非小细胞肺癌组织中KISS-1 和CBX8 的表达及相关性研究

马西淼，卢 伟，符芳永

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一，肺癌的发生和基因突变具有很大的相关性，癌基因的过度表达或抑癌基因的失活， 可以作为肿瘤治疗的突破口，从而实现个体化治疗，延长生存期。肿瘤转移抑制基因亲吻素1（KISS-1）是一种肿瘤转移抑制基因，有研究发现，其低表达与某些肿瘤的进展及不良预后相关［1-2］。色素框同源蛋白8（CBX8）在乳腺癌、胃癌、肝癌中高表达［3-4］。基于此，本研究探究KISS-1、CBX8 在NSCLC 组织中的表达及二者间的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 选取海口市人民医院（中南大学湘雅医学院附属海口医院） 胸部外科2018 ～2020 年间行肺部手术切除的存档病理标本蜡块108 例， 其中NSCLC 组织84 例，良性肺组织24 例，所有蜡块标本均来自不同病例，经甲醛固定，常规石蜡包埋处理。NSCLC 病例中，男性58 例，女性26 例；年龄41～76 岁，平均（62.8 ± 10.6）岁；吸烟指数≥400 的36例，﹤400 的48 例；鳞癌52 例，腺癌32 例；病理分化程度高、中分化病例66 例，低分化18 例；所有病例均行淋巴结清扫术，其中有淋巴结转移50 例，无淋巴结转移34 例； 按照国际抗癌联盟（UICC）2020年非小细胞肺癌TNM 分期标准，Ⅰ~ Ⅱ期病例38例，Ⅲ期病例46 例。所有病例术前均未行放疗、化疗、靶向、免疫治疗等治疗。

1.2 方法 KISS-1 抗体购自陕西爱维拉公司，CBX8 购自美国SAB 公司， 其他试剂均由海口市人民医院病理科提供。免疫组织化学S-P 法检测标本中KISS-1 和CBX8 的表达情况，并通过重复试验验证。购买抗体公司提供的阳性片为阳性对照，PBS 代替一抗为阴性对照。

1.3 结果判定 由病理科两名具有中级以上职称医师根据双盲原则及半定量分析法判定。KISS-1 蛋白染色结果评判：在细胞质内出现棕黄色颗粒即为阳性，并根据染色强度（0 分为无染色；1 分为淡黄色；2 分为棕黄色；3 分为棕褐色） 和阳性细胞百分率 （0 分为＜5%；1 分为5% ～25%；2 分为26% ～50%；3 分为51% ～74%；4 分为≥75%） 计算分数，两者的乘积为免疫组织化学染色的总得分， 得分0～3 分的判定为阴性，4 ～12 分判定为阳性［2］。CBX8评判标准：在细胞核内出现均匀一致的棕黄色颗粒即为阳性。镜下随机选取4 个×200 倍视野，每个视野计数100 个肿瘤细胞，计算400 个肿瘤细胞中的阳性细胞数。根据染色强度和阳性细胞百分率计算分数。两者积分相乘即CBX8 的表达水平：0 ～4 为阴性（低表达），5 ～12 为阳性（高表达）［3］。

1.4 统计学处理 采用SPSS21.0 统计学软件进行数据处理，计数资料采用（%）表示，率的比较用四格表资料的χ2检验； 相关性检验采用Spearman 等级分析，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 KISS-1、CBX8 在NSCLC 组织及良性肺组织中的表达情况 84 例NSCLC 组织中KISS-1 的阳性表 达 率 为44.05%（37/84），24 例 良 性 肺 组 织 中KISS-1 的阳性表达率为100%（24/24），两者差异有统计学意义（χ2=23.78，P ＜0.01）。84 例NSCLC 组织中CBX8 的阳性表达率为61.90%（52/84），24 例良性肺组织中CBX8 的阳性表达率为16.67%（4/24），两者差异有统计学意义（χ2=7.65，P ＜0.05）。

2.2 KISS-1、CBX8 的表达与肿瘤的生物学特征之间的关系 KISS-1 的表达与患者的性别、 抽烟指数、肿瘤类型以及癌组织分化程度之间无相关性（P＞0.05），与淋巴结转移（χ2=5.06，P ＜0.05）、肿瘤临床分期（χ2=7.65，P ＜0.05）有明显相关性。CBX8 的表达与患者性别、抽烟指数、肿瘤类型以及癌组织分化程度之间无相关性（P ＞0.05），与淋巴结转移（χ2=8.58，P ＜0.05）、 肿瘤临床分期 （χ2=5.20，P ＜0.05）有明显相关性，见表1。

表1 KISS-1、CBX8 的表达与肿瘤生物学特征之间的关系

2.3 KISS-1 和CBX8 表达的相关性 NSCLC 中KISS-1 和CBX8 的表达均为阳性有15 例， 均为阴性有10 例。两者的表达呈负相关性（r=-0.341，P ＜0.05，表2）。

表2 NSCLC 中C-myc 和Artemin 表达的相关性（例）

3 讨论

KISS-1 是在人黑色素细胞株中发现的一种抑瘤基因，其是一种单纤丝蛋白，能抑制肿瘤细胞的趋化性及侵袭性，从而限制肿瘤细胞的迁移，肿瘤的转移和预后与KISS-1 的表达下调密切相关［5-7］。研究发现，该基因抑制肿瘤的可能机制是：通过Gq蛋白耦联途径，通过MAPK 途径抑制细胞的移形能力，下调MMP-9 活性抑制细胞的移形能力，与SH-3 介导的信号转导有关［8］。

色素框同源蛋白8（CBX8）是PcG 蛋白家族的重要组成部分，与细胞的分化、修复继续衰老的关系非常密切［9-10］。CBX8 是一种转录抑制因子，通过基因位点INK4A/ARF 途径抑制细胞的增殖， 在许多肿瘤组织中呈高表达［11-12］。

本研究发现KISS-1 在NSCLC 组织中的表达明显低于良性肺组织， 无淋巴结转移、 分期早的NSCLC 组织中KISS-1 的表达明显高于有淋巴结转移、分期晚的NSCLC 组织。表明KISS-1 蛋白的低表达发生在癌变早期阶段， 其低水平表达促进NSCLC 的发生、发展、转移，发挥类似癌基因样作用， 提示可将KISS-1 蛋白的表达情况作为NSCLC的临床分期指标，并用于判断预后。CBX8 在NSCLC组织中的表达明显高于良性肺组织， 分化程度好、无淋巴结转移、分期早的NSCLC 组织中CBX8 的表达明显高于分化程度差、有淋巴结转移、分期晚的NSCLC 组织， 提示CBX8 有应用于NSCLC 的临床诊断、病情进展和疗效监测的潜在价值。统计学表明，二者的表达呈负相关性，但二者间表达呈负相关性的机制仍不明， 国内外也缺乏相关的报道，推测可能与癌基因的通道机制有关，这可以作为下一步本实验深入研究的方向。

许多研究发现KISS-1 和CBX8 在人类多种恶性肿瘤发生发展过程中发挥了重要作用，但其详细的作用机制及其调控尚未完全明了。深入研究KISS-1 和CBX8 对恶性肿瘤的生物学作用，明确其在肿瘤中的作用及分子机制，可能对肿瘤的治疗与预后判断有着潜在价值。目前，KISS-1、CBX8 与肿瘤的研究仍处于初级阶段，其在肿瘤中的作用及机制仍需进一步探索。