承德市部分病死猪10 种主要病毒病原学检测

李晓丽，佟虎成，邱 晨

承德市动物疫病预防控制中心，河北承德 067000

近年来，随着生猪养殖业的快速发展，生猪疫病呈现出新的特点，主要表现为动物疫病种类繁多，老的疫病还未净化消灭，新的疫病不断出现，而且多种猪病混合感染的情况越来越普遍，发病率升高，猪病防控和净化工作面临巨大挑战。

猪圆环病毒病是由猪圆环病毒（PCV），主要是猪圆环病毒2 型（PCV2）引起的多种临床症状的总称，PCV2 是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征（PMWS）和皮炎与肾病综合征（PNDS）的主要病原[1]，猪圆环病毒病近年呈现逐年上升的发病趋势，河北各地市PCV2 感染率在65%～83%之间[2]，该病可引起患病猪只体质下降、腹泻、呼吸困难、消瘦等临床表现，导致患猪饲料转化率降低、生殖能力受到影响，造成严重的经济损失[3]，同时猪圆环病毒病是一种免疫抑制类疫病，可导致其他疫病的免疫失败，继发其他细菌和病毒感染，给生猪养殖业造成巨大的间接经济损失[4～6]。圆环病毒病是严重影响猪群健康和危害猪场生产的主要病毒病[7]，其单独感染症状一般不会比较严重，但混合感染或免疫刺激后，其致病性会提高。

猪细小病毒病是由猪细小病毒（PPV）引起的一种猪繁殖障碍性疫病，在全球许多国家广泛流行，主要表现为胚胎和胎儿的感染和死亡，特别是初产母猪发生死胎、畸形胎和木乃伊胎，母猪本身无明显的临床症状。猪细小病毒严重影响仔猪生长和母猪繁殖[8]，同时，猪细小病毒病也是一种免疫抑制类疫病，与圆环病毒病一样，会对养猪业造成巨大的间接性经济损失。

1 材料与设备

1.1 材料

1.1.1 检测病料

无菌采集河北省承德市各县区养殖场（户）病死猪组织样品，包括病死猪的肝脏、脾脏、肺脏、淋巴结、小肠等，按常规方法采集冷藏送检，共41 头病死猪样品。

1.1.2 主要试剂

TGuide 病毒DNA/RNA（磁珠法）提取试剂盒，购自天根生化科技有限公司；非洲猪瘟病毒荧光PCR 检测试剂盒，购自北京森康生物技术开发有限公司；猪圆环病毒2 型、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪蓝耳病病毒（经典型）、高致病性蓝耳病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒荧光PCR 检测试剂盒均购自石家庄圣博生物科技有限公司。

1.2 主要仪器设备

多功能组织研磨仪（Tissuelyser-24），Tguide S32 自动核酸提取仪，Roche Light Cycler 96荧光定量PCR仪，BHC-1300IIA2Ⅱ级生物安全柜。

2 实验方法

2.1 流行病学调查

调查病死猪免疫情况、发病日龄、主要临床症状、病理变化及用药情况等相关流行病学资料。

2.2 病毒核酸提取

将每头病死猪的组织样本合成1 份，加入锆珠和1 mL 1×PBS 溶液，放入多功能组织研磨仪中研磨，离心取上清待测。

按照提取试剂说明书，提取上述上清液中的病毒DNA 或RNA。提取的病毒DNA 或RNA 暂存于4 ℃冰箱中，尽快检测完成。

2.3 病毒的荧光PCR 检测

按照检测试剂盒说明书，设定不同病种的反应程序，于Roche Light Cycler 96 荧光定量PCR 仪中进行检测。

3 结果

3.1 主要流行病学特点

承德市2022年生猪免疫猪圆环病毒疫苗的免疫率仅为12.54%，本次检测的41 头病死猪中免疫猪圆环病毒疫苗的有6 头，免疫率为14.63%，整体免疫率较低，本次检测的病死猪未有免疫过猪细小病毒疫苗的。病死猪为集中在40 ～200日龄的生猪，临床症状主要表现为食欲不振甚至采食废绝、消瘦、腹泻、发热、咳嗽、关节肿大和呼吸困难，个别病死猪臀部和腹部有少量出血点。对部分病死猪进行了剖检，主要表现为肺淤血和水肿。曾用抗生素对个别病死猪进行治疗，但治疗效果不明显。

3.2 实验室病毒核酸检测结果

对采集的41 头病死猪组织样品，采用荧光定量PCR 方法进行检测，检测了非洲猪瘟病毒、猪圆环病毒2 型、猪伪狂犬病病毒、猪瘟病毒、猪细小病毒、猪蓝耳病病毒（经典型）、高致病性蓝耳病病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪轮状病毒共10 个项目，检测到猪细小病毒核酸阳性猪2 头，阳性率为4.88%，猪圆环病毒2 型核酸阳性猪27 头，阳性率为65.85%，猪圆环病毒2型和猪细小病毒混合感染2 头，占总阳性的7.41%（2/27），其他病种未检出核酸阳性样本。详见表1 和表2。

表1 猪病病原学检测结果统计表

表2 混合感染情况统计表

从表中可以看出，感染了猪细小病毒的病死猪均同时感染了猪圆环病毒2 型，导致其致病性增强。

4 讨论

通过本次对河北省承德市部分病死猪10 种主要病毒病的病原学检测，发现河北省承德地区生猪圆环病毒2 型的感染率较高，达到了65.85%，笔者认为这主要与圆环病毒的疫苗免疫率较低有关，同时也发现，即使免疫过圆环病毒疫苗的生猪，也检测到了圆环病毒2 型核酸阳性，最终发病死亡的，这可能与圆环病毒基因突变较快，疫苗毒株与实际流行毒株不匹配有关，所以疫苗毒株的选择应在流行病学调查的基础上，以实际流行毒株为依据，选择相适应的疫苗毒株。

通过本次检测发现，承德地区猪细小病毒有一定的感染，与猪圆环病毒2 型混合感染占总阳性的7.41%，但是未发现临床典型的流产和死胎等症状，主要影响的是仔猪的生长。未检出其他疫病感染情况，说明可能整体防控措施比较到位，也可能样品数量有限或采样等原因，未能检测到相应病毒核酸。

猪圆环病毒和猪细小病毒均为免疫抑制类疫病，可导致猪体的免疫抑制[8]，进而导致其他疫病的免疫失败，降低机体的抵抗力，继发细菌或病毒感染，加重疫情，造成严重的经济损失。

目前，对两种病毒病的治疗主要是采用注射抗生素的方法，但抗生素主要作用是防止或治疗继发感染，也就是说，对于病毒病没有很好的治疗药物，仅是对症治疗。因此，接种疫苗是现阶段防控猪细小病毒病和猪圆环病毒病的主要且有效的手段。猪细小病毒的血清型比较单一，且具有较高的免疫原性[9]，因此接种疫苗是防控猪细小病毒的有效措施。市售猪圆环病毒疫苗种类繁多，因为其基因突变速度较快的原因，应根据实际流行毒株选择疫苗种类。

在生猪生产过程中，应加强饲养管理，做好生物安全措施，采用综合防控措施，提高猪只抵抗力，有效减少疫病的发生，进而提高养猪业经济效益。