直肠癌组织中COX-2、TCF-4、Ki67 表达水平与其根治术后复发转移的关系分析

阿布都维力·阿布都热合曼，阿洪江·买尔甫，高维鸽

直肠癌（Rectal cancer，RC）是直肠和肛管组织细胞基因的病理性改变所引起的消化道恶性肿瘤，临床上治疗以根治性手术为主，其预后较好，清灶彻底，但手术创伤大，部分患者术后仍存在病情复发或转移现象，是导致患者死亡的重要原因［1-2］。既往报道指出，环氧化酶-2（COX-2）、T 细胞因子4（TCF-4）和肿瘤增殖抗原（Ki67）在RC 组织中的表达可能与其不良预后相关，但目前尚无关于其与RC 根治术后复发转移的报道［3-5］。故本研究拟通过测定RC 患者COX-2、TCF-4 和Ki67 表达水平， 分析其表达与术后复发转移之间的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 回顾性选取2014 年1 月～2017 年06 月于新疆维吾尔自治区人民医院行根治术的193 例RC 患者。其中男97 例，女96 例；年龄43 ～75 岁，平均年龄（52.67 ± 7.62）岁；复发转移21 例，无复发转移172 例。纳入标准：（1）诊断标准符合《结直肠癌诊疗规范（2010 年版）》，病理学检查确诊为RC［6］；（2）患者均行根治性手术；（3）无放疗、化疗史。排除标准：（1）伴有其他急性或慢性疾病；（2）精神异常致沟通障碍；（3）临床资料不齐全。

1.2 方法 收集患者的年龄、性别等一般资料，以及肿瘤类型、直径大小、分化程度、疾病临床分期、淋巴结转移和脉管癌栓等病历信息。

1.2.1 免疫组织化学法 收集患者手术切除的癌组织和癌旁正常组织标本，置于10%中性甲醛中固定，并经石蜡进行包埋，后将石蜡组织切片，厚度为4 μm，烘干、脱蜡后分别滴加兔抗人COX-2、TCF-4 和Ki67 单克隆抗体（试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司），放置过夜后用苏木素染色，中性树胶进行封片。阳性对照为已知阳性切片，阴性对照为磷酸盐缓冲液（代替一抗）。

L2000 显微镜（广州粤显光学仪器有限责任公司，粤食药监械准字2011 第2220301 号）400 倍下对标本染色结果进行观察，每张切片随机选择5 个视野，总评分=阳性细胞所占视野内细胞百分比×细胞染色强度，最终结果取平均值。染色程度根据细胞着色强弱进行区分，分别有0 级（无色）、1 级（黄色）、2 级（棕黄色）、3 级（棕褐色）［7］。阳性细胞所占实验内细胞百分比共有4 级，0 级（0% ～5%）计0 分，1 级（6% ～25%）计1 分，2 级（26% ～50%）计2 分，3 级（51% ～75%）计3 分，4 级（75% ～100%）计4 分。COX-2、TCF-4 和Ki67 蛋白阳性表达判断：总评分≥2 分为阳性，0 ～1 分为阴性。

1.3 统计学处理 采用SPSS 21.0 统计软件处理数据，计数资料采用（%）表示，行χ2检验，采用logistics 回归分析RC 患者根治术后复发转移的独立危险因素，以P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 癌组织与癌旁正常组织COX-2、TCF-4 和Ki67 的阳性表达比较 RC 患者癌旁正常组织COX-2、TCF-4 和Ki67 的阳性表达率分别为1.05%、7.25%、13.47%， 与癌组织（45.60%、46.11%、52.33%）相比，差异具有统计学意义（P ＜0.05），见表1。

2.2 根治术后RC 患者复发转移的因素分析 行根治术后5 年内， 患者复发率为6.75%（13/193）， 转移率为4.15%（8/193），总体发生率为10.88%（21/193）。COX-2、TCF-4、Ki67在复发、转移患者中阳性表达率显著高于无复发、转移患者的阳性表达率，差异有统计学意义（P ＜0.05）见表2。单因素分析结果显示，复发组患者肿瘤分化程度、临床分期、脉管癌栓、COX-2、TCF-4 和Ki67 与无复发组比较， 差异有统计学意义（P ＜0.05）；转移组患者肿瘤分化程度、直径、COX-2、TCF-4 和Ki67 与无转移组比较， 差异有统计学意义 （P ＜0.05）。以RC 患者术后有无复发、转移的发生分组为因变量（复发/转移组赋值为1，无复发/转移组赋值为0），以上述单因素分析中具有统计学意义的计数资料为自变量，Logistic多因素分析结果显示， 肿瘤低分化、COX-2、TCF-4 和Ki67是RC 患者根治术后复发的独立危险因素 （P ＜0.05，OR ＞1）；肿瘤低分化、肿瘤直径≥5cm、COX-2、TCF-4 和Ki67 是RC 患者根治术后转移的独立危险因素 （P ＜0.05，OR ＞1）。见表3、4。

表2 直肠癌根治术后复发、转移的单因素分析［例（%）］

表3 直肠癌根治术后患者复发的logistic 多因素分析

表4 直肠癌根治术后患者转移的logistic 多因素分析

2.3 Kaplan-Meier 生存曲线 研究中193 例患者5 年内的死亡率为6.22%（12/193），Kaplan-Meier 生存曲线分析结果显示，COX-2、TCF-4 和Ki67 阳性表达组的累计生存率分别为85.70%、88.70%和87.30%，阴性表达组累计生存率分别为97.70%、96.20%和96.40%，总体平均生存率为93.80%。

3 讨论

RC 根治性手术是目前治疗的主要方法，预后良好，但其存在的复发转移仍不可忽视。因此，研究关于RC 根治术后患者发生复发转移的相关指标具有重要的临床意义［8-9］。

本研究结果表明COX-2、TCF-4 和Ki67 在RC 患者的癌组织中有异常表达现象，且阳性表达率越高，复发转移的可能性越大，提示了RC 癌组织COX-2、TCF-4 和Ki67 的阳性表达与其不良预后有关，可能是判断RC 患者根治性手术预后的标志物。COX-2 是机体合成前列腺素（Prostaglandin，PG）的限速酶，在正常组织中几乎不表达，但在受到生长因子、内皮素或肿瘤坏死因子刺激时能被诱导表达，催化下游PGE2 的合成，提高细胞核中信号传导通路的蛋白激酶水平，促进B 细胞淋巴瘤表达，抑制其凋亡［9］。TCF-4 是调节Wnt信号通路的关键因素，Wnt 信号通路能调控组织细胞的生长及周期，使细胞不断增殖形成肿瘤［10］。有学者提出TCF-4 过度表达会导致基因突变，致使弥漫性大B 淋巴瘤［11］。Ki67 是与细胞增殖相关的细胞核抗原蛋白， 存在于增殖细胞的G1、G2、S 和M 等细胞周期中， 能清晰地反映细胞的增殖状态和程度，是目前最常应用的细胞增殖抗原标记物之一［12］。本研究结果与之相符合。本研究对RC 患者术后复发转移的因素进行logistic 回归分析，结果发现患者COX-2、TCF-4 和Ki67均是其复发、 转移的独立危险因素，Kaplan-Meier 生存曲线分析结果表明COX-2、TCF-4 和Ki67 3 种因子的阳性表达能影响行RC 根治术后患者的生存率，降低生存质量。肖忠盛等［13］分析COX-2、TCF-4 的表达与大肠癌患者临床病理特征之间的关系， 结果表明两者在癌组织中的高表达与其发生、侵袭和转移有着密切关联。焦俊霞和叶晓霞［14］研究发现，Ki67 在结直肠癌中的阳性表达率明显高于正常肠黏膜组织，可作为指标对肿瘤的恶性程度进行评估。以上结论均支持了本研究的结果。

综上所述，COX-2、TCF-4 和Ki67 在RC 患者癌组织中均呈阳性表达，三者均与其根治术后的复发转移相关，可作为临床预测指标判断患者预后。