不同离心条件制备改良富血小板纤维蛋白在治疗重度慢性牙周炎作用比较

伍国生 饶坚 尹文华 刘凤琳 冷培

【摘 要】目的 比較不同离心条件下制备改良富血小板纤维蛋白（PRF）在治疗重度慢性牙周炎中的作用。方法 选取2016年9月-2021年9月于我院行翻瓣术的66例重度慢性牙周炎患者为研究对象，根据PRF制备条件分为低速制备组（n=34）和高速制备组（n=32）。低速制备组采用1500 r/min离心14 min制备改良PRF（A-PRF），高速制备组采用3000 r/min离心5 min制备改良PRF（L-PRF），比较两组离心后血清生长因子水平、临床附着丧失（CAL）及牙周探诊深度（PD）。结果 低速制备组离心后血小板源性生长因子-BB（PDGF-BB）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）及转化生长因子-β（TGF-β）水平均高于高速制备组（P<0.05）；两组术后3个月CLA和PD水平均低于术前，且低速制备组低于高速制备组（P<0.05）。结论 降低相对离心力并延长制备时间得到的A-PRF在生长因子释放性能、促进成纤维细胞增殖和迁移的作用优于L-PRF，且在促进牙周组织再生和修复中的应用价值较高。

【关键词】离心条件；富血小板纤维蛋白；重度慢性牙周炎；生长因子

中图分类号：R781.4+2 文献标识码：A 文章编号：1004-4949（2023）08-0153-04

Comparison of the Effects of Modified Platelet-rich Fibrin Prepared Under Different Centrifugal Conditions in the Treatment of Severe Chronic Periodontitis

WU Guo-sheng1， RAO Jian2， YIN Wen-hua3， LIU Feng-lin4， LENG Pei5

（Department of Laboratory Medicine1， Department of Stomatology2， Department of Neurosurgery3， Department of Joint Surgery4， Department of Cardiovascular Medicine5， Ningdu County People’s Hospital， Ningdu 342800， Jiangxi， China）

【Abstract】Objective To compare the effects of modified platelet-rich fibrin （PRF） prepared under different centrifugation conditions in the treatment of severe chronic periodontitis. Methods Sixty-six patients with severe chronic periodontitis who underwent flap surgery in our hospital from September 2016 to September 2021 were selected as subjects. According to the preparation conditions of PRF， they were divided into low-speed preparation group （n=34） and high-speed preparation group（n=32）. The modified PRF （A-PRF） was prepared by centrifugation at 1500 r/min for 14 min in the low-speed preparation group， and the modified PRF （L-PRF） was prepared by centrifugation at 3000 r/min for 5 min in the high-speed preparation group. The serum growth factor level， clinical attachment loss （CAL） and periodontal probing depth （ PD） were compared between the two groups after centrifugation. Results The levels of platelet-derived growth factor-BB （PDGF-BB）， vascular endothelial growth factor （VEGF） and transforming growth factor-β （TGF-β） in the low-speed preparation group were higher than those in the highspeed preparation group （P<0.05）. The levels of CLA and PD in the two groups at 3 months after operation were lower than those before operation， and those in the low-speed preparation group were lower than those in the high-speed preparation group （P<0.05）. Conclusion The A-PRF obtained by reducing the relative centrifugal force and prolonging the preparation time is superior to L-PRF in terms of growth factor release performance， fibroblast proliferation and migration， and has high application value in promoting periodontal tissue regeneration and repair.

【Key words】Centrifugal conditions； Platelet-rich fibrin； Severe chronic periodontitis； Growth factor

慢性牙周炎（chronic periodontitis）属于口腔中细菌微生物及细菌代谢所导致的牙周软组织、牙槽骨及牙周膜组织发生慢性可进展性的一种感染性疾病[1]，临床中主要表现为口腔内有异味、牙周袋内出现溢脓现象，以及牙龈发生不同程度的出血等，严重情况下甚至会导致牙齿脱落[2]，给患者口腔健康带来严重威胁，导致患者的生活质量降低[3]。传统治疗虽然能够对其炎症进行控制，降低病情的发展速度，但若想牙周组织继续获得再生比较困难，需要使用植骨术、组织再生术以及生长因子等联合治疗方案。富血小板纤维蛋白（platelet-rich fibrin，PRF）是继富血小板血浆的基础上衍化而来的一种自体生物材料，因其具有大量的纤维蛋白基质结构，能够使其在引导性组织再生及骨再生的过程中发挥出巨大作用[4]。但有研究显示[5]，在不同的离心条件下，会对得到的PRF的生物学特性不同，对牙周组织获得不同的再生效果。基于此，本研究結合2016年9月-2021年9月于我院行翻瓣术的66例重度慢性牙周炎患者临床资料，比较不同离心条件下制备改良PRF在治疗重度慢性牙周炎中的作用，以期为临床治疗牙周炎制备优质PRF提供参考，现报道如下。

1.1 一般资料 选取2016年9月-2021年9月于宁都县人民医院行翻瓣术的66例重度慢性牙周炎患者为研究对象。纳入标准：①均符合重度牙周炎的诊断标准；②临床资料完整；③在行翻瓣术前均完成基础性检查及治疗；④无系统性疾病。排除标准：①伴有凝血功能障碍者；②伴有吸烟、糖尿病及使用对血小板损伤的药物者；③伴有言语功能障碍者；④伴有精神类或认知功能障碍者；⑤中途退出研究者。根据PRF制备条件分为低速制备组（n=34）和高速制备组（n=32）。低速制备组男18例，女16例；年龄45～68岁，平均年龄（54.25±3.16）岁。高速制备组男19例，女13例；年龄43～70岁，平均年龄（54.69±3.23）岁。所有患者患牙均属于第一、二磨牙，且牙槽骨完全吸收根尖至1/3处，同时根分叉病变程度为Ⅱ度。两组性别、年龄比较，差异无统计学意义（P>0.05），研究可比。本研究所有患者知情同意并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1离心方法 采集两组患者术前及术后3个月清晨空腹静脉血各10 ml，将其注入离心管中，使用TD5型自动平衡离心机（盐城市凯特实验仪器有限公司，苏盐械备20150042，型号：TD5A），低速制备组采用1500 r/min离心14 min；高速制备组采用3 000 r/min离心10 min。离心完成后静置5 min备用，位于顶端少细胞将夜和低端红细胞层之间的纤维蛋白凝块为PRF。利用酶联免疫吸附试验检测两种离心后血清生长因子含量。具体步骤：①包被抗体：用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至最适浓度（1～10 μg/ml），每凹孔加0.3 ml，4 ℃过夜，或37 ℃水浴3 h，贮存冰箱（中科美菱，皖食药监械生产许20150005号，型号：DW-FL439）；②洗涤：移去包被液，凹孔用洗涤缓冲液（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批准文号：KL0364202718，规格：96 T）洗3次，5 min/次；③每凹孔加入0.2 ml用稀释缓冲液稀释的含抗原的被检标本，37 ℃作用1～2 h；④显色：加入TMB显色液（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批准文号：KL0364202718，规格：96T），室温下孵育15～30 min，直至形成典型的蓝色反应物；⑤停止反应：加入停止液（2 M的硫酸酸液）（武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，批准文号：KL0364202718，规格：96 T）停止反应，颜色由蓝色转为黄色；⑥检测：用洗板机（美国biotek，型号：ELX-800，序列号：SN207593）对各孔起反应的底物进行检测，得到OD值，计算样品中长生因子的含量。

1.2.2手术方法 所有患者在常规局麻下进行翻瓣术，平整去除其炎性肉芽组织以及龈下牙石。低速制备组与高速制备组均将自体PRF从试管直接取出然后立即植入在患牙缺损处，最后用4-0特氟龙缝合线将组织瓣严密缝合。术后连续10 d使用阿莫西林胶囊（华北制药有限公司，国药准字H13020726，规格：0.25 g）500 mg口服，3次/d，并使用含0.12%氯已定葡糖酸盐[朗力生物医药（武汉）有限公司，（鄂）卫消证字（2018）第0004号，规格：250 ml]进行漱口，防止口腔内部出现感染，术后2周拆线，所有患者接受随访3个月。

1.3 观察指标 比较两组离心后血清生长因子水平、临床附着丧失（CAL）及牙周探诊深度（PD）。①血清生长因子水平：分别于术前及术后3个月检测患者的血清血小板源性生长因子-BB（platelet-derived growthfactor，PDGF-BB）、血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）及转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）含量；②CAL与PD水平：分别于术前及术后3个月测量CAL及PD变化，其中CAL指牙周袋底至釉牙骨质界之间的距离，PD指牙周袋底至牙龈缘的距离；所有检测均由同一位资深口腔科专家进行。

1.4 统计学方法 采用SPSS 24.0统计学软件进行数据分析，计数资料以[n（%）]表示，行χ2检验；计量资料以（x-±s）表示，行t检验；P<0.05表示差异有统计学意义。

2.1 两组离心后血清生长因子水平比较 低速制备组离心后PDGF-BB、VEGF及TGF-β水平均高于高速制备组（P<0.05），见表1。

2.2 两组CLA、PD水平比较 两组术后3个月CLA、PD水平均低于术前，且低速准备组低于高速制备组（P<0.05），见表2。

临床中慢性牙周炎的发生主要是因为遭受口腔细菌病原体入侵导致[6]。和第一代的富血小板血浆相比，PRF不含有抗凝剂，能够稳定且持续性释放细胞因子，同时对细胞迁移及分化起到调节作用，进而促进牙周区域血管及其组织再生功能[7]。研究显示[8]，PRF膜可以提供含有生长因子、活性细胞以及具有三维支架结构的纤维蛋白网，因此能够有效且快速对损伤处组织起到重新修复的效果。PRF在激活状态下会释放出多种细胞因子，例如生长因子β、肿瘤坏死因子α、白细胞介素6以及血管内生长因子等，而部分因子在骨再生的过程当中起到非常重要的潜在作用，例如抑制疼痛、抗感染以及促进创伤处愈合等[9]。也有研究表明[10]，PRF不仅对口腔黏膜病灶区切除后具有一定的促进伤口愈合的效果，对退缩的牙龈还具有一定的重建作用。由此可见，PRF在骨再生、伤口预后以及抑菌上均具有一定的积极作用。但另有研究报道[11]，在离心过程中，其离心速度和离心时间对PRF的生物学结构造成一定的影响，致使PRF在组织学的临床体征上也有着一定影响。因此，探究PRF内部纤维蛋白网络疏松且血小板活化程度更高的制备方式对促进重度慢性牙周炎翻瓣术后恢复具有重要意义。生长因子是血小板中活性物质的主要组成部分，其中PDGF-BB在局部对基质干细胞、成纤维细胞有趋化作用，与TGF-β有良好的协同作用，可刺激成纤维细胞的分化、胶原蛋白合成以及血管再生；而VEGF可刺激血管内皮再生，为成纤维细胞的增殖及胶原的合成提供充足的营养物质，促进肉芽组织的生长；TGF-β可加速内皮细胞、表皮细胞增殖，调控胞外基质合成，通过对中性粒细胞和单核细胞的趋化作用介导局部的炎症反应[12，13]。

本研究结果显示，低速制备组离心后PDGF-BB、VEGF及TGF-β水平均高于高速制备组（P<0.05）；低速制备组术后3个月CLA和PD水平均低于高速制备组（P<0.05），说明在对血液标本进行离心时，离心力越大、离心时间越短，对血小板成分的破坏及白细胞成分丢失更明显，离心方式的选择对PRF内部细胞、纤维蛋白结构以及生长因子等均带来巨大的影响[14]。分析原因可能是A-PRF能够对生长因子的释放起到积极作用，随着离心力的减少，PRF内部的白细胞以及各类细胞因子数量被保留，致使在纤维蛋白的凝块中能够更好的分布，从而促进牙周组织的再生和修复[15，16]。

综上所述，PRF的生物学结构会受到离心力及离心时长的影响，对慢性牙周炎患者组织愈合也会造成一定的影响，降低相对离心力延长制备时间得到的A-PRF在生长因子释放性能、促进成纤维细胞增殖和迁移的作用优于L-PRF，A-PRF在促进牙周组织再生和修复中的应用价值较高。

[1] 季明辉，谭选平，徐婷，等.牙周炎影响下口腔微生物群落的变化及检测技术的研究进展[J].江苏医药，2021，47（3）：308-312.

[2] 罗业姣，龚仁国，陈齐，等.口炎清颗粒对慢性牙周炎患者牙周症状及炎性细胞因子水平的影响[J].现代生物医学进展，2020，20（13）：2537-2540.

[3] 聂鲡蓉，张璐，赵月亮，等.中老年慢性牙周炎患者生活质量现状及影响因素分析[J].中华老年口腔医学杂志，2022，20（5）：288-293.

[4] 杨银辉，杨帆，樊旭，等.改良型富血小板纤维蛋白膜包裹颗粒软骨移植的长期组织学改变[J].中国组织工程研究，2020，24（34）：5486-5492.

[5] 王灿莉，焦志立，孙勇，等.两种富血小板纤维蛋白对人牙龈成纤维细胞增殖活性影响的比较[J].中国组织工程研究，2019，23（7）：1007-1012.

[6] 周婷.58例微型种植体支抗在慢性牙周炎患者口腔正畸中的临床效果[J].四川医学，2019，40（6）：614-616.

[7] 孙慧颖，朱崇元，冯国栋，等.含有白细胞的富血小板纤维蛋白的生物学特性及临床应用[J].基础医学与临床，2020，40（12）：1706-1710.

[8] 唐丽宇，龚飞飞，宁晔，等.富血小板纤维蛋白和浓缩生长因子修复上颌前牙颌骨囊肿术后组织缺损的疗效观察[J].安徽医学，2022，43（4）：415-419.

[9] 王朝侠，王颖.高血压脑出血患者血清肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6与血管内皮生长因子的表达[J].临床误诊误治，2017，30（8）：86-89.

[10] 张春辉，林晓萍，靳赢，等.富血小板纤维蛋白辅助治疗牙龈退缩的临床效果及患者满意度评价[J].口腔医学，2021，41（7）：614-617.

[11] 程亚楠，徐普，毛秋华，等.离心速度对富血小板纤维蛋白生物学特性的影响.现代口腔医学杂志，2016，30（4）：204-207，190.

[12] 李艷辉，施琳颖，丁慧慧，等.富血小板血浆和血清中生长因子和抗菌肽含量的比较分析[J].中国输血杂志，2020，33（7）：647-651.

[13] 衡玥余.不同离心方式对成分血分离的影响[J].求医问药（学术版），2012，10（3）：262.

[14] 郭建茹，冯妍，娄会杰，等.PRF联合龈下刮治、根面平整术治疗慢性牙周炎临床效果分析[J].中国美容医学，2022，31（8）：160-163.

[15] 谢慧，朱万权，解永富，等.A-PRF与I-PRF在前牙位点保存中应用效果的初步研究[J].中国美容医学，2018，27（4）：88-90.

[16] 周炜丹.探究CGF与PRF在牙周炎患牙位点保存治疗中的效果[J].现代口腔医学杂志，2020，34（2）：82-85.

编辑 扶田