高危型HPV 病毒载量在不同年龄段宫颈癌筛查中的应用研究

李小华，门 楠，李莹莹，冬国友，杨向君

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤之一，其发病率在中国女性恶性肿瘤中位居第2 名［1］。宫颈癌是宫颈癌严重威胁着女性健康，最近研究表明，中国宫颈癌的新发病例数与死亡数正逐年升高，并有向年轻成年女性群体发展的趋势［2］。所以及时、广泛、有效的宫颈癌筛查成为降低宫颈癌发病率的有效手段。目前，HC2-HPV 检测方法是唯一一个被世界卫生组织（WHO）认可的、有统一的阳性判定标准的人类乳头瘤病毒（HPV）检测方法，且能够进行13 种常见高危型HPV 定量测定，比传统细胞学检测方法更敏感［3］。但是由于HPV 病毒载量在不同年龄段的人群中存在差异，且不同程度的HPV 载量在不同年龄段中引起宫颈癌前病变的致病力不同，常常在对特定年龄患者进行诊治时，出现错误地对携带实际高危险程度的HPV 载量患者进行过分保守治疗或者对实际低危险程度的HPV 载量患者进行过度治疗的情况，给临床工作带来困难［4-6］。同时，宫颈癌的发生率与HPV 病毒感染率也受到环境、地区、习俗、生活习惯的影响，在我国呈现出分区分布的特点，所以区域性诊疗标准的研究具有重要的现实意义。本研究选取河北地区HPV 阳性患者来进行分析，为了更好对不同年龄段人群进行统计分析， 本研究以30和50 岁为分界值，将人群按照年龄分为3 组，探讨不同年龄段，尤其是低年龄（ ＜30 岁）与高年龄（ ＞50 岁）段，高危型HPV 感染者病毒载量与不同宫颈病变的关系。

1 对象与方法

1.1 对象 选取2016 年～2020 年首次来唐山市妇幼保健院妇科门诊进行宫颈癌筛查并进行HC2-HPV 检测显示阳性患者1 338 例，所有患者年龄均＞ 18 岁，且愿意接受宫颈活检。排除标准：严重精神疾病；有过宫颈疾病治疗史；妊娠期、哺乳期。同时在样本采集与检测前， 受检患者24 h 禁止性生活、阴道清洗及阴道内用药。将所有研究对象按年龄分为低年龄组（≤30 岁）702 例、中年龄组（30 ～50 岁）351 例、高年龄组（≥50 岁）285 例。

1.2 方法

1.2.1 HPV 病毒载量检测 用第二代杂交捕获法（HC2）来检测患者HPV 病毒载量，主要为依次进行裂解、杂交、捕获、信号放大及分析处理等步骤，并计算相对光单位（RLU）比标准阳性（CO）的比值（RUL/CO）， 以RUL/CO 值 ＞ 1.0 为阳性来分析结果［7］；以100 RUL/CO 作为低病毒载量与高病 毒载量的分界标准［8］。

1.2.2 宫颈病理活检 月经结束后3 ～7 d，禁止局部用药与性生活，用阴道窥器充分暴露宫颈，用活检钳在宫颈3 点、6 点、9 点、12 点处各咬取一块，所有组织均用10%的甲醛固定。进行常规脱水、包埋、制片、HE 染色等，由病理师做出临床病理诊断。活检结果与相应宫颈上皮瘤变等级分别为：低级别宫颈鳞状上皮内病变LSIL（CIN1）；高级别宫颈鳞状上皮内病变HSIL（CIN2-3）；宫颈癌（Ca）。最终以病理活检结果作为检测宫颈病变等级的金标准。脱水机，染色机，切片机来自于Thermo Fisher Scientific公司；石蜡包埋机购买于孝感市孝感市宏业医用仪器有限公司；漂片机购买于常州市中威电子仪器有限公司。

1.3 统计学处理 采用SPSS 23.0 统计学软件对检验数据进行分析，不同组病毒载量的比较采用双向t 检验、卡方检验，在低年龄组及高年龄组组内进行卡方检验。计量资料由（±s）表示，计数资料由（%）表示；以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄段HPV 阳性患者病毒载量比较 中年龄组病毒载量为（358.93 ± 132.45）RUL/CO，低年龄组病毒载量为（574.24 ± 97.63）RUL/CO，高年龄组病毒载量为（472.48 ± 154.72）RUL/CO。低龄组、高年龄组与中龄组病毒载量比较，差异有统计学意义（t=26.219、7.686，P ＜0.001）。与中年龄组和高年龄组相比，低年龄组有着更高比例的低病毒载量病例数， 差异有统计学意义 （χ2=36.488、4.723，P ＜0.05），而高年龄组和中年龄组的病毒载量分布差异无统计学意义（P ＞0.05）。见表1。

表1 不同年龄段HPV 阳性女性患者中病毒载量程度分布［例（%）］

2.2 低、高年龄组患者病毒载量与宫颈活检结果的相关分析 HC2 检测及宫颈活检结果表示，在低年龄组，即30 岁以下HPV 阳性患者中，低病毒载量患者共有520 例，其中CIN1 级病变例数为386 例，占74.2%；CIN2 ~ 3 级病变为132 例， 占25.4%；Ca 病变例数为2 例，占0.4%。高病毒载量患者共有182例， 其中CIN1 级病变例数为110 例， 占60.4%；CIN2 ~ 3级病变为68 例，占37.4%；Ca 病变例数为4 例，占2.2%。卡方检验结果显示在低年龄组内，低病毒载量与高病毒载量宫颈病变类型分布差异有统计学意义（χ2=15.604，P=0.02）。在高年龄组，即50岁以上HPV 阳性患者中，低病毒载量患者共有129例，其中CIN1 级病变例数为30 例，占23.2%；CIN2~ 3 级病变为43 例， 占33.3%；Ca 病变例数为56例， 占43.4%。高病毒载量患者共有156 例， 其中CIN1 级病变例数为60 例，占38.5%；CIN2 ~ 3 级病变为76 例， 占48.7%；Ca 病变例数为20 例，占12.8%。卡方检验结果显示在低年龄组内，低病毒载量与高病毒载量宫颈病变类型分布差异有统计学意义（χ2=33.951，P ＜0.001）。见表2。

表2 低年龄组、高年龄组HPV 阳性患者病毒载量与宫颈活检结果的分析［例（%）］

3 讨论

随着社会的发展和人们生活水平的提高，宫颈癌对女性健康的影响越来越受到关注。持续人类乳头瘤病毒（HPV）感染是宫颈癌和宫颈上皮内瘤变的主要致病因子， 是宫颈癌的主要病因［9］。高危型HPV 的感染可能是一过性的，只有持续感染才会造成宫颈病变乃至癌症，及早发现宫颈HPV 感染并及时治疗宫颈上皮内瘤变，能够大幅度减少宫颈癌的发生［10-12］。因此在宫颈癌筛查工作过程中，及时的HPV 检测是十分有意义的。在发达国家已经全面普及高危型HPV 检测， 我国近两年才逐步意识到HPV 检测的重要性， 缺乏HPV 检测方法在我国人群的临床参考数据，影响到了宫颈癌筛查工作的推广和临床应用。

在临床宫颈癌筛查工作中发现，不同年龄段的女性HPV 病毒携带量不同， 宫颈癌与CIN 的发病率有很大差异。这可能与HPV 病毒在不同年龄段女性中致病性不同有关，病毒载量在宫颈癌筛查过程中对于不同年龄患者的意义不同。本研究分析结果表明，30 岁以下及50 岁以上患者的平均HPV 病毒携带量与30 ～50 岁患者相比有显著差异， 这可能是导致不同年龄女性宫颈癌与CIN 的发病率不同的原因之一。在30 岁以下人群中，低载量患者占比达到了74.1%，只有25.9%的高病毒载量携带者，而分析结果表明高载量患者宫颈上皮瘤变程度更严重。而在50 岁以上人群中，低病毒载量导致的宫颈上皮病变更严重。

以往研究分别研究了不同年龄段病毒载量差异以及不同病毒载量的致病性，本研究同时分析病毒载量在不同年龄段中所导致宫颈上皮瘤变的致病力，提供了更加细致的研究结果。提出30 岁以下大多数患者保持低病毒载量，而病毒载量越高意味着更高的病变程度。50 岁以上人群中则有着更多的高病毒载量患者。本研究结果显示50 岁以上患者人群中低病毒载量导致更高的致病力，这与之前的研究有所冲突，既往研究普遍认为在所有年龄段中高病毒载量导致更严重的病变，这可能与不同地区样本收集以及对不同年龄患者数据分析方法有关，仍需后续对特定年龄患者进行更加深入的针对性分析。

综上所述， 在对低年龄患者进行宫颈筛查时，应加强对高病毒载量病例的关注，而对于高年龄患者进行宫颈筛查时， 不能忽视病毒载量较低的患者，加强临床宫颈筛查和诊治的针对性。本研究为临床宫颈筛查工作提供了数据指导，并为进一步探索年龄因素在宫颈癌筛查中的影响提供了理论支持。