霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠的保护作用研究

姚静，刘翠玲，孙辉，何秋婷，梁奇（广州中医药大学附属宝安中医院，广东 深圳 518101）

酒精性肝病（Alcoholic liver disease，ALD）是一种因长期或过量饮酒引起的肝脏疾病，临床上常表现为不同程度的肝损伤形式。ALD 的病理发展包括肝脂肪变性、脂肪性肝炎、纤维化和/或肝硬化的重叠和进展阶段，其中早期的ALD 病变是可逆的[1]，因此ALD 早期阶段的防治具有重要意义。霍山石斛（Dendrobium huoshanenseC. Z. Tang et S. J. Cheng）俗称“米斛”， 是兰科石斛属多年生草本植物，其性微寒， 味甘、淡， 具有生津止渴、益精强阴、补虚羸、除胃中虚火之功效。现代研究[2-6]表明，霍山石斛具有抗炎、抗氧化、调节脂质代谢、保肝等药理作用，对ALD、非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）、药物性肝损伤、化学性肝损伤、肝纤维化等多种肝脏疾病都有良好的治疗和预防作用。中医认为酒为大热有毒之品，易伤津液，日久必损及真阴[5]。石斛为滋阴要药，擅长滋阴补虚，尤其擅长治疗酒毒诱发的脾肾阴虚。名老中医施今墨认为鲜石斛甘寒汁浓，擅养胃阴、生津液、清虚热、止烦渴[6]。石斛以鲜品入药，可取其更多的汁液，以增强养阴生津、清热退热、泄热除烦之功，因而以“鲜用尤佳”。故本研究拟以慢性乙醇灌胃的方式复制酒精性肝损伤小鼠模型，比较霍山石斛鲜品药材与干品药材对慢性酒精性肝损伤模型小鼠的疗效差异，以期明确霍山石斛鲜品药材在抗酒精性肝损伤方面的优势，为其临床应用提供实验依据，促进药食两用中药鲜药的临床应用。

1 材料与方法

1.1 动物 8～10 周龄雄性C57BL/6N 小鼠60 只，SPF级，体质量（24±2）g，购自浙江维通利华实验动物技术有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（浙）2019-0001，动物质量合格证号：20220209Abzz0619000459。动物饲养于广州中医药大学动物实验中心，饲养环境：相对温度22～28 ℃，相对湿度60%，自由饮水和摄食。动物适应性饲养1 周后开始实验。本实验经广州中医药大学实验动物伦理委员会批准，批文号：20211110014。

1.2 药物及试剂 霍山石斛鲜品、干品药材分别购自安徽省六安市霍山县市场和深圳市宏盛昌中药饮片有限公司，经广州中医药大学附属宝安中医院主任中药师梁奇鉴定为兰科石斛属霍山石斛（Dendrobium huoshanenseC. Z. Tang et S. J. Cheng）的茎。霍山石斛干品水煎液制备：称取130 g 霍山石斛干品药材，浸泡30 min，常规煎煮2 次，滤过；合并2 次滤液，浓缩至生药量为0.13 g·mL-1的霍山石斛干品水煎液，冷却后分装，置于-20 ℃冰箱备用。鲜霍山石斛汁制备：称取鲜霍山石斛药材500 g，洗净后晾干水分，置于破壁机中，加入1 000 mL 水；粉碎，滤过，制成生药量为0.5 g·mL-1的鲜霍山石斛汁，分装后置于-20 ℃冰箱备用。

55°原浆酒，深圳市海望科技有限公司，批号：SC11544142400122；4%多聚甲醛组织固定液，北京兰杰柯科技有限公司，批号：21230593；二甲苯，上海麦克林生化科技有限公司，批号：C11300953；蛋白酶抑制剂混合物（批号：P1010）、Pierce BCA 蛋白定量试剂盒（批号：WK342259），均购自赛默飞世尔生物化学制品（北京）有限公司；丙氨酸转氨酶（ALT/GPT，批号：20220505）、天冬氨酸转氨酶（AST/GOT，批号：20220507）、总胆固醇（TC，批号：20220507）、甘油三酯（TG，批号：20220509）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C，批号：20220509）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C，批号：20220509）、总超氧化物歧化酶（SOD，批号：20220507）、丙二醛（MDA，批号：20220507）测定试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所；肿瘤坏死因子α（TNF-α，批号：A28220233）、白细胞介素6（IL-6，批号：A20620224）、 白 细 胞 介 素 1β（IL- 1β， 批 号：A201B20344）ELISA 检测试剂盒，均购自杭州联科生物技术股份有限公司。

1.3 主要仪器 SCIENTZ-48 型高通量组织研磨器，宁波新芝生物科技股份有限公司；BioteK 多功能酶标仪，美国伯腾公司；BX43 型光学显微镜，日本OLYMPUS 公司；SIGMA1-14K 型小型台式冷冻离心机，德国SIGMA 公司。

1.4 分组、模型复制及给药 小鼠适应性饲养1 周后，随机分为正常组、模型组、霍山石斛干品组（1.30 g·kg-1）及霍山石斛鲜品低、中、高剂量组（1.25、2.50、5.00 g·kg-1），每组10 只。每日上午按照设定剂量灌胃给药，正常组和模型组给予等体积生理盐水；每日下午，除正常组给予等体积生理盐水外，其余各组小鼠灌胃给予55°原浆酒（10 mL·kg-1），连续60 d。造模期间，每周称量并记录小鼠体质量；每周固定时间段给予每笼小鼠200 g 饲料，维持1 周不添加饲料，直至下周同一时间段称量每笼剩余饲料量，每笼小鼠磨牙饲料量忽略不计，默认差值即为每笼小鼠1 周内的摄食量。

1.5 标本采集及肝脏指数计算 造模第60 天末，称量并记录小鼠体质量；禁食不禁水12 h，麻醉后摘眼球取血，离心分离血清，分装于EP 管中，置于-80 ℃冰箱保存备用。脱颈椎法处死小鼠后，采集完整肝组织，用提前预冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干水分并去除肝脏表面杂质；测定小鼠肝脏质量，计算：肝脏指数（%）=肝脏质量（g）/体质量（g）×100%。剪取每只小鼠肝左叶组织，置于4%多聚甲醛组织固定液中固定，用于HE 染色；剩余肝组织置于-80 ℃冰箱冷冻保存。

1.6 醉酒潜伏期测定 参考相关研究[7-8]，灌胃55°原浆酒后将小鼠轻放于动物笼内，背部朝下，若小鼠在30 s 内不能自行翻转身体则为翻正反射消失，即视为进入醉酒状态。在造模最后1 周，连续记录5 d各组小鼠从灌酒到翻正反射消失的时间，作为醉酒潜伏期，并观察小鼠酒后行为学表现。

1.7 HE 染色法观察肝脏组织病理变化 剪取相同部位肝组织，置于4%多聚甲醛组织固定液中固定72 h；经脱水后，石蜡包埋，切片（5 μm），苏木素-伊红染色，中性树胶封片。于光学显微镜下观察肝脏组织病理形态学改变，并采集病理图片。

1.8 血清生化指标测定 严格按照试剂盒说明书步骤操作，检测血清中TC、LDL-C、HDL-C 含量及ALT、AST 活力。

1.9 肝脏生化指标测定 制备肝组织匀浆上清液，严格按照试剂盒说明书步骤操作，检测肝组织中的TG、MDA、SOD、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平。

1.10 统计学处理方法 采用SPSS 25.0 统计软件进行数据分析；计量资料以均数± 标准差（±s）表示；多组间比较采用单因素方差分析（One-way ANOVA），两两比较采用LSD 检验；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠醉酒潜伏期的影响 结果见表1。模型组小鼠饮酒后平衡性差，爬行时后肢无力，逐渐进入醉酒状态，翻正反射消失。与模型组相比，霍山石斛鲜/干品组小鼠的醉酒潜伏期显著延长（P＜0.01），且鲜品组呈剂量相关性。与霍山石斛干品组比较，霍山石斛鲜品高剂量组小鼠的醉酒潜伏期显著延长（P＜0.01）。结果表明，霍山石斛鲜品可减轻小鼠醉酒状态，其高剂量组作用优于霍山石斛干品组。

表1 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠醉酒潜伏期的影响（±s，n=10）Table 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on drunk incubation period in mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

表1 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠醉酒潜伏期的影响（±s，n=10）Table 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on drunk incubation period in mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

注：与模型组比较，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，ΔΔP＜0.01

醉酒潜伏期/min 15.30±2.98 21.10±5.36**38.80±4.85**63.60±3.20**ΔΔ 39.90±4.18**组别模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）-1.25 2.50 5.00 1.30

2.2 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠体质量、肝指数及摄食量的影响 结果见表2、表3。与正常组相比，模型组小鼠的体质量、摄食量显著下降（P＜0.01），肝脏指数显著上升（P＜0.01）。与模型组相比，霍山石斛鲜/干品组小鼠的体质量、摄食量均无明显改善（P＞0.05），但肝脏指数显著降低（P＜0.01）。与霍山石斛干品组相比，霍山石斛鲜品高剂量组的肝脏指数显著降低（P＜0.01）。结果表明，霍山石斛鲜品可明显抑制慢性酒精性肝损伤小鼠的肝脏指数上升，但对小鼠食欲不振、体质量下降无明显改善作用。

表2 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响（±s，n=8）Table 2 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on body mass of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=8）

表2 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响（±s，n=8）Table 2 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on body mass of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=8）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，△P＜0.05

组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）体质量/g 8 周30.7±1.3 26.2±0.6##25.9±1.3 26.3±1.5 27.4±1.8 26.6±0.8--1.25 2.50 5.00 1.30 0 周25.6±0.8 25.6±0.3 25.2±1.2 25.2±0.7 25.6±0.7 24.8±0.9 1 周26.9±0.3 22.8±0.7##23.2±1.2 24.0±1.1**24.7±1.1**△23.8±0.6*2 周26.4±0.6 23.6±0.6##23.3±1.1 23.5±1.1 24.4±1.0 23.6±0.9 3 周27.8±0.7 23.9±0.5##23.9±0.9 24.1±0.6 24.1±1.0 24.0±0.9 4 周28.6±0.7 24.0±0.5##24.1±1.2 24.6±0.6 24.7±1.0 24.5±0.8 5 周29.3±0.9 24.1±0.5##24.2±1.1 24.9±1.4 25.5±1.7*24.7±1.0 6 周29.8±0.9 25.2±0.6##25.5±1.0 25.8±1.3 26.4±1.5*25.5±1.0 7 周30.1±0.9 26.0±0.8##25.9±1.1 26.2±1.3 27.2±1.7 26.3±1.3

表3 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏指数、摄食量的影响（±s，n=10）Table 3 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver index and food intake of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

表3 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏指数、摄食量的影响（±s，n=10）Table 3 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver index and food intake of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=10）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，ΔΔP＜0.01

摄食量/g 29.14±2.88 23.37±1.27##21.69±1.07 22.68±1.86 22.56±1.66 22.71±1.42组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30肝脏指数/%4.28±0.48 5.20±0.45##4.25±0.37**4.14±0.23**3.52±0.45**ΔΔ 4.57±0.22**

2.3 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响 结果见图1。正常组小鼠肝小叶清晰，肝细胞排列整齐、结构完整。与正常组相比，模型组小鼠肝细胞基本结构消失，表现为肝细胞弥漫性肿胀，胞浆疏松化、半透明，部分肝细胞胞浆几乎完全透明呈气球样，肝窦隙狭窄，几近消失。与模型组相比，霍山石斛鲜品低剂量组和霍山石斛干品组小鼠肝细胞出现轻微的脂肪变性，霍山石斛鲜品中、高剂量组小鼠肝组织损伤明显减轻，形态结构趋近正常组。结果表明，霍山石斛鲜品能有效保护慢性酒精性肝损伤小鼠的肝脏组织病理损伤，以中、高剂量组效果明显。

图1 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝组织病理变化的影响（HE 染色，×400）Figure 1 Effect of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on liver histopathology of mice with chronic alcoholic liver injury（HE staining，×400）

2.4 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST 水平的影响 结果见表4。与正常组相比，模型组小鼠的血清ALT、AST 活力显著升高（P＜0.01），表明长期饮酒会导致肝功能出现异常。与模型组相比，霍山石斛鲜/干品组小鼠的血清ALT、AST 活力均明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。与霍山石斛干品组相比，霍山石斛鲜品中、高剂量组小鼠的血清AST 活力明显降低（P＜0.05）。结果表明，霍山石斛鲜品可有效减轻长期饮酒对肝功能的影响。

表4 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST 活力的影响（±s，n=9）Table 4 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the activity of ALT and AST in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表4 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠血清ALT、AST 活力的影响（±s，n=9）Table 4 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the activity of ALT and AST in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，ΔP＜0.05

AST/（U·L-1）15.21±0.23 21.32±0.89##18.37±0.78**16.72±0.45**Δ 16.27±0.47**Δ 17.38±0.17**组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 ALT/（U·L-1）8.06±0.74 10.59±1.13##8.82±0.45**8.57±0.48**8.39±0.54**9.27±0.41*

2.5 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏TG及血清TC、LDL-C、HDL-C 水平的影响 结果见表5。与正常组相比，模型组小鼠的肝脏TG 含量及血清TC、LDL-C 含量显著升高（P＜0.01），血清HDL-C 含量显著降低（P＜0.01）。与模型组相比，霍山石斛鲜品中、高剂量组和霍山石斛干品组小鼠的肝脏TG 含量及血清TC、LDL-C 含量显著降低（P＜0.01），血清HDL-C 含量显著升高（P＜0.05，P＜0.01）。与霍山石斛干品组相比，霍山石斛鲜品中、高剂量组小鼠的血清TC 含量显著降低（P＜0.01）。结果表明，霍山石斛鲜品能够明显改善慢性酒精性肝损伤小鼠的脂质蓄积及脂质代谢紊乱，且霍山石斛鲜品中、高剂量组优于霍山石斛干品组。

表5 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏TG 及血清TC、LDL-C、HDL-C 含量的影响（±s，n=9）Table 5 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the contents of TG in liver and TC，LDL-C，HDL-C in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表5 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏TG 及血清TC、LDL-C、HDL-C 含量的影响（±s，n=9）Table 5 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the contents of TG in liver and TC，LDL-C，HDL-C in serum of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，ΔΔP＜0.01

HDL-C/（mmol·L-1）1.57±0.05 1.09±0.13##1.16±0.12 1.28±0.09**1.32±0.13**1.22±0.11*组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 TG/（μmol·g-1）3.62±0.13 7.72±0.95##7.09±0.61 5.57±0.51**5.12±0.17**6.13±0.32**TC/（mmol·L-1）3.47±0.25 8.92±0.43##4.37±0.21**3.43±0.09**ΔΔ 3.37±0.12**ΔΔ 4.19±0.35**LDL-C/（mmol·L-1）0.67±0.09 1.41±0.18##1.29±0.11 1.02±0.09**0.96±0.07**1.14±0.07**

2.6 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏炎症因子水平的影响 结果见表6。与正常组相比，模型组小鼠肝脏的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平显著升高（P＜0.01）。与模型组相比，霍山石斛鲜/干品组小鼠肝脏的炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β 水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。与霍山石斛干品组相比，霍山石斛鲜品中、高剂量组肝脏的TNF-α、IL-1β 水平明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。结果表明，霍山石斛鲜品能够抑制慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏炎症因子水平，且霍山石斛鲜品中、高剂量组优于霍山石斛干品组。

表6 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏TNF-α、IL-6 及IL-1β 水平的影响（±s，n=9）Table 6 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of TNF-α，IL-6 and IL-1β in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表6 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏TNF-α、IL-6 及IL-1β 水平的影响（±s，n=9）Table 6 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of TNF-α，IL-6 and IL-1β in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与霍山石斛干品组比较，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01

IL-1β/（pg·mg-1）496.90±49.15 1 078.22±131.34##954.55±172.61*760.57±116.83**527.79±76.73**ΔΔ 808.84±89.36**组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 TNF-α/（pg·mg-1）8.35±0.18 8.97±0.09##8.81±0.09 8.41±0.10**Δ 8.35±0.18**Δ 8.70±0.17*IL-6/（pg·mg-1）933.14±69.90 1 327.51±87.71##1 245.16±52.29*1 054.61±36.11**1 011.76±63.29**1 166.67±34.65**

2.7 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏SOD、MDA 水平影响 结果见表7。与正常组相比，模型组小鼠肝脏中的SOD 活力显著降低（P＜0.01），MDA 含量显著升高（P＜0.01）。与模型组相比，霍山石斛鲜/干品组小鼠肝脏中的SOD 活力均显著升高（P＜0.05，P＜0.01），MDA 含量显著降低（P＜0.01）。结果表明，霍山石斛鲜品可提高慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏的抗氧化能力，降低脂质过氧化水平，减少氧化应激对肝脏的损伤。

表7 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏SOD、MDA 水平的影响（±s，n=9）Table 7 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of SOD and MDA in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

表7 霍山石斛鲜品对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏SOD、MDA 水平的影响（±s，n=9）Table 7 Effects of fresh Dendrobium huoshanense C. Z. Tang et S. J. Cheng on the levels of SOD and MDA in liver of mice with chronic alcoholic liver injury（±s，n=9）

注：与正常组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

MDA/（nmol·mg-1）0.55±0.02 1.72±0.05##0.79±0.04**0.73±0.07**0.69±0.06**0.77±0.03**组别正常组模型组霍山石斛鲜品低剂量组霍山石斛鲜品中剂量组霍山石斛鲜品高剂量组霍山石斛干品组剂量/（g·kg-1）--1.25 2.50 5.00 1.30 SOD/（U·mg-1）0.63±0.01 0.49±0.02##0.51±0.01*0.54±0.00**0.55±0.01**0.50±0.01*

3 讨论

近年来，随着人们生活压力加大和饮食结构的改变，由饮酒导致的酒精性肝病（ALD）发病率逐渐升高。目前我国的ALD 发病率已达6.1%，而全世界每年因饮酒而死亡的人数占慢性肝病死亡人数的5.3%，约300 万人[9]，疾病负担严重。目前ALD 的最佳治疗策略仍然是戒酒，亟待开发新的、更实用的方法来早期干预和治疗ALD。

石斛具有养阴清热、益胃生津之功效，全国高等院校教材《中药学》中记载：“石斛鲜者清热生津之功较干品为佳，故凡遇热病伤津、舌绛干燥、口渴思饮者，当用新鲜石斛[10]”，名老中医魏长春更是认为“非鲜石斛不用[11]”。可见石斛鲜品入药具有干品所不能及的效果，可能与鲜品石斛避免了干燥及煎煮过程中因水分流失、温度变化导致部分活性成分丢失有关。中药鲜用历史悠久，是传统中医药的重要组成部分，《中国药典》也将鲜石斛收入其中，明确其不可替代性[12]。现代研究[13-14]表明，霍山石斛多糖和霍山石斛水提取物对乙醇诱导的肝损伤具有明显的保护作用。因此，本研究通过复制慢性酒精性肝损伤小鼠模型，比较了霍山石斛鲜品及干品对ALD 的干预效果。

ALT、AST 是肝功能的血清标志物，是肝损伤最敏感的指标[15]。本研究结果显示，长期饮酒可影响小鼠的行为学表现和损害肝脏组织形态及功能，摄食量及体质量明显下降、肝脏指数显著升高，提示长期乙醇暴露会降低食欲和干扰机体对营养成分的吸收能力；其次，肝脏出现肝细胞弥漫性肿胀、细胞基本结构消失，血清ALT、AST 水平显著升高，说明肝细胞受损严重。霍山石斛鲜/干品干预后，小鼠的醉酒潜伏期显著延长，肝脏指数显著降低，肝组织紊乱及肝细胞弥漫性肿胀现象明显减轻，血清ALT、AST 活力均明显降低。提示霍山石斛鲜/干品均能够对抗乙醇导致的酒后行为学异常及肝损伤，具有预防醉酒的作用，但霍山石斛鲜品高剂量组的作用明显优于霍山石斛干品组。

ALD 发病机制复杂，尚未完全阐明，目前报道的脂质代谢失衡是ALD 的核心驱动因素之一[16]。长期过量饮酒，乙醇及其代谢产物会导致血液中HDL-C含量降低的同时引起LDL-C、TC 和TG 含量增加，从而出现常见的高血脂和脂肪肝的症状[17]。脂肪变性是肝脏对长期饮酒的最早反应，其特征是肝细胞内脂肪（甘油三酯、磷脂和胆固醇酯）蓄积[18]。其次，氧化应激与脂质过氧化已被认为是乙醇诱导肝损伤的主要机制之一[19]。健康个体能够保持自由基和抗氧化酶系统［如超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT），以及抗氧化剂如谷胱甘肽（GSH）、维生素C、E 等］之间的动态平衡[20]。饮酒后，乙醇在肝脏中代谢产生大量ROS，过量的ROS 不仅破坏细胞内氧化和抗氧化之间的平衡，而且ROS 还与多种生物物质发生反应。脂质物质与ROS 反应发生脂质过氧化，产生4-羟基壬烯醛和丙二醛（MDA，脂质过氧化终产物），可诱导多种形式的细胞死亡[21]。过量的肝脏脂质沉积和氧化应激还会导致肝脏炎症反应激活，并伴随着炎症介质如TNF-α、IL-1β、IL-6 等的表达增加，而促炎细胞因子TNF-α 及IL-1 表达增加被认为是ALD 发病机制中至关重要的一步[20]。本研究结果显示，霍山石斛鲜/干品能显著降低慢性酒精性肝损伤小鼠的肝脏TG、MDA、TNF-α、IL-6、IL-1β 水平，以及显著降低血清TC、LDL-C 水平，提高血清HDL-C 水平及肝脏SOD 活力；二者均能够明显改善慢性酒精性肝损伤小鼠的脂质蓄积及脂质代谢紊乱，提高抗氧化能力，降低脂质过氧化水平，抑制炎症因子水平，且霍山石斛鲜品高剂量组的作用明显优于霍山石斛干品组。

综上所述，霍山石斛鲜品能够明显改善慢性酒精性肝损伤小鼠的肝脏组织病理损伤，其作用与调节脂质代谢、抗氧化应激损伤及抑制炎症反应有关，且霍山石斛鲜品的干预效果优于干品药材。