.4X +2064.9，相关系数R = 0.9996。替米考星的浓度在0.05~20 μg/mL范围内，其线性关系良好。

2.2 血浆样品回收率及精密度

替米考星在不同水平的血浆浓度0.05、0.5、5.0 μg/mL，回收率见表1。平均回收率在92.0%~ 95.6%之间，日内和日间变异系数小于10%。

表1 替米考星在血浆样品中的回收率

2.3 替米考星在鸡体内的血药浓度

乌鸡内服替米考星后，鸡体内不同时间的血药浓度均值见表2。由表2可知，乌鸡口服药后1 h达到了血药浓度的高峰，以后开始逐渐下降，0.10 μg/mL以上的浓度可以维持6~7 h，并在48 h后检测不到替米考星的血药浓度。10%的可溶性粉与标准粉之间的差异不显著（P＞0.5）。

表2 乌鸡口服单剂量替米考星（12 mg/kg）血药浓度

2.4 替米考星在乌鸡体内药动学参数

黑凤乌鸡口服替米考星溶液（12 mg/kg）后，血浆药动力参数见表3。由表3可知，替米考星在乌鸡体内达到峰值的时间（Tmax）约为1.1 h，峰浓度（Cmax）约为0.35 μg / mL，药时曲线下面积（AUC）约为 2.35 μg/mL ·h，消除半衰期（T1/2β）约为 35 h，平均滞留时间（MRT）约为9.5 h。可溶性粉与标准粉的药动力参数差异不显著（P＞0.05）。

表3 乌鸡口服单剂量替米考星（12 mg/kg）体内的药动学参数

3 讨论

替米考星对畜禽有害微生物有良好的抑菌效果，对猪链球菌、副猪嗜血杆菌、巴氏杆菌和胸膜肺炎放线菌对最小抑菌浓度（MIC）为0.005~2.5 μg/mL，对猪肺炎支原体MIC为0.005 μg/mL，对鸡毒支原体MIC为0.312 μg/mL[10]。研究表明，鸡口服不同剂量的磷酸替米考星可溶性粉，10倍大于推荐剂量（800 μg/mL）饮水投服后未见其对鸡的靶器官组织造成药物不良影响，安全使用范围较广[11]。另外，替米考星对于巴氏杆菌和胸膜肺炎放线杆菌等微生物，有较长时间的抗菌后效应，药物浓度越大该效应时间越长[12]。韩孝欣等研究报道，磷酸替米考星可溶性粉对鸡慢性呼吸道病治愈率和保护率都达到了95%以上[13]。

黑凤乌鸡口服替米考星溶液（12 mg/kg）后，测定血浆中的药物浓度达到峰值的时间（Tmax）约为1.1 h，AUC约为2.35 μg/mL·h，消除半衰期（T1/2β）约为35 h，说明该药在乌鸡体内吸收迅速，分布较广，消除缓慢。这与邓振领[8]、Abu-Basha等[9]和G Shu等[14]研究报道的替米考星饲喂健康鸡只后测定血浆药动力结果是一致的。但达峰时间差异较大，药时曲下面积、半衰期等也不完全相同，这可能是替米考星产品各个厂家制剂工艺不相同和试验鸡只品种及个体因素等造成的，但这些差异并不影响该药在鸡体内有效血药浓度的维持。

因此，该药可以用于预防和治疗乌鸡支原体和巴氏杆菌等疾病，磷酸替米沙星溶液乌鸡口服后，吸收迅速能达到体内不同靶器官，按照12 mg/kg体重给药，血浆中的Cmax可达到0.35 μg/mL，24 h血药浓度0.08 μg/mL。根据药动力学参数和血药浓度变化过程等，建议乌鸡可以按照12 mg/kg体重磷酸替米考星可溶性粉口服给药，一日两次。