高山蓍中的萜类成分及其降糖活性研究

段江婧，薛金凤，赵晨光，潘 浩，秦月鸽，冯卫生，吴 亚*，薛贵民*

1河南中医药大学药学院；2河南省中药开发工程技术研究中心，郑州 450046

蓍属(Achillea)是菊科多年生草本植物，截至目前从蓍属植物中分离得到了多种类型的化学成分，如萜类、黄酮、生物碱等，其中含量最丰富的是倍半萜类[1]。现代药理学研究表明，蓍属植物具有抗菌[2]、抗炎[3]、抗感染、镇静[4]、降血糖、调血脂和解痉[5]等作用。

高山蓍为菊科蓍属植物，又名一支蒿、锯齿草、蜈蚣蒿等。该植物生命力顽强，适应能力较好，它抗低温、喜温暖、半荫，宜肥沃、湿润的土壤，故常栖息于我国北方地区的灌木丛、山坡坡面、山谷湿地等处，在我国华北、东北、江苏、宁夏、内蒙古以及日本、苏联等地区均有分布。高山蓍用药的历史已经有一千多年，最早作为上品记载于《神农本草经》，在古代，因其具有治愈疾病的疗效被人们视为“神草”和“灵物”[6]。据2020版《中国药典》记载，此药味苦、酸，性平、温，归肺、脾、膀胱经。民间百姓常将高山蓍用于治疗外伤破损、感冒发热、风湿和关节疼痛等疾病。现代药理学研究显示，蓍属植物的提取物具有降血糖和调血脂的药理活性[7]，即表明对于高山蓍中具有降糖活性化合物的研究具有重要意义。我国高山蓍植物资源丰富，且应用越来越普遍，使得国内外很多学者对其产生了研究兴趣。所以，为进一步研究高山蓍的化学成分和药理活性，本文对高山蓍二氯甲烷部位的化学成分进行提取、分离、纯化和结构鉴定，并对这些化合物在棕榈酸诱导的HepG2胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)细胞模型上进行了细胞耗糖量的活性筛选[8]，以期丰富该中药的化学成分并发现具有良好降糖活性的化合物。

1 材料与方法

1.1 仪器与材料

1.1.1 仪器

LC-52型高压制备液相色谱仪(赛谱锐思(北京)科技有限公司)；Bruker AVANCE 500核磁共振仪(TMS为内标)；Bruker maxis HD型飞行时间质谱仪(德国Bruker公司)；SCIEX Qtrap 5500质谱仪(美国应用生物系统公司)；Agilent 1260 InfinityⅡLC高效液相色谱仪(美国安捷伦科技公司)。

1.1.2 材料

Sephadex LH-20(40～70 μm，Amersham Pharmacia Biotech AB，Uppsala，瑞士)；大孔树脂Diaion HP-20(日本三菱化学)；MCI(日本三菱化学公司)；YMC-Pack ODS-A(40～60 μm，YMC)；预制硅胶薄层G板(10～40 μm青岛海洋化工厂)；分析纯和色谱纯试剂(天津恒兴和天津四友精细化学有限公司)；显色剂：10%浓硫酸乙醇。

2020年5月在云南省昆明市购买，由河南中医药大学董诚明教授鉴定为AchilleaalpinaL.全草，标本(20200515)放于河南中医药大学天然产物实验室Bs630。

1.2 实验方法

1.2.1 提取分离

高山蓍(5.0 kg)用二氯甲烷溶剂冷浸48 h，室温下超声提取三次，每次3 h。合并三次提取液，减压浓缩得到总浸膏52.0 g。将得到的浸膏与聚酰胺按1∶1的比例拌样装于MCI色谱柱中，依次用10%、30%、60%、80%、90%、100%甲醇-水溶剂系统梯度洗脱，将洗脱液减压浓缩，得到的6个馏分依次命名为AN1、AN2、AN3、AN4、AN5、AN6。将AN3部位过Sephadex LH-20处理，用甲醇做流动相得到6个馏分(AN3B1、AN3B2、AN3B3、AN3B4、AN3B5、AN3B6)。将组分AN3B3过ODS色谱柱，用甲醇/水梯度洗脱得到20个馏分(AN3B3-1～AN3B3-20)。组分AN3B3-18经半制备液相以70%甲醇/水等度洗脱制备得化合物8(tR=20 min，20.0 mg)。组分AN3B3-12经半制备液相(30%→70%乙腈/水)制备得到化合物9(tR=32 min，4.4 mg)。组分AN3B3-10经半制备液相(45%→80%甲醇/水)制备得到化合物13(tR=31 min，3.2 mg)。

将组分AN3B4过ODS色谱柱，用甲醇/水梯度洗脱得到15个馏分(AN3B4-1～AN3B4-15)。组分AN3B4-10经半制备液相以55%甲醇/水等度洗脱制备得化合物1(tR=34 min，10.3 mg)。组分AN3B4-15以(30%→95%乙腈/水)为流动相经半制备液相制备得到化合物2(tR=32 min，3.5 mg)、3(tR=34 min，4.6 mg)、4(tR=40 min，3.5 mg)和7(tR=31 min，6.1 mg)。组分AN3B4-11经半制备液相(20%→65%乙腈/水，0→50 min)制备得到化合物5(tR=38 min，5.6 mg)。组分AN3B4-12(35%→80%乙腈/水，0→50 min)制备得化合物6(tR=28 min，2.1 mg)。组分AN3B4-6以(10%→50%乙腈/水，0→50 min)为流动相经半制备液相制备得到化合物10(tR=24 min，21.0 mg)和11(tR=33 min，3.3 mg)。组分AN3B4-8经半制备液相以(10%→70%乙腈/水)洗脱制备得化合物12(tR=30 min，1.4 mg)。

1.2.2 细胞毒性测定

取对数生长期的HepG2细胞以8 × 103个细胞/孔加入96孔板，将板放入CO2培养箱中，37 ℃、5% CO2，孵育24 h，弃去96孔板中培养基，在平板中加入配制好的待测药物(最终浓度为50 μmol/L)、空白组(只含DMEM培养基)、对照组(含有细胞的培养液)，每个待测药物设3个复孔，每孔加入完全培养基为100 μL，孵育48 h。然后再各加入10 μL CCK-8溶液，将平板放入CO2培养箱中，37 ℃、5% CO2，孵育2 h，酶标仪测定450 nm波长的吸光度，按如下公式计算细胞存活率。

细胞存活率=

1.2.3 化合物降糖活性筛选

用胎牛血清和高糖DMEM基础培养基配置含10%胎牛血清的完全培养基进行HepG2细胞的培养。取对数生长期的HepG2细胞，经过消化、离心、重悬、计数后，接种于96板中(4×103个/孔)，37 ℃培养12 h后弃去上清液，分别加入含有不同浓度的棕榈酸(PA，0、1、10、100、200、250、350 μmol/L)培养基，培养24 h后用CCK-8法检测细胞活力，实验重复3次。确定对HepG2细胞无损伤作用的棕榈酸浓度以便进行下一步实验。

取对数生长期的HepG2细胞，经过消化、离心、重悬、计数后，铺入24孔板，培养12 h后，换入上一步实验得出的非损伤性浓度的棕榈酸溶液对细胞进行诱导，培养24 h后收取细胞上清，利用葡萄糖检测试剂盒检测其中的葡萄糖含量；收取上清后换入含1×10-7mol/L胰岛素的基础培养基继续培养24 h，然后以同法检测其中的葡萄糖含量，以使上清葡萄糖含量显著升高作为确定诱导浓度。最后根据本部分实验设定在PA 200 μmol/L处理建立慢性炎症HepG2胰岛素抵抗细胞模型。实验分组：空白组(只含DMEM培养基)、对照组(CON，含细胞和DMEM培养基)、PA模型组(含PA)、阳性组罗格列酮(ROSI)和不同化合物干预PA组。每组设6复孔，各组做相应处理后于培养箱内培养24 h，用葡萄糖临床试剂盒检测培养基上清液中的葡萄糖含量，实验重复3次，检测化合物对HepG2各组细胞葡萄糖摄取的影响，按如下公式计算葡萄糖消耗量。

葡萄糖消耗量=空白组葡萄糖含量-实验组每孔剩余葡萄糖含量

2 结果

2.1 结构鉴定

化合物1无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z403 [M + Na]+，分子式C20H28O7；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.18(1H，m，H-3′)，5.92(1H，d，J=6.0 Hz，H-2)，5.89(1H，d，J=6.0 Hz，H-3)，5.24(1H，m，H-8)，4.30(1H，m，H-6)，2.75(1H，d，J=11.0 Hz，H-5)，2.38(1H，m，H-11)，2.30(1H，m，H-7)，2.24(1H，m，H-9a)，2.03(3H，dd，J=7.0，1.5 Hz，H-4′)，1.93(3H，m，H-5′)，1.80(1H，m，H-9b)，1.45(3H，s，H-15)，1.28(3H，d，J=7.0 Hz，H-13)，1.14(3H，s，H-14))；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：91.4(C-1)，134.3(C-2)，140.8(C-3)，83.1(C-4)，52.3(C-5)，76.3(C-6)，43.0(C-7)，66.2(C-8)，41.0(C-9)，79.3(C-10)，32.3(C-11)，177.6(C-12)，12.9(C-13)，23.2(C-14)，24.2(C-15)，167.0(C-1′)，126.9(C-2′)，140.8(C-3′)，16.1(C-4′)，20.8(C-5′)。以上数据与文献[9]报道一致，故鉴定化合物1为[3S-[3α,3aα,4α(Z),6α,6aα,9α,9aα,9bβ]],2-butenoic acid,2-methyl-2,3,3a,4,5,6,6a,9,9a,9b-decahydro-6,6a,9-trihydroxy-3,6,9-trimethyl-2-oxoazuleno[4,5-b]furan-4-yl ester。

化合物2无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z259 [M + Na]+，分子式C15H24O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：9.36(1H，s，H-14)，6.59(1H，m，H-6)，3.48(1H，dd，J=11.5，4.0 Hz，H-10)，2.97(1H，dd，J=15.0，6.0 Hz，H-8a)，2.24(1H，dd，J=10.0，5.0 Hz，H-5)，2.03(1H，m，H-4)，1.92(1H，m，H-8b)，1.86(1H，m，H-3a)，1.78(1H，m，H-9a)，1.62(1H，m，H-11)，1.50(1H，m，H-3b)，1.49(1H，m，H-2a)，1.25(1H，m，H-2b)，1.25(1H，m，H-9b)，0.90(3H，t，J=7.0 Hz，H-12)，0.88(3H，t，J=7.0 Hz，H-13)，0.73(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：49.5(C-1)，39.6(C-2)，25.0(C-3)，51.0(C-4)，50.4(C-5)，159.6(C-6)，143.6(C-7)，19.6(C-8)，29.0(C-9)，83.4(C-10)，32.3(C-11)，19.5(C-12)，21.6(C-13)，193.2(C-14)，13.5(C-15)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定化合物2为10β-hydroxyisodauc-6-en-14-al。

化合物3无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z261 [M + Na]+，分子式C15H26O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.51(1H，d，J=4.5 Hz，H-6)，4.02(2H，s，H-14)，3.48(1H，dd，J=11.5，4.0 Hz，H-10)，2.82(1H，m，H-8a)，2.54(1H，m，H-9a)，2.42(1H，m，H-11)，2.28(1H，m，H-4)，2.28(1H，m，H-5)，2.07(1H，m，H-8b)，1.80(1H，m，H-9b)，1.50(1H，m，H-2a)，1.50(1H，m，H-3a)，1.35(1H，m，H-2b)，1.35(1H，m，H-3b)，1.26(3H，s，H-15)，0.91(3H，t，J=7.0 Hz，H-12)，0.88(3H，t，J=7.0 Hz，H-13)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：47.9(C-1)，38.5(C-2)，26.7(C-3)，46.8(C-4)，44.3(C-5)，126.6(C-6)，138.8(C-7)，25.3(C-8)，28.8(C-9)，83.2(C-10)，28.9(C-11)，23.4(C-12)，19.7(C-13)，67.7(C-14)，13.6(C-15)。以上数据与文献[11]报道一致，故鉴定化合物3为isodauc-6-ene-10β,14-diol。

化合物4无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z259 [M + Na]+，分子式C15H24O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：9.36(1H，s，H-14)，6.64(1H，m，H-6)，3.48(1H，dd，J=11.5，4.0 Hz，H-10)，2.80(1H，m，H-8a)，2.73(1H，m，H-8b)，2.53(1H，m，H-9a)，2.51(1H，m，H-9b)，2.46(1H，m，H-5)，2.22(1H，m，H-4)，1.85(1H，m，H-2a)，1.85(1H，m，H-3a)，1.66(1H，m，H-11)，1.43(1H，m，H-2b)，1.43(1H，m，H-3b)，1.35(3H，s，H-15)，0.94(3H，d，J=7.0 Hz，H-12)，0.94(3H，d，J=7.0 Hz，H-13)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：48.8(C-1)，39.0(C-2)，24.5(C-3)，49.7(C-4)，49.2(C-5)，159.3(C-6)，143.2(C-7)，19.0(C-8)，28.5(C-9)，82.8(C-10)，31.9(C-11)，19.0(C-12)，21.2(C-13)，192.8(C-14)，13.0(C-15)。以上数据与文献[10]报道一致，故鉴定化合物4为aphanamol II。

化合物5无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z261 [M + Na]+，分子式C15H26O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.02(1H，s，H-15a)，4.74(1H，s，H-15b)，3.71(1H，t，J=10.0 Hz，H-6)，3.42(1H，dd，J=11.5，5.0 Hz，H-1)，2.33(1H，ddd，J=13.0，5.0，2.0 Hz，H-3a)，2.24(1H，m，H-11)，2.07(1H，td，J=13.5，5.0 Hz，H-3b)，1.91(1H，m，H-9a)，1.86(1H，m，H-2a)，1.75(1H，d，J=10.0 Hz，H-5)，1.55(1H，m，H-2b)，1.52(1H，m，H-8a)，1.30(1H，m，H-7)，1.23(1H，m，H-8b)，1.16(1H，m，H-9b)，0.95(3H，d，J=7.0 Hz，H-12)，0.87(3H，d，J=7.0 Hz，H-13)，0.70(3H，s，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：79.3(C-1)，32.1(C-2)，35.2(C-3)，146.4(C-4)，56.0(C-5)，67.1(C-6)，49.5(C-7)，18.3(C-8)，36.4(C-9)，41.8(C-10)，26.1(C-11)，21.2(C-12)，16.3(C-13)，11.7(C-14)，108.0(C-15)。以上数据与文献[12]报道一致，故鉴定化合物5为ent-4(15)-eudesmene-1β,6α-diol。

化合物6无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z257 [M + Na]+，分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.13(1H，s，H-12a)，5.01(1H，s，H-12b)，4.18(2H，s，H-13)，2.80(1H，m，H-6a)，2.53(1H，m，H-2a)，2.40(1H，m，H-7)，2.13(1H，m，H-2b)，2.09(1H，m，H-6b)，1.82(1H，m，H-8a)，1.77(3H，d，J=1.0 Hz，H-15)，1.73(1H，m，H-1)，1.73(1H，m，H-8b)，1.67(1H，m，H-9a)，1.44(1H，m，H-1)，1.44(1H，m，H-9b)，1.24(3H，s，H-14)。以上数据与文献[13]报道一致，故鉴定化合物6为12-羟基-α-香附酮。

化合物7无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z257 [M + Na]+，分子式C15H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：4.79(2H，m，H-12)，3.83(1H，d，J=12.5 Hz，H-1)，2.80(1H，dt，J=14.5，2.5 Hz，H-6a)，2.65(1H，dd，J=16.5，5.0 Hz，H-2a)，2.57(1H，dd，J=16.5，12.5 Hz，H-2b)，2.16(1H，m，H-9a)，2.10(1H，m，H-6b)，2.02(1H，m，H-7)，1.79(3H，s，H-13)，1.78(3H，s，H-15)，1.75(1H，m，H-8a),1.58(1H，m，H-8b)，1.36(1H，m，H-9b)，1.18(3H，s，H-14)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：74.7(C-1)，42.6(C-2)，197.3(C-3)，129.8(C-4)，161.6(C-5)，33.0(C-6)，45.2(C-7)，26.7(C-8)，37.9(C-9)，41.4(C-10)，149.1(C-11)，109.6(C-12)，20.8(C-13)，16.4(C-14)，11.1(C-15)。以上数据与文献[14]报道一致，故鉴定化合物7为lβ-羟基-α-香附酮。

化合物8无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z261 [M + Na]+，分子式C15H26O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.94(1H，dd，J=17.0，10.5 Hz，H-2)，5.38(1H，dd，J=17.0，1.5 Hz，H-1a)，5.20(1H，dd，J=8.5，1.0 Hz，H-6)，5.18(1H，dd，J=10.5，1.5 Hz，H-1b)，5.07(1H，ddd，J=7.0，5.5，1.5 Hz，H-10)，4.63(1H，m，H-5)，2.07(2H，m，H-8)，1.98(2H，m，H-9)，1.83(1H，dd，J=14.5，11.0 Hz，H-4a)，1.68(3H，s，H-14)，1.63(3H，s，H-13)，1.59(3H，s，H-12)，1.53(1H，dd，J=14.5，2.0 Hz，H-4b)，1.23(3H，s，H-15)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：112.7(C-1)，144.2(C-2)，74.1(C-3)，47.1(C-4)，67.4(C-5)，127.6(C-6)，138.1(C-7)，39.5(C-8)，26.5(C-9)，123.9(C-10)，131.9(C-11)，25.8(C-12)，17.8(C-13)，16.7(C-14)，30.2(C-15)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物8为(E)-3,7,11-trimethyl-1,6,10-dodecatriene-3,5-diol。

化合物9无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z277 [M + Na]+，分子式C15H26O3；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.94(1H，dd，J=17.0，10.5 Hz，H-2)，5.57(1H，dd，J=14.5，7.5 Hz，H-9)，5.56(1H，d，J=16.0 Hz，H-10)，5.38(1H，dd，J=17.0，1.5 Hz，H-1a)，5.22(1H，dd，J=8.5，1.0 Hz，H-6)，5.17(1H，dd，J=10.5，1.5 Hz，H-1b)，4.63(1H，m，H-5)，2.67(2H，d，J=6.5 Hz，H-8)，1.84(1H，dd，J=15.0，11.0 Hz，H-4a)，1.62(3H，d，J=1.0 Hz，H-14)，1.53(1H，dd，J=15.0，2.0 Hz，H-4b)，1.31(3H，s，H-12)，1.31(3H，s，H-15)，1.28(3H，s，H-13)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：112.8(C-1)，114.0(C-2)，74.2(C-3)，47.0(C-4)，67.3(C-5)，128.3(C-6)，136.7(C-7)，42.2(C-8)，124.4(C-9)，140.2(C-10)，70.8(C-11)，30.3(C-12)，30.3(C-13)，16.7(C-14)，30.0(C-15)。以上数据与文献[15]报道一致，故鉴定化合物9为2,6,10-trimethyl-3,6,11-dodecatriene-2,8,10-triol。

化合物10无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z197 [M + H]+，分子式C11H16O3；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：5.68(1H，s，H-10)，4.32(1H，m，H-5)，2.46(1H，m，H-6a)，1.98(1H，m，H-6b)，1.78(1H，m，H-4a)，1.78(3H，s，H-7)，1.52(1H，m，H-4b)，1.46(3H，s，H-1)，1.27(3H，s，H-2)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：26.6(C-1)，27.1(C-2)，36.1(C-3)，45.7(C-4)，66.9(C-5)，47.4(C-6)，36.1(C-7)，86.9(C-8)，172.1(C-9)，113.0(C-10)，182.7(C-11)。以上数据与文献[16]报道一致，故鉴定化合物10为黑麦草内酯。

化合物11无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z169 [M + H]+，分子式C10H16O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：9.44(1H，s，H-7)，6.83(1H，m，H-2)，2.51(2H，m，H-6)，2.17(2H，m，H-3)，2.05(2H，m，H-5)，1.62(1H，m，H-4)，1.21(3H，s，H-9)，1.21(3H，s，H-10)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：141.6(C-1)，151.2(C-2)，28.2(C-3)，44.9(C-4)，22.3(C-5)，22.8(C-6)，194.0(C-7)，72.5(C-8)，27.1(C-9)，27.3(C-10)。以上数据与文献[17]报道一致，故鉴定化合物11为8-hydroxyphellandra。

化合物12无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z209 [M + H]+，分子式C13H20O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：6.53(1H，dd，J=16.0，10.0 Hz，H-7)，6.10(1H，d，J=16.0 Hz，H-8)，5.63(1H，br s，H-4)，4.27(1H，s，H-3)，2.50(1H，d，J=10.0 Hz，H-6)，2.26(3H，s，H-10)，1.84(1H，dd，J=13.5，6.0 Hz，H-2a)，1.62(3H，s，H-13)，1.41(1H，dd，J=13.5，6.0 Hz，H-2b)，1.03(3H，m，H-11)，0.89(3H，s，H-12)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：34.0(C-1)，44.0(C-2)，65.6(C-3)，126.0(C-4)，135.0(C-5)，54.4(C-6)，147.3(C-7)，133.8(C-8)，199.0(C-9)，27.0(C-10)，29.5(C-11)，24.8(C-12)，22.8(C-13)。以上数据与文献[18]报道一致，故鉴定化合物12为(3R,6R,7E)-3-hydroxy-4,7-megastigmadien-9-one。

化合物13无色油状(甲醇)；ESI-MS：m/z245 [M + Na]+，分子式C14H22O2；1H NMR(500 MHz，CDCl3)δ：2.55(2H，m，H-8)，2.17(3H，s，H-14)，2.13(1H，m，H-1a)，2.06(2H，m，H-2)，2.03(1H，t，J=6.0 Hz，H-1b)，1.85(1H，dd，J=9.5，5.0 Hz，H-10)，1.78(1H，m，H-11)，1.73(1H，ddd，J=10.0，7.0，3.5 Hz，H-7a)，1.65(1H，m，H-7b)，1.64(1H，m，H-4)，0.91(3H，d，J=4.0 Hz，H-12)，0.90(3H，d，J=4.0 Hz，H-13)，0.67(1H，m，H-6)；13C NMR(125 MHz，CDCl3)δ：23.07(C-1)，32.9(C-2)，214.4(C-3)，34.6(C-4)，30.1(C-5)，46.5(C-6)，24.9(C-7)，41.8(C-8)，208.9(C-9)，28.05(C-10)，31.15(C-11)，19.70(C-12)，19.34(C-13)，30.1(C-14)。以上数据与文献[19]报道一致，故鉴定化合物13为saniculamoid D。

化合物1～13的化学结构见图1。

图1 化合物1～13的化学结构Fig.1 The chemical structures of compounds 1-13

2.2 化合物降糖活性筛选

从高山蓍的二氯甲烷部位中分离纯化得到化合物1～13，在棕榈酸诱导的HepG2-IR细胞模型上进行了细胞耗糖量的活性筛选。采用CCK-8试剂盒检测化合物1～13(50 μmol/L)和不同浓度棕榈酸的细胞毒性，结果显示，250 μmol/L棕榈酸为HepG2细胞生存的最大剂量(细胞活力 >90%)。不同浓度(0～350 μmol/L)的棕榈酸处理可降低HepG2细胞的葡萄糖消耗，200 μmol/L的棕榈酸处理可显著降低HepG2细胞的葡萄糖消耗(见表1)。化合物1～13(50 μmol/L)作用24 h，对HepG2细胞无明显的细胞毒性，并且对分离鉴定的13个化合物在棕榈酸(200 μmol/L)诱导的HepG2-IR细胞模型上进行了细胞耗糖量的活性筛选(见表2)，结果显示化合物5、9和10(50 μmol/L)具有良好的逆转胰岛素抵抗活性。

表1 不同浓度棕榈酸的细胞毒性和葡萄糖消耗量Table 1 Cytotoxicity and glucose consumption in different concentrations of palmitic acid

表2 化合物1～13的细胞毒性和葡萄糖消耗量Table 2 Cytotoxicity and glucose consumption of compounds 1～13

续表2(Continued Tab.2)

3 结论

运用现代技术对菊科植物高山蓍的二氯甲烷部位进行提取分离，得到单体化合物13个。化合物1～4、6、8和10～13为首次从该属植物中分离得到，化合物5、7和9为首次从高山蓍中分离得到。并对这些化合物在PA诱导的HepG2-IR细胞模型上进行了细胞耗糖量的活性筛选，结果显示化合物5、9和10具有良好的逆转胰岛素抵抗活性，丰富了具有降糖活性的先导化合物的种类。经查阅高山蓍的相关文献，发现化学成分类研究较少，药理方面对细胞毒性和降糖活性方面的研究极少。因此，我们对该植物进行提取分离得到单体化合物并进行降糖活性筛选，结果显示部分化合物具有明显的逆转胰岛素抵抗活性，对该植物的化学成分种类进行了丰富，并为后续学者探究其药理活性奠定基础。